Abstract

miR-210 é o hypoxamir mestre que geralmente apresenta propriedades oncogênicas na maioria dos tumores sólidos humanos, incluindo câncer de bexiga (BC). No entanto, permanece desconhecido sobre o significado clínico dos níveis circulantes de miR-210 no BC. Neste estudo, verificou-se que o soro miR-210 foi regulado para cima em pacientes com BC, e os níveis séricos de miR-210 aumentou com o avanço estágio e grau. Além disso, soro expressão de miR-210 foi encontrada para ser significativamente reduzido em amostras pós-operatórias emparelhados e elevado na maioria dos pacientes com BC recaída. Tomados em conjunto, nossos dados sugerem que o soro miR-210 poderia ser um potencial biomarcador não invasivo para o rastreio, a previsão e monitoramento BC

Citation:. Yang Y, Qu A, Liu J, Wang R, Liu Y, Li G , et ai. (2015) Serum miR-210 Contribui para a detecção de tumores, Prediction Stage e Vigilância dinâmico em Doentes com cancro de bexiga. PLoS ONE 10 (8): e0135168. doi: 10.1371 /journal.pone.0135168

editor: Ratna B. Ray, Saint Louis University, United States |

Recebido: 02 de junho de 2015; Aceito: 17 de julho de 2015; Publicação: 07 de agosto de 2015

Direitos de autor: © 2015 Yang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este estudo foi apoiado pela National Science Foundation Natural da China (No. 81271916); Província de Shandong Natural Science Foundation da China (Nos ZR2010H004, ZR2013HQ063 e ZR2014HP001.); Fundos de pesquisa fundamentais da Universidade de Shandong (No. 2014QLKY03); Fundo de Investigação para o Programa de Doutorado de Educação Superior da China (No. 20120131110055) e Nacional-chave clínicos Especialidades Médicas Foundation. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de bexiga (BC), a neoplasia maligna mais comum do trato urinário em todo o mundo, resulta em morbidade e mortalidade significativas [1]. No momento do diagnóstico inicial, cerca de 70% de pacientes com CM ter cancros confinados ao epitélio ou tecido conjuntivo subepitelial (cancro da bexiga não músculo-invasivo, NMIBC, consistem em fases de Ta, Tis e T1). Mais de 50% destes cancros se repetem e 15-20% de progresso para a forma músculo-invasivo (CINM, encena T2, T3 e T4) durante o acompanhamento [2]. Certamente esta alta taxa de recorrência da doença requer vigilância ao longo da vida. Actualmente, o teste mais comumente utilizado para a detecção não invasiva de BC é citologia de urina. No entanto, este teste tem uma sensibilidade limitada, especialmente para a detecção de lesões de baixo grau [3-6]. biópsia guiada por cistoscopia para avaliação histológica pode fornecer alta precisão do diagnóstico, mas é invasivo e caro, e inconveniente para o rastreio geral do cancro. Portanto, existe uma necessidade de novos marcadores que podem ajudar na detecção e vigilância de BC não-invasivo.

microRNAs (miRNAs, Mirs) são uma nova classe de endógeno, pequenos não codificam-oligonucleotídeos de RNA, que poderiam regular negativamente a expressão do gene por direccionamento a 3 ‘não traduzida (3’-UTR) do [7] ARNm correspondente. evidência cumulativa sugere que miRNAs são frequentemente desregulado em cancros humanos e exercer efeitos significativos no desenvolvimento do cancro [8, 9]. Circulating microARNs, originários de tecidos de tumor primárias, de forma estável são detectáveis ​​no soro /plasma [10-12]. Vários estudos têm demonstrado que miARNs circulantes podem ser utilizados como novos biomarcadores em cancros [13-15]. Recentemente, alguns microARNs circulantes, tais como o miR-21, o miR-221, o miR-375, etc, foram propostos como biomarcadores para a presença do tumor ou resposta ao tratamento com as terapias locais e sistémicas [9, 16]. No entanto, o uso de miARNs como biomarcadores, minimamente invasivas baseados no sangue circulante de doentes com BC é ainda relativamente pouco explorada.

