Abstract

Nós relatamos (

PLoS One

6 (12 ): e28670, 2011) que a activação da sinalização de c-Met em modelos celulares de LNCaP e de xenoenxerto ósseas metastáticas RANKL que sobre-expressam o aumento da expressão de RANK, RANKL, c-Met, e fosforilada de c-Met, e a sinalização a jusante mediada. Nós confirmamos a importância da rede de sinalização mediada por RANK no câncer de próstata humano clínica (PC) tecidos resistentes a castração. Neste relatório, foi utilizada uma técnica de marcação de pontos quânticos multiespectral para rotular seis RANK e c-Met mediadores da via de sinalização convergente simultaneamente em formalina parafina fixo (FFPE) amostras de embutidos de tecido, quantificar a intensidade de cada expressão ao nível sub-celular e investigada a sua utilidade potencial como preditores de sobrevida do paciente em homens caucasianos-americano, Africano-americanos e chineses. Descobrimos que RANKL e neuropilina-1 (NRP-1) expressão prediz a sobrevivência dos caucasianos-americanos com o PC. A pontuação de Gleason ≥8 combinado com a expressão p-c-Met nuclear prediz a sobrevivência em pacientes PC Africano-Americano. Neuropilin-1, p-NF-kB p65 e VEGF são preditores para a sobrevivência global dos homens chineses com PC. Estes resultados suportam coletivamente diferenças inter-raciais em redes de sinalização celular que podem predizer a sobrevida de pacientes de PC

Citation:. Hu P, Chung LWK, Berel D, Frierson HF, Yang H, Liu C, et al. (2013) Convergent rank e c-Met-Mediated Sinalização Componentes prever a sobrevida de pacientes com câncer de próstata: Um Estudo Comparativo Inter. PLoS ONE 8 (9): e73081. doi: 10.1371 /journal.pone.0073081

Edição: Natasha Kyprianou, da Universidade de Kentucky College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 03 de julho de 2013; Aceito: 16 de julho de 2013; Publicação: 16 de setembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Hu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte por NIH2 P01CA 98.912, NIH1 R01 CA122602 e PCF Challenge Award e BOG Endowed Cancer Research Chair para LWKC. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Após a implementação do antígeno (PSA) de triagem específico da próstata, cancro da próstata (PC) diagnóstico tornou-se muito mais comuns. Uma vez que um de cada 8-10 homens diagnosticados com PC morre de doença, é importante desenvolver preditores eficazes para seleccionar aqueles que necessitam de ser tratados e evitar o tratamento desnecessário [1], [2]. Ao longo das últimas décadas, muitos biomarcadores preditivos, quer associado com tecidos ou em fluidos biológicos, têm sido utilizados para diferenciar indolente de formas agressivas de PC. Estes marcadores são categorizados amplamente como supressores de tumores, oncogenes, factores de transcrição, e reguladores do metabolismo celular, e fenótipos, tais como a proliferação celular, apoptose, invasão, migração e metástase [2], [3]. Nós combinamos modelos de cultura celular com relação linhagem,

ou seja

, que compartilham o mesmo fundo genético, mas diferem na sua agressividade, com modelos animais que apresentam variabilidade em sua capacidade de invasão intrínseco e potencial metastático para desenvolver vias de sinalização celular relevantes estreitamente imitando os fenótipos e comportamentos de PC humana clínica. Foi realizado um estudo comparativo usando tecidos clínicos PC associados com a sobrevivência conhecida paciente para testar a hipótese de que a expressão de certos biomarcadores rede de sinalização celular encontrado em modelos animais de condução células PC para desenvolver óssea letal e metástases de tecido mole pode ser usado como biomarcadores para prever a progressão e sobrevida de pacientes com PC. Para buscar uma melhor compreensão dos potenciais diferenças inter-raciais de sinalização celular redes, testamos a hipótese de que diferentes rank e c-Met-mediada componentes de sinalização celular a jusante podem prever a sobrevivência de pacientes com câncer de próstata com diferentes origens raciais.

