Abstract
O
TP53
mutações têm provado ser predominou no câncer de ovário em um estudo do The Cancer Genome Atlas (TCGA). No entanto, as características moleculares de cancros do ovário recorrente após o tratamento inicial ter sido mal estimados. Este estudo foi investigar o padrão de mutações pontuais somáticas em amostras pareadas combinados de cancros do ovário epiteliais primárias e recorrentes, utilizando o protocolo de detecção de mutações OncoMap. Nós adaptamos uma plataforma de genotipagem de alto rendimento para determinar o estado de mutação de um grande painel de genes de câncer conhecidos. OncoMap v.4.4 foi utilizado para avaliar o DNA genómico isolado a partir de um conjunto de 92, tumores embebidos em parafina e fixados em formalina (FFPE), que consiste de amostras emparelhadas correspondentes de tumores diagnosticados inicialmente e recorrentes a partir de 46 pacientes epiteliais do cancro do ovário (EOC). As mutações foram observados em 33,7% das amostras, com 29,3% destas amostras tendo uma única mutação e os restantes 4,3%, tendo duas ou mais mutações. Entre os 41 genes analisados, 35 mutações foram encontradas em quatro genes, ou seja,
CDKN2A
(2,2%),
KRAS
(6,5%),
MLH1
(8,2% ) e
TP53
(20,7%).
TP53
era o gene mais frequentemente mutado, mas não houve correlação entre a presença de mutação em qualquer gene e prognóstico clínico. Além disso, mutações somáticas não diferiu entre os carcinomas ovarianos primários e recorrentes. Cada mutação presente em amostras recorrentes foi detectado na amostra primária correspondente. Em conclusão, estes dados OncoMap de amostras coreana EOC prever que mutações somáticas foram encontrados em
CDKN2A
,
KRAS
,
MLH1
, e
TP53
. Não há diferenças no estado mutacional entre amostras primários e recorrentes foram detectados. Para entender a biologia da recorrência do tumor no câncer epitelial de ovário, mais estudos são necessários, incluindo modificações epigenéticas ou mutações adicionais em outros genes
Citation:. Kim YM, Lee SW, Chun SM, Kim DY, Kim JH, Kim KR, et al. (2014) análise e comparação dos somáticas Mutações no Emparelhados primários e recorrentes epitelial do cancro do ovário amostras. PLoS ONE 9 (6): e99451. doi: 10.1371 /journal.pone.0099451
editor: Anthony Federação das Índias Ocidentais Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong
Recebido: 08 de fevereiro de 2014; Aceito: 14 de maio de 2014; Publicação: 17 de junho de 2014
Direitos de autor: © 2014 Kim et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado por uma bolsa da pesquisa líder Foreign Programa de Recrutamento Instituto através da Fundação Nacional de Pesquisa da Coreia (NRF), financiado pelo Ministério da Educação, Ciência e Tecnologia (MEST) (2011-0030105). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer de ovário é a causa mais comum de morte entre as doenças malignas ginecológicas [1]. O tratamento padrão é citorredução cirúrgica seguida de quimioterapia à base de platina. No entanto, a maioria dos pacientes eventualmente recaída e morrer da doença quimio-resistentes. Infelizmente, esquemas de resgate disponíveis para o cancro do ovário de platina-refratária apresentaram resultados decepcionantes, porque as taxas de resposta são baixas (20-50%) e as respostas são de curta duração. É, portanto, necessário examinar novas estratégias de tratamento para ambos os pacientes recém-diagnosticados, bem como pacientes com câncer recorrente [2]. Em particular, os novos meios de molecularmente e geneticamente caracterizam câncer de ovário são necessários para personalizar e melhorar o tratamento [3].