miR-210, o mestre hypoxamir, é regulado positivamente na maior parte dos tumores sólidos humanos e exibe geralmente oncogénica propriedades [17, 18]. Estudos recentes mostraram que o miR-210 foi regulada positivamente em tecidos BC [19, 20], e a sobre-expressão de miR-210 foi associada a uma baixa sobrevivência, promoveu o crescimento celular e migração, e a apoptose inibida de células BC [21]. A expressão e o significado clínico da circulando o miR-210 em BC permanece claro neste momento. Tem sido demonstrado que circulantes elevados de miR-210 pode servir como um biomarcador da presença do tumor e a resposta ao tratamento com drogas terapêuticas em pacientes com cancro da mama [22]. À luz destas observações, postulamos miR-210 pode ser um candidato para a exploração como biomarcadores de BC em circulação e pode fornecer informação preditiva para melhorar o tratamento do câncer.

Neste estudo, nós nos concentramos nossa análise sobre o impacto clínico de circulação de miR-210 na detecção e vigilância de BC, com a hipótese de que circula miR-210 pode servir como um biomarcador minimamente invasiva para pacientes BC. Descobrimos que pré-operatórios miR-210 níveis de expressão no soro são úteis para detectar BC, prever invasão muscular e grau histológico, e refletem a dinâmica de tumor.

Materiais e Métodos

Pacientes e amostras

o estudo incluiu 168 pacientes com BC recém-diagnosticados no Departamento de Cirurgia Urológica do Hospital Qilu, Universidade de Shandong (Jinan, China) entre 2006 e 2010. espécimes histológicos de todos os pacientes foram revisados ​​para confirmar o diagnóstico de BC, e os tumores foram encenado e classificados de acordo com a classificação TNM 2002 e o sistema de classificação da OMS 1973, respectivamente. Sangue foram coletadas de 168 pacientes BC antes da cirurgia. amostras de sangue pós-operatórias emparelhados foram coletados de 40 pacientes um mês após a cirurgia, e amostras de sangue de grupo recaída desemparelhados foram coletados de 30 pacientes. Os dados clínico-patológicos de pacientes, incluindo sexo, idade, diferenciação histológica e estágio do tumor foram coletados retrospectivamente. Além disso, 104 controles saudáveis ​​que visitaram o hospital para um check-up médico foram incluídos neste estudo. controles normais foram selecionados com idade e sexo proporções semelhantes aos pacientes com câncer pré-operatórios, e eles foram testados para garantir que eles estavam dentro da faixa normal de todos os achados laboratoriais e não tinha histórico de câncer. A recolha e análise de todas as amostras foram aprovados pelo Comitê de Ética da Qilu Hospital, Universidade de Shandong, e consentimento informado por escrito foi obtido de cada paciente e controles.

amostras de sangue total foram coletadas de controles e pacientes por punção venosa. O soro foi separado dentro de 1h de recolha de sangue por centrifugação a 10.000 rpm durante 10 min, para remover completamente os detritos celulares. As amostras de soro foram então transferidas para tubos de RNase /DNase-livre e armazenado a -80 ° C até análise posterior. amostras de tecidos fixados em formalina e embebidos em parafina (FFPE) foram coletadas de pacientes que foram submetidos a cistectomia radical. Todas as amostras de FFPE foram armazenadas à temperatura ambiente até à sua utilização.

cultura celular

BC linhas celulares (T24) e 5637 e uma linha celular humana uroepiteliais (SV-HUC-1) foram adquiridos da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EUA). 5637 e T24 foram cultivadas em meio RMPI1640 contendo 10% de soro fetal bovino (FBS; Gibco, Carlsbad, CA), enquanto que SV-HUC-1 foi cultivada em de Dulbecco modificado por Eagle Médium /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). Todas as linhas celulares foram incubadas a 37 ° C numa atmosfera humidificada contendo 5% de dióxido de carbono.