que anteriormente relatado que a progressão letal PC para o osso e dos tecidos moles metástases é determinado pela propriedade osteomimetic de células PC [4], [5]. Descobrimos que os factores solúveis, tais como β2-microglobulina (β2-M) e activador do receptor do ligando NF-kB (RANKL) pode conduzir PC e outras células de cancro humano a sofrer epitelial-a-mesenquimal transição (EMT) e conferem fenótipos agressivos incluindo invasão local e metástases à distância [6] – [12]. Entre as vias de sinalização celular foi estudada a activação da sinalização de RANKL-RANK foi de particular interesse porque esta via de sinalização foi activado em ambos os modelos animais e amostras de PC clínicos [8], [12], e a segmentação de RANKL com um anticorpo anti-RANKL , denosumab, tem sido altamente eficaz em bloquear as lesões ósseas líticas associadas com homens tratados com a terapia de privação de androgénio [13]. sinalização RANKL-RANK também foi encontrado para ser envolvido na expansão de células estaminais do nicho durante o desenvolvimento dos órgãos sensíveis-hormona [14], [15]. Observou-se, em ambos os modelos celulares e animais de LNCaP e Arcap que um “ciclo vicioso” de sinalização RANKL-Rank é responsável por conferir a capacidade destas células para crescer e metastizar para o osso e tecidos moles em ratinhos, através da indução de EMT, locais invasão e metástases distantes [5], [8], [12]. Por geneticamente inativação de RANK ou receptor c-Met, que anulou completamente a capacidade dessas células de câncer de metástase para os ossos e tecidos moles [16]. Nós descobrimos que através de RANKL-RANK sinalizar uma série de factores de transcrição de genes alvo e foram reguladas em coordenação, resultando numa alteração dos processos celulares fundamentais das células cancerosas. Notavelmente, verificou-se que a sinalização de RANKL-RANK promove a expressão de RANKL, RANK, e c-Met através do aumento da expressão de factores de transcrição de c-Myc /Max [16]. Em conjunto com a activação da sinalização de RANKL-RANK, nós também detectou um aumento da expressão de VEGF em resposta a factores de transcrição HIF-1α elevadas [6]. O VEGF é um factor pró-angiogénico fundamental que induz a proliferação e migração de células endoteliais dentro da vasculatura tumoral [17]. expressão aberrante de VEGF e seus receptores está associada com mau prognóstico que se manifesta por aumento da vascularização do tumor, chemoresistance, invasão tumoral local e metástases à distância [18]. Cima HIF-1α liga-se aos elementos de resposta a hipoxia (HREs) e activa o promotor de VEGF [19]. A neuropilina-1 (NRP-1), um co-receptor de VEGF, foi originalmente identificado como um receptor de semaforina 3, mediando orientação neuronal e o crescimento axonal [20], que se liga especificamente FCEV165 mas não VEGF121 na superfície celular de células endoteliais e de tumor células [20], [21]. NRP-1 não tem um domínio cinase típico, e em primeiro lugar funciona como um co-receptor para formar complexos específicos de ligandos. supra-regulação aberrante da NRP-1 foi observada em alto grau de Gleason e PC metastático e outros tumores sólidos [22], [23]. Nosso laboratório informou que VEGF regulada uma apoptótica anti-Mcl-1 gene através da fosforilação NRP1 dependente de c-Met em células PC e ampliou a função desta proteína na rede de sinalização celular [6].