Protocolo para a detecção de miARN no soro

O ADNc de miARN no soro foi sintetizado com o One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japão). A mistura de reacção (20 ul) continha 10 ul de 2 × miARN tampão de reacção da mistura, 2ul de miARN Primescript RT mistura de enzimas, 2 ul de 0,1% de BSA e 3 uL de soro misturado com 3 uL de tampão de soro (2,5% de Tween 20, 50 mmol /L de Tris e 1 mmol /L de EDTA [23], e foi incubada a 37 ° C durante 60 min, a 85 ° C durante 5s e depois a 4 ° C durante 60 min. Após centrifugação a 10 000 rpm durante 10 min a 4 ° C, o ADNc foi armazenada a -20 ° C até à sua utilização.

o qRT-PCR para miARNs foi realizada em volumes finais de 25 uL usando o Kit de SYBR PrimeScript miARN qPCR (Takara Bio Inc., Shiga, Japão) em ABI Prism 7500 Sistema Sequence Detection (Applied Biosystems, Foster City, CA). Os reagentes de reacção continha 12.5μl de SYBR Premix Ex Taq II, 0,5 � de DyeII, 2 ul de 5mM iniciador directo (Ribobio, Guangzhou, China), 1 ul de 10 � Uni-miR qPCR iniciador e 2.0μl de ADNc molde. o volume foi ajustado com H 2 o isenta de ARN. a reacção de transcrição reversa foi realizada em triplicado para remover quaisquer valores aberrantes. de acordo com a nossa investigação anterior, a combinação de miR-16-5p e miR- 193a-5p foram utilizadas como o gene de referência [24]. E, miARN expressão foi registada como a razão contra a média geométrica de dois genes de referência. Além disso, foi selecionado o mínimo da amostra expressão miR e defina o valor desta amostra expressão como 1. Os níveis de todas as outras amostras de expressão foram igual à proporção relativa.

Isolamento de RNA, síntese de cDNA e quantitativa em tempo real da reacção em cadeia da polimerase (qRT-PCR)

extracção de RNA total a partir de células e amostras de meio de cultura foram realizados utilizando o reagente TRIzol (Ambion, Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA), ao passo de extracção de ARN a partir de formalina fixa e (FFPE) amostras embebidos em parafina foi realizada utilizando os kits de isolamento de miRNA (Bioteke, Pequim, China). Todas as manipulações do ARN foram realizadas sob condições isentas de RNase. O ARN isolado foi guardado a -80 ° C até à sua utilização.

O ADNc foi sintetizado utilizando iniciadores específicos do gene (Ribobio, Cantão, China) e o kit de M-MLV RT (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) num volume de reacção de 20 uL. Os reagentes de reacção de RT molde continha 1 mg de ARN, 1 ul 10 mM mistura de dNTP, 2 ul de DTT 0,1 M, tampão de primeira cadeia de 4 ul e 1 ul de 40 U /ml de inibidor de RNase. O volume foi ajustado com H 2 O isenta de ARN. A reacção de transcrição reversa foi realizada em triplicado para remover quaisquer valores aberrantes. miARN expressão foi avaliada por meio de qRT-PCR e um sistema ABI PRISM 7500 Sequence Detection (Applied Biosystems, Foster City, CA). As alterações vezes na expressão de miARN foram determinados usando o método 2-ΔΔCT [10] com o ARN U6 pequena nuclear (U6) como o gene de referência para normalizar os dados. Além disso, definimos o valor da expressão da linha de células uroepiteliais humanas (SV-HUC-1) como 1 e os níveis de todas as outras amostras eram de expressão igual à razão relativa.

A análise estatística

a SPSS (Statistical Package for social Sciences) pacote de software, versão 18.0 (Chicago, IL, EUA) e MedCalc 9.3.9.0 (MedCalc, Mariakerke, Bélgica) software foram utilizados para analisar todos os dados. Em primeiro lugar, foi utilizado o teste de Kolmogorov-Smirnov para determinar a distribuição dos dados em cada grupo. Os dados são apresentados como a média ± desvio padrão (DP) ou mediana (gama interquartil) quando os valores foram anormalmente ou normalmente distribuída, respectivamente. As diferenças estatísticas entre os grupos foram testadas usando o teste U de Mann-Whitney, Wilcoxon t-teste, o teste t de Student, ou um teste de Kruskal-Wallis, conforme o caso. operating characteristic (ROC) do receptor foram estabelecidos para discriminar os indivíduos com ou sem BC. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativa apenas quando P 0,05. -comparações múltiplas foram considerados estatisticamente significativos quando os valores de P foram inferiores a 0,05 /(número de contrastes realizados) de acordo com o teste de comparações múltiplas de Bonferroni.

Resultados

miR-210 expressão em BC humana tecidos e linhas celulares BC

Para confirmar altas miR-210 níveis previamente relatados de expressão em tecidos BC [25], que examinamos miR-210 expressões em 40 pares de tecidos BC humanos e correspondentes tecidos não cancerosos utilizando qRT- PCR. Os resultados mostraram que a expressão de miR-210 BC nos tecidos foi significativamente regulada positivamente em comparação com o que em tecidos adjacentes normais (P 0,001, Figura 1A). Além disso, foi investigada a expressão de miR-210 em linhas de células humanas (T24 BC e 5637) e uma linha celular humana uroepiteliais (SV-HUC-1). Os resultados mostraram que os níveis de expressão de miR-210 em linhas de células CB foram significativamente mais elevada do que na linha de células uroepiteliais humanas (Fig 1B).

(a) Comparação de miR-210 em níveis de 40 pares de BC tecidos primários e tecidos normais adjacentes. O nível de miR-210 expressão foi significativamente maior nos tecidos BC primária do que em tecidos normais adjacentes (

P Art 0,001). (B) Os níveis de expressão de miR-210 em linhas celulares BC foram maiores do que em uma linha de células uroepiteliais humano.

miR-210 expressão no soro de pacientes com BC

A Os níveis de expressão de soro de miR-210 em 168 pacientes aC e 104 controles foram examinados através de qRT-PCR. A fim de validar a estabilidade dos genes de referência, foram comparados os níveis de expressão de miR-16-5p, miR-193a-5p e combinação de miR-16-5p e miR-193a-5p (média geométrica) e em pacientes com CM controles normais. Não havia nenhuma evidência de expressão diferencial de miR-16-5p, miR-193a-5p e combinação de miR-16-5p e miR-193a-5p entre os pacientes BC e controles saudáveis ​​(S1 FIG). E os resultados indicaram que os níveis de miR-210 foram significativamente regulada positivamente em pacientes BC em comparação com controlos saudáveis ​​(P 0,0001, figura 2A). Representação dos dados usando uma trama ROC mostraram forte separação entre ambos os grupos, com uma AUC de 0,898 (IC 95%, 0,855-0,931) (Fig 2B). Usamos curvas ROC com o índice Younden para detectar valores que pudessem discriminar doentes com cancro da bexiga dos controles normais [26]. O valor de corte ótimo foi indicado em 22.37, com uma sensibilidade de 97,6% (IC 95%, 94,0% -99,3%) e uma especificidade de 69,2% (IC 95%, 59,4% -77,9%)

.

(A) O soro expressão de miR-210 em 168 pacientes BC e 104 controles. Os limites superiores e inferiores das caixas e as linhas no interior das caixas indicam os percentis 75 e 25 e da mediana, respectivamente. As barras horizontais superiores e inferiores representam os percentis 90 e 10, respectivamente. (B) Receiver-operating characteristic análise (ROC) do soro miR-210 para detectar pacientes BC. A AUC de 0,898 (IC 95% ,855-,931) indica bom poder discriminatório.