racial e étnica diferenças de PC têm sido amplamente relatados [24], [25]. Embora os dados limitados publicados sugerem potenciais diferenças na expressão gênica seletiva entre agressiva contra PC indolente, dados que descrevem as comparações inter-raciais de expressão de genes entre as glândulas da próstata de afro-americanos e caucasianos-americanos são escassos. Kwabi-Addo e colaboradores [26] relataram as diferenças na metilação do promotor específico de genes, tais como GSTPi, AR, RAR beta2, SPARC, TIMP3, e em que NKX2-5 maior metilação foi encontrado em afro-americanos do que em caucasianos-americanos. Usando uma abordagem coloração imuno-histoquímica ao perfil espécimes PC obtidos a partir caucasianos-americanos, afro-americanos, chineses e japoneses, encontramos diferenças notáveis ​​entre esses grupos inter-raciais com respeito a seus perfis de coloração de supressores de tumor, fatores angiogênicos e neuroendócrinas [27], [ ,,,0],28]. No presente estudo, focamos nossa atenção na comparação sinalização RANKL-RANK e seus efetores a jusante entre caucasianos-americanos, afro-americanos, e os chineses, devido à importância desta via de sinalização em conferir PC óssea e metástases de tecidos moles [5], [6], [8], [12]. Analisou-se os níveis de expressão do gene a um nível de célula única em espécimes clínicos obtidos a partir destes grupos interracial usando uma rotulagem quantum dot multiplexado estabelecida técnica (mQDL) para sequencialmente etiqueta cada uma das seis intermediários de sinalização, capturar imagens múltiplas, unmix e quantificar os sinais no nível sub-celular e submeter os dados para uma série de análises estatísticas logística para determinar o seu significado predizer quer isoladamente ou em combinação com as pontuações de Gleason clínicos. Os resultados deste estudo demonstraram que diferentes efectores a jusante da RANKL-RANK via de sinalização pode prever PC sobrevida global em grupos inter-raciais com PC.

Materiais e Métodos

Os espécimes de tecido

esta pesquisa não envolveu quaisquer participantes humanos. Todos os espécimes de tecidos utilizados neste estudo foram arquivados tecidos de cancro (FFPE) da próstata embebidos em parafina e fixados em formalina. A utilização de espécimes na pesquisa foi aprovada pelo conselho de revisão instituição do Centro Médico Cedars-Sinai (IRB # Pro21228). Um total de 54 amostras de câncer de próstata primário FFPE removidos cirurgicamente foram obtidos de pacientes do Departamento de Patologia da Universidade de Virginia, Charlottesville, Virginia, e do Departamento de Patologia da Universidade de Jilin, Changchun, China, com a morte causada pelo câncer documentada ou informações sobrevivência. Das 54 amostras, 20 cada eram de Caucasian- e afro-americanos e 14 de homens chineses. O número de pacientes, eventos e sobrevida média (intervalos) em meses são: caucasianos-Americanos-20, 16 e 74,6 (intervalo de 1-190); Americanos-20 afro, 18 e 46,3 (variação de 2-181); Chinês-14, 13 31,9 (intervalo de 1-107). Os procedimentos cirúrgicos a partir do qual foram obtidas as amostras de tecido foram: caucasianos-americanos: 15 casos de ressecção transuretral da próstata (RTU), 4 casos de prostatectomia radical (RP) e 1 caso de biópsia por agulha (NBx); Afro-americanos: 18 casos de ressecção transuretral da próstata e 2 casos de RP; Chinês: 1 caso de ressecção transuretral da próstata, 6 casos de prostatectomia suprapúbica e 7 casos de biópsia por agulha. Foram feitos esforços para assegurar a coerência da Gleason classificação; o padrão histopatológico das amostras de os EUA ea China foram marcados por patologistas Dr. LS Zhao e Dr. Hua Yang, da Universidade Jilin durante suas visitas em UTMDACC em Houston, TX e da Universidade de Virginia, respectivamente, e confirmado pelo Dr. Henry F. Frierson, um patologista geniturinário da Universidade de Virginia

reagentes de imunoensaio

os anticorpos primários (ABS) e suas fontes foram:. monoclonal Abs contra HIF-1α (NB100-105) e RANKL (12A668) da Novus Biologicals (St. Charles, MO); Abs policlonal de coelho para p65 NFkB-p ou p-p65 (Ser 536), de VEGF (A-20), e a neuropilina-1 ou NRP-1 (H286) de Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA); e Ab policlonal de coelho para P-c-Met (pYpYpY1230 /1234/1235) a partir de Invitrogen (Carlsbad, CA). Abs secundário utilizado no estudo foram preparadas de um cocktail de Abs biotinilado de rato, coelho, e IgG de cabra de Vector Laboratories Inc. (Burlingame, CA). tamponada com fosfato salino (PBS) e quantum dots conjugada com estreptavidina (QD) em 565-, 585-, 605-, 625-, 655- e 705 nm como comprimento de onda de 1 uM solução de estoque foram de Invitrogen.

rotulagem multiplexado QD (mQDL)