Os resultados estatísticos mostraram que o soro miR-210 expressão em pacientes BC foi significativamente correlacionada com o estádio T (P = 0,000) e M fase (P = 0,040). Não houve associações significativas entre soro expressão de miR-210 e sexo do paciente, idade, fase N ou Grau (todos P 0,05). (Tabela 1)

O papel do soro de miR-210 na previsão de estágio do tumor em pacientes com BC

em uma análise mais aprofundada, dividimos os pacientes BC em NMIBC e CINM, e constatou que o soro miR-210, tanto NMIBC e MIBC foram significativamente regulada em comparação com os controles (

P Art 0,0001 e

P Art 0,0001, respectivamente). Mais importante ainda, foi observada uma diferença significativa na expressão sérica de miR-210 entre os dois grupos de pacientes com NMIBC e MIBC (

P Art 0,0001, Fig 3A). A AUC do miR-210 utilizado para distinguir NMIBC (Ta-T1) e MIBC (T2-T4) pacientes dos controles foram 0,858 (IC de 95%, 0,800-0,904) e 0,938 (IC de 95%, 0,893-0,968), respectivamente (Fig 3B e 3C). E soro de miR-210 pode diferenciar de forma fiável pacientes NMIBC de pacientes CINM, como evidenciado por um valor de AUC de (IC de 95%, 0,662-0,800) 0,736 (Fig 3D).

(A) O soro de miR-210 expressão em 84 NMIBC, 84 CINM e 104 controles. Todas

P Art 0,05 /3. curvas (B) para o soro ROC miR-210 para NMIBC grupo (n = 84) versus indivíduos saudáveis ​​(n = 104). AUC = 0,858 (IC 95% 0,800-0,904). (C) As curvas ROC para o soro de miR-210 para o grupo de MIBC (n = 84) versus indivíduos saudáveis ​​(n = 104). AUC = 0,938 (IC 95% ,893-0,968). curvas (D) ROC para soro miR-210 para o grupo NMIBC (n = 84) vs grupo CINM (n = 84). AUC = 0,736 (IC 95% 0,662-0,800).

Avaliação de saber se o soro miR-210 pode controlar a dinâmica de tumor

Foram selecionados 10 pacientes BC com a mais alta de soro miR-210 expressão (alta grupo) e outros 10 pacientes BC com o menor soro expressão de miR-210 (baixo grupo). Os correspondentes tecidos FFPE destes pacientes foram recolhidos e, em seguida, as expressões de miR-210 foram avaliados. Como resultado, em 9 pacientes do grupo alto, o miR-210 de expressão em tecidos FFPE BC apresentou maior (90%) do que nos pacientes do grupo de baixo (Fig S2). Além disso, foram examinados os níveis circulantes de expressão de miR-210 em amostras de soro pré- e pós-operatórias emparelhados a partir de 40 pacientes submetidos a cistectomia BC que curativa, e descobriram que os níveis de soro de miR-210 foram significativamente reduzidas no grupo de pós-operatório ( P 0,0001) (Fig 4A). Examinámos também os níveis séricos de miR-210 em desemparelhado pré-operatória (n = 168), pós-operatório (n = 40), e recaída (n = 30) amostras de soro, e descobriram que o nível de miR-210 foi significativamente reduzido no grupo de pós-operatório em comparação com a que no grupo pré-operatório (P 0,0001). O nível de soro de miR-210 no grupo de recaídas foi significativamente aumentada (P 0,0001) e exibiu um nível semelhante ao que nas amostras pré-operatória (Fig 4B). Tomados em conjunto, os resultados demonstraram que os níveis circulantes de miR-210 pode refletir a dinâmica de tumor em pacientes BC.

(A) Comparação de soro miR-210 expressões entre as amostras pré e pós-operatório de pacientes BC . Os níveis séricos de miR-210 foram significativamente reduzidos em amostras pós-operatório em comparação com aqueles emparelhados em amostras pré-operatório (

P

0,0001). grupos de soro (B) Gráfico de dispersão de miR-210 níveis no pré-operatório (n = 168), pós-operatória (n = 40) e recaída (n = 30).

Avaliação monitorização dinâmica de tumor utilizando a expressão de miR-210 de meio de cultura em linhas de células BC

tem sido relatado que células de tumor primário pode secretar miARNs em ambientes envolventes, incluindo células adjacentes e o fluxo de sangue [27]. Portanto, temos a hipótese de que as células cancerosas cultivadas pode também secretam vários miRNAs associados ao câncer em meio circundante, simulando a influência mútua entre as células cancerosas primárias e do sangue adjacente. Para confirmar a hipótese, primeiro examinaram a expressão de miR-210 de meio de cultura em linhas celulares BC (5637 e T24) e encontrou miR-210 foram expressas em meio de cultura de ambos os 5637 e T24 células. Em seguida, plaqueadas 5637 células T24 e com números diferentes e recolhido a forma em vários pontos de tempo para investigação detalhada. Como resultado, o aumento das tendências da expressão de miR-210 foram confirmados em ambas as maneiras Number-célula e tempo-dependente do curso (figura 5). Estes resultados indicam que o miR-210 pode ser libertado a partir de células de tumor primário da bexiga para o ambiente circundante, o que implica que o soro de miR-210 pode ser originário a partir de células BC primário e o seu nível de expressão de soro poderia reflectir dinâmica de tumor de doentes de cancro com BC.

tendências Aumento foram confirmados em meio celular em ambos os modos numeração celular e tempo-dependente do curso.

Discussão

Muitas alterações genéticas e epigenéticas são encontrados para estar envolvido na tumorigênese e progressão de vários cancros. Os relatórios anteriores identificaram tumorais alterações específicas para ácidos nucleicos no sangue dos pacientes, e mostrou o valor potencial de ácidos nucleicos /soro de plasma como novos biomarcadores não invasivos em pacientes com cânceres [28, 29]. Particularmente, microRNAs provenientes de células cancerosas têm sido provado ser estável e facilmente detectados no plasma ou soro de pacientes com vários tipos de câncer, o que poderia espelham o padrão de expressão nos tecidos neoplásicos [10, 11]. Mas, na realidade, apenas um número relativamente pequeno miARNs que são abundantemente expressas em células de cancro são detectáveis ​​na circulação [30], e cerca de 30% dos miARNs libertados não se espelham os padrões das células cancerosas específicas [31] expressão. Estes relatórios sublinham a importância de encontrar romance microRNAs como biomarcadores para os cânceres de circulação.

miR-210 é o microRNA mais consistente e robusta induzida sob hipóxia e, geralmente, apresenta propriedades oncogênicas em vários tumores [32, 33]. A hipoxia é uma característica comum de muitos tumores sólidos, incluindo aC, e está implicada na regulação de diversos genes. Estudos recentes demonstraram miR-210 foi regulada nos tecidos BC [19, 20]. Neste estudo, em primeiro lugar, que confirmou os mais elevados de miR-210 expressões em tecidos e linhas de células BC do que em tecidos normais adjacentes e uma linha celular humana uroepiteliais. Então, nós nos concentramos sobre o significado clínico de circulação de miR-210 no BC. Descobrimos que ele foi significativamente maior em pacientes com CM que em voluntários saudáveis, ea AUC para discriminar BC dos controles saudáveis ​​foi de 0,898, com uma sensibilidade de 97,6% e uma especificidade de 69,2%. Este estudo é o primeiro a demonstrar o papel potencial de soro de miR-210 para a detecção de BC. Descobrimos também que a alta expressão de miR-210 no soro foi associada com o estádio T avançado e presença de metástase. Estes resultados foram consistentes com outros relatórios que a alta expressão de miR-210 no tecido BC foi associado com a agressividade músculo-invasivo [19, 20].