Nós desenvolvemos um protocolo mQDL usando QDs revestidas de estreptavidina conjugada com Ab secundário biotinilado [6]. O protocolo experimental envolveu rotulagem conjugar o Ab primária a um Ab secundário biotinilado, o qual por sua vez reage com QD estreptavidina conjugada a um comprimento de onda especificado. Este procedimento rotulagem foi repetido para Abs primária múltipla contra diferentes antígenos biomarcadores após a otimização. As imagens QD-marcadas foram examinadas e fotografado com uma câmara multi-espectral Nuance e a segmentação e quantificação celular foram realizados por informar o software (Perkin Elmer; Waltham, MA). O cubo de imagem multiespectral QD foi ainda não misturado às suas imagens componentes com comprimentos de onda de pico QD distintas. Após a remoção da autofluorescência, as proteínas individuais marcadas com QD pode ser detectada

As sequências de imunorreacção e as diluições de Ab primário e a sua emparelhamento conjugada com estreptavidina foram QD:. 1) anti-HIF-1α Ab (1: 40) e estreptavidina-QD565 (1:100); 2) anti-p-p65 NFkB Ab (1:100) e estreptavidina-QD585 (1:100); 3) anti-VEGF Ab (1:40) e estreptavidina-QD605 (1:100); 4) anti-neuropilina-1 Ab (1:200) e estreptavidina-QD625 (1:100); 5) anti-P-C-Met Ab (1:120) e estreptavidina-QD655 (1:100); 6) anti-RANKL Ab (1:100) e estreptavidina-QD705 (1:100). Todo o Abs primário foram incubados a 4

° C, durante a noite e de estreptavidina-QD feita reagir a 37 ° C, 1 hora. Após 4 lavagens com PBS-Triton (0,4%), as amostras foram coradas com DAPI e montado. Para controlo negativo, Abs primários foram substituídos com isotype- e ABS controlo espécies-matched e aplicada às secções de tecido adjacentes imediatas de 5 pares de amostras de tecido a partir de casos estudados. mQDL foi realizada em paralelo com a lâmina de tecido marcado com o Abs primária testar. A intensidade de base celular média dos controles negativos foi subtraído do teste de Ab rotulagem. Analisa

captura de imagem e intensidade de expressão de biomarcadores quantificação

imagem espectral

multiplexada incluindo a aquisição de imagem e deconvolução utilizando o software Nuance 3.0 e quantificação de sinal usando informar 1.3 software foram realizados como descrito em nosso relatório anterior [6].

Descrição dos dados e análises estatísticas

dados descrição.

O resultado primário é definido como sobrevivência global. Variáveis ​​medidas foram pontuação de Gleason, raça (caucasiana-americanos, afro-americanos e chineses), e intensidade de expressão de biomarcadores à base de células no citoplasma, C; núcleo, N; e no citoplasma mais núcleo, C + N de HIF-1α, p-p65, VEGF, NRP-1, P-c-Met e RANKL. medições biomarcador para cada paciente foram em média de 4-5 imagens captadas a partir de cada um dos locais de tecido de tumor no slide. Uma média de 27 imagens /lâmina de tecido foi tomada (uma gama de 4-114 imagens) que quebram-se em: caucasianos-americanos, 5-114 imagens; Afro-americanos, 5-57 imagens; Chinês, 4-46 imagens. O tamanho total da amostra deste estudo é de 54 pacientes (caucasiana-americano, N = 20; Africano-Americano, N = 20; chinesa, N = 14). Os números médios de células analisadas com o mínimo para máximo e desvio padrão (SD) são: caucasianos-americanos, 17.207 (1,363-50,488, SD = 14.702); Afro-americanos, 12.541 (2,062-24,612; DP = 6,899); Chinês, 3.290 (794-14,770, SD = 3,531).

A análise estatística.

O método de Kaplan e Meier foi utilizado para estimar a sobrevida global eo teste logrank para comparar os grupos. Multivariada de riscos proporcionais regressão utilizando a seleção para a frente variável foi utilizada para avaliar quais biomarcadores são preditivos de sobrevida global na presença de co-variáveis. assunção de riscos proporcionais foi avaliada analiticamente e graficamente, e resíduos martingalas foram utilizados para garantir que os modelos são adequados. nível de significância crítico foi definido para 5%.

Resultados

Gleason box-plots por corrida entre os 3 grupos estudados paciente apresentou cluster altas pontuações Gleason em caucasianos-americanos, afro-americanos e chineses pacientes PC (Figura 1). A Figura 2 mostra uma diferença significativa na sobrevida global pela raça, incluindo todos os casos (N = 54, número de eventos = 47) pelo teste de Log-rank (

p

= 0,0249). Além disso, houve diferença significativa nos desvios médios e padrão ‘biomarcadores para amostra combinada e por cada corrida (Tabela 1), onde chinesa diferem de ambos os caucasianos-americanos e afro-americanos. Para identificar potenciais biomarcadores que predizem a sobrevida global dos pacientes com PC, nós então analisados ​​todos os dados de forma independente para cada corrida. análises contínuas de modelos proporcionais univariados de regressão de risco com escore de Gleason e biomarcadores para pacientes caucasianos-americano (Tabela 2) mostraram que a expressão RANKL e NRP-1 em citoplasma (C), além de núcleo (N) foram significativamente correlacionados com a sobrevida global de pacientes com PC,

p

-valor = 0,0053 e 0,0029, respectivamente. associações significativas também foram encontrados quando a expressão em C ou N foi analisado separadamente. Análises semelhantes mostraram que NRP-1 em C, N, e C + N; p-p65 em C, C + N; e VEGF em C foram significativamente correlacionados com a sobrevida global dos pacientes chineses com PC (Tabela 3). A Figura 3 mostra NRP-1, P-p65 e VEGF imagens do mQDL de tecidos obtidos a partir de um paciente chinês que sobreviveu por 66 meses (painéis superiores) vs um paciente que sobreviveram durante 2 meses (painéis inferiores) de expressão de proteínas. Em contraste, com a excepção de classificação de Gleason (

P

= 0,027), nenhum dos 6 biomarcadores alcançado associação significativa com o tempo de sobrevivência de pacientes africanos-americana analisados ​​pelo mesmo método (Tabela 4). Correlogramas (Figuras 4, 5, 6) mostraram correlações de pares entre biomarcadores com o outro, e biomarcadores com pontuação de Gleason entre caucasianos-americanos, afro-americanos e pacientes chineses, respectivamente. A diagonal principal mostra os nomes de variáveis ​​independentes para cada comparação de pares. O centro para a interação horizontal e vertical de cada co-variável é o coeficiente de correlação de Pearson e no canto superior direito é o valor p associado. Os resultados mostraram que houve correlações significativas entre a maioria dos pares de biomarcadores (em negrito), independentemente da raça, mas apenas HIF-1α se correlaciona com a pontuação de Gleason para pacientes caucasianos-americano,

p

-valor = 0,002. A Figura 7 mostra visualizações discretizadas adicionais do efeito de biomarcadores categorizados sobre a sobrevida global dos pacientes caucasianos como analisado pelo método de Kaplan e Meier e teste log-rank para comparar a expressão da proteína biomarcador no citoplasma mais núcleo classificados em dois grupos, altas e baixas, usando a mediana como ponto de corte. RANKL e NRP-1 correlacionou com a sobrevida global, com

p

-valor = 0,025 e 0,005, respectivamente. A Figura 8 apresenta imagens não misturados mQDL de expressão NRP-1 e RANKL de tecidos representativos de um paciente Caucasiano-americano que sobreviveu durante 163 meses (painéis superiores)

vs.