Outras pesquisas mostraram miR-210 níveis poderia não só distinguir pacientes NMIBC de saudável controlar os pacientes, mas também CINM de NMIBC com valor de AUC de 0,736. No entanto, o relativamente baixo AUC e a uma considerável sobreposição nas distribuições de soro de miR-210 em NMIBC MIBC e indicam que o soro de miR-210 não pode ser utilizado para diferenciar entre exacta de MIBC e NMIBC. No entanto, o soro de miR-210 pode servir para avaliar a probabilidade relativa de BC-invasiva do músculo, na ausência de biomarcadores circulantes mais fiáveis. Assim, poderia ser útil no pré-operatório prevendo estágio do tumor, com a esperança de que tal conhecimento poderia guiar a escolha terapêutica.

Nós também investigou se soro miR-210 níveis de expressão poderia refletir a dinâmica de tumor em BC. A comparação entre a expressão de miR-210 em soro emparelhado e tumores primários revelou que níveis elevados de miR-210 representado expressões mais elevados na maioria dos casos de tecidos primários BC. miR-210 níveis também foram comparados em amostras pareadas de soro obtidas antes e após a cirurgia curativa, que apresentaram significativamente redução no pós-operatório. E os níveis de soro de miR-210 a partir de doentes com recidiva BC foram regulada e atingiu os níveis de que, em pacientes pré-operatórios. Além disso, determinou-se o nível de miR-210 em meio de cultura poderia refletir o status de linhas celulares BC e pode ser lançado a partir de células cancerosas. E os nossos dados demonstraram claramente que os níveis de miR-210 em meio de cultura de linhas celulares de BC aumentou significativamente em ambos os modos número- celular e tempo-curso-dependentes, enquanto os níveis de miR-210 em meio de cultura da linha de células uroepiteliais humanas permanece inalterada (dados não mostrados). Estes resultados indicaram que o nível de expressão de soro de miR-210 pode ser reflectora de dinâmica de tumor e pode monitorizar o estado do tumor.

Embora o nosso ensaio de corrente podem ser potencialmente úteis para a detecção AC, houve uma limitação do uso de miR- 210 como um biomarcador único para o diagnóstico de BC. Circulating expressão de miR-210 também foi descrito em outros cancros sólidos, tais como cancros da mama [22], do cancro do rim [34], e cancro pancreático [35]. Portanto, pode ser um desafio para discriminar se circulantes elevados de miR-210 de nível está especificamente relacionado com a própria BC ou se este é apenas um fenómeno comum que se manifesta como um resultado de perturbações na resposta imune do hospedeiro durante a progressão de qualquer tipo de cancro [36] . Nós abordou esta questão, demonstrando que existe uma correlação positiva significativa entre o tecido do tumor primário e os níveis séricos de miR-210 e que o soro miR-210 níveis caíram no pós-operatório em um subgrupo de pacientes, destacando a especificidade do miR-210 como um biomarcador específico para BC.

Em conclusão, nossos resultados fornecem evidências convincentes de que soro miR-210 pode ser usado como um biomarcador não invasivo para o rastreio, prever palco e monitoramento BC. Este conceito pode ser incorporada em decisões clínicas no futuro validação pendente não muito distante, em grande escala estudos prospectivos.

Informações de Apoio

S1 Fig. Os valores Ct de miR-16-5p, miR-193a-5p, combinação de miR-16-5p e miR-193a-5p em pacientes BC e controles saudáveis ​​(todos os

P Art 0,05).

Nenhuma diferença significativa foi encontrada dentro de 3 genes de referência em ambos os grupos

doi:. 10.1371 /journal.pone.0135168.s001

(TIF)

S2 Fig. Comparação de miR-210 níveis no soro e correspondentes tecidos de câncer

doi: 10.1371. /Journal.pone.0135168.s002

(TIF)