Um paciente que sobreviveu apenas 2 meses (painéis inferiores) . Análises semelhantes realizados em pacientes afro-americanos e chineses não mostram uma correlação entre RANKL e NRP-1 biomarcadores e sobrevida global dos pacientes (dados não incluídos). Para os afro-americanos, embora apenas pontuações Gleason foram significativas no modelo univariada (Tabela 4), nuclear pc-Met tornou-se um preditor significativo em combinação com pontuação de Gleason (Tabela 5) em um modelo de regressão de risco proporcional multivariada (

p

= 0,025 e

p

= 0,044, respectivamente). A Figura 9 mostra as imagens não misturados mQDL de expressão da proteína p-c-Met em um paciente Africano-americano que sobreviveu por 85 meses (painéis superiores) vs um doente Africano-Americano que sobreviveu por 12 meses (painéis inferiores). Para visualizar o efeito destas duas variáveis ​​sobre a sobrevida global, a pontuação de Gleason foi categorizada em dois grupos: ≥8 e 8 e nuclear pc-Met foi categorizada em dois grupos, altas e baixas, utilizando a mediana como ponto de corte ( Figura 10,

p

= 0,0349). Para explorar ainda mais de forma sistemática se a combinação pontuação Gleason e um biomarcador pode melhorar a previsão de sobrevida global, todos os biomarcadores que foram preditores significativos de sobrevida global em modelos univariados de Tabelas 2, 3, 4 foram classificados em dois grupos, de alta e baixa , utilizando-se a mediana como ponto de corte. escore de Gleason foi categorizada em dois grupos: ≥8 e 8 e as duas variáveis ​​dicotômicas foram combinados para gerar quatro grupos: Gleason ≥8 e Biomarcador alta, Gleason ≥8 e Biomarcador Baixo, Gleason 8 e Biomarcador alta, e Gleason 8 e Biomarcador Low. Três variáveis ​​fictícias foram criadas, utilizando o grupo de Gleason 8 e Biomarcador Low como referência, e multivariada de riscos proporcionais regressão utilizando a seleção para a frente variável foi usado para selecionar o melhor modelo para prever a sobrevida global. Os resultados destes modelos multivariados são apresentados na Tabela 6. Enquanto não houve categorizados Gleason /grupo de biomarcador preditivo de sobrevida global para caucasianos-americanos e chineses, por afro-americanos os resultados com os grupos categorizados concordou com o modelo preditor contínuo de múltiplas variáveis ​​e detalhes da análise, como mostrado na Tabela 7. o modelo final é mostrado na Tabela 8 e mostradas na Figura 11, onde apenas “Gleason ≥8 /Biomarcador alta” é um preditor significativo da sobrevivência global em doentes afro-americanos com cancro da próstata (

p

= 0,0117).

a diagonal principal tem o nome covariável. No cruzamento horizontal e vertical de cada co-variável, o coeficiente de correlação de Pearson (centro, em preto) e o p-valor associado (canto superior direito, em vermelho) são mostrados.

A diagonal principal tem o nome covariável. No cruzamento horizontal e vertical de cada co-variável, o coeficiente de correlação de Pearson (centro, em preto) e o p-valor associado (canto superior direito, em vermelho) são mostrados.

A diagonal principal tem o nome covariável. No cruzamento horizontal e vertical de cada co-variável, o coeficiente de correlação de Pearson (centro, em preto) e o p-valor associado (canto superior direito, em vermelho) são mostrados.

Log-rank teste p-valor é apresentado. X-eixo é o tempo de sobrevida em meses. Y-eixo é a proporção de sobreviver.

Log-rank p-valor é apresentado. ‘Biomarcador alta’ indica valores dos biomarcadores acima da mediana do biomarcador (contínua). “Biomarcador Low ‘indica valores de biomarcadores inferior ou igual à mediana do biomarcador (contínua).

Log-rank test

p

-valor é apresentado. ‘Biomarcador alta’ indica valores dos biomarcadores acima da mediana do biomarcador (contínua). “Biomarcador Low ‘indica valores de biomarcadores abaixo ou igual à mediana do biomarcador (contínua).

provas

Discussão

crescente sugere que o prognóstico do câncer de próstata melhorada usando biomarcadores diferencialmente expressos em tecidos, células e fluidos corporais entre os pacientes com doença indolente ou agressivo poderia reduzir os custos de saúde e ansiedade do paciente e do sofrimento, e melhorar a eficácia global do plano de tratamento. Enquanto histopatologia e imunohistoquímica forneceram os “padrões ouro” para o diagnóstico PC no nível celular, não foram avaliadas criticamente os aspectos quantitativos e prognósticos destas técnicas. Nesta comunicação, utilizou-se uma abordagem quantitativa histopatologia multiplexado quantum dot-etiquetagem com base no nível de célula única como descrito anteriormente pelo nosso grupo [6] para avaliar a expressão de componentes da via de sinalização de células a jusante a partir de um rank e c-Met-mediada rede de sinalização em amostras de PC clínicos coletados de grupos inter-raciais, composta por caucasianos-americanos, afro-americanos e pacientes chineses e avaliaram se esses componentes da via de sinalização pode prever a sobrevivência de pacientes de PC. A activação de rank e sinalização de c-Met mediado por RANKL e tumor-derivada do hospedeiro tem sido demonstrado para conduzir óssea do cancro e metástases dos tecidos moles em cancros da próstata, mama, pulmão, rim e fígado humano. Após a activação destas vias de sinalização, observou-se um aumento da expressão de HIF-1α, VEGF, NRP-1, RANKL, c-Met, e fosforilada de c-Met em células que confere resistência à castração e o desenvolvimento de um fenótipo metastático num PC humana modelo de xenoenxerto [6]. Nós encontramos as seguintes diferenças inter-raciais na ativação de rank e redes de sinalização de célula a jusante c-Met-mediadas em células PC. 1) RANKL e NRP-1 expressão prediz a sobrevivência dos caucasianos-americanos com PC (Figura 7). 2) Em afro-americanos, pontuação de Gleason combinado ≥8 e expressão p-c-Met nuclear prediz sobrevida (Figuras 10 11). 3) NRP-1, p65 p-NF-kB e VEGF são preditores para a sobrevida global em homens chineses com PC (Tabela 3). 4) Apesar das diferenças na previsão de sobrevida global dos pacientes de PC por diferentes componentes da via de sinalização, todos os grupos raciais compartilhada dos componentes de sinalização a jusante comuns após a ativação do rank e sinalização c-Met-mediada. Isto é revelado pela correlação de pares altamente significativa entre estes componentes de sinalização traçados pelo correlograma (Figuras 4, 5, 6) com correlações de pares em todos os três grupos raciais. Embora no momento não há nenhuma explicação científica para isso componentes de sinalização diferentes prever a sobrevida em três grupos raciais distintos de pacientes de PC, especula-se que os elementos reguladores, incluindo aspectos quantitativos de receptores, ligantes, e as interações entre as moléculas efetoras, controlando Ranking geral – sinalização a jusante e c-Met-mediada poderia ser diferente entre os grupos inter-raciais. Estes resultados, no entanto, apoiar coletivamente diferenças inter-raciais de rede de sinalização celular c-Met-mediada rank e que regula a sobrevivência de pacientes de PC.

O presente estudo é o primeiro a usar multiespectral rotulagem ponto quântico baseado em células biomarcadores associados a via de racionais, juntamente com análises estatísticas detalhadas para testar a sua capacidade de predição para a sobrevida global dos pacientes com câncer de próstata. Para reduzir os potenciais variáveis ​​introduzidas pelo processamento das amostras de tecido optamos por utilizar espécimes do mesmo hospital para cada grupo racial. Apesar do número limitado de amostras de doentes disponíveis para o estudo, a tecnologia de etiquetagem e quantificação de pontos de quantum multiplexado recentemente estabelecido demonstraram a utilidade preditiva de rank-e c-Met mediado por vias de sinalização convergentes para predizer a sobrevivência global dos doentes com PC. Os nossos resultados demonstram que entre os grupos inter-raciais, diferentes conjuntos de marcadores biológicos podem ser utilizados como indicadores para a sobrevivência. Nossas descobertas apoiar ainda mais as disparidades epidemiológicos bem documentados entre pacientes caucasianos-americano, Africano-americanos e chineses com PC. Vamos expandir ainda mais o tamanho da amostra em estudo de validação retrospectiva e avançar para estudos prospectivos de progressão da doença e sobrevida do paciente, empregando células tumorais (CTC) circulando de pacientes submetidos a tratamentos para validar os nossos resultados e descobrir outros novos biomarcadores para o diagnóstico e prognóstico do câncer de próstata para auxiliar na tomada de decisão clínica.

Reconhecimentos

Agradecemos Gary Mawyer para edição.