mutações somáticas no oncogenes têm sido observadas em muitos cancros humanos e são conhecidos por ser preditivo de droga sensibilidade ou resistência a drogas [4]. Mutações somáticas mais do que 30 oncogenes e genes supressores de tumor que têm sido implicados na oncogénese do ovário foram detectados em amostras de cancro de ovário epitelial (EOC). As alterações genéticas conduzir sinalização alterado que induz proliferação; inibe a apoptose; Blocos anoikis; aumenta a motilidade, a adesão, invasão e; e atrai componentes estromais, incluindo células-tronco mesenquimais e células endoteliais dos vasos sanguíneos [5]. Esta dependência oncogene fornece a base para terapias enfocadas oncogenes, como o uso bem sucedido de imatinib e erlotinib em cancros que abrigam
BCL-ABL
e
EGFR
alterações, respectivamente. No entanto, o espectro mutacional em cancro do ovário é surpreendentemente simples, como demonstrado num estudo a partir do genoma do cancro Atlas (TCGA). Mutações no
TP53
predominou, ocorrendo em pelo menos 96% das amostras de câncer de ovário seroso de alto grau; Além disso,
BRCA1
e
BRCA2
foram mutado em 22% dos tumores, devido a uma combinação de linha germinativa e mutações somáticas. Sete outros genes significativamente mutados foram identificados, mas apenas em 2-6% de amostras de cancro do ovário seroso de alto grau [6].
adaptaram uma plataforma de genotipagem de alto rendimento para determinar o estado de mutação de um grande painel de oncogenes de câncer conhecidos, a fim de identificar subgrupos de pacientes de cancro do ovário que podem se beneficiar da terapia-alvo relacionada com o seu estado de doença [7] – [10]. Esta plataforma de genotipagem, chamado OncoMap, emprega tecnologia de massa à base de espectrometria de genotipagem (Sequenom) para identificar 471 mutações oncogênicas em 41 genes comumente mutados (Tabela S1). Este estudo relata o tipo ea frequência de mutações pontuais somáticas em amostras EOC primários e recorrentes emparelhados usando OncoMap.
Métodos
Os pacientes
O Centro ASAN para Cancer Genome Discovery (CCGD ), em colaboração com o Instituto de Câncer Dana-Farber (DFCI), desenvolveu a plataforma de genotipagem OncoMap [8]. OncoMap v.4.4 foi utilizado para analisar um conjunto de 92, as amostras (FFPE) EOC embebidos em parafina fixadas em formalina que consistem em amostras pareadas combinados de tumores recorrentes inicialmente diagnosticados e de 46 pacientes atendidos no Centro Médico ASAN, Coreia, de janeiro de 2002 a dezembro de 2011. Todos os pacientes tinham sido tratados com cirurgia cytoreductive inicial seguida por quimioterapia à base de platina e recebeu uma segunda cirurgia cytoreductive por causa da doença recorrente ou metastático. Todas as amostras de tumor foram obtidas a partir de amostras tumorais FFPE com base em um ponto de corte de 80% para a pureza da amostra tumoral. Este estudo foi aprovado pelo ASAN Medical Center Institutional Review Board (IRB AMC), e foram selecionados os pacientes que tinham escrito o consentimento informado para a utilização de seus tecidos de arquivamento para testes genéticos. foi de-identificados todos os dados
Extração de DNA
Revisão de todos os H . Slides e foi realizada por um patologista para confirmar o tipo de tumor, e para assegurar que a amostra foi representativa do tumor e que os tecidos circundantes normais não foram incluídos. O ADN genómico foi extraído de 10-20 lâminas 6 mícrons de espessura por bloco FFPE, dependendo do tamanho do tumor. A purificação do ADN genómico foi realizada utilizando o kit de tecido FFPE DNA QIAamp (# 56404; Qiagen, Hilden, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. De-parafinização com xileno e etanol, foi efectuada como se segue. Após incubação durante 5 minutos com 1 ml de xileno, as amostras foram centrifugadas durante 1 min a 12.000 rpm e o sobrenadante foi removido sem perturbar o sedimento. As amostras foram então lavadas com 1 ml de etanol absoluto, a fim de remover o xileno restante, e o sedimento foi seco ao ar durante 10 minutos para permitir que o etanol residual se evapore. O sedimento foi lisadas por incubação com 0,2 mg de proteinase K durante a noite a 60 ° C, em seguida, submetida a uma purificação em coluna. Cada amostra de ADN genómico foi eluída em 50 ul de DNase e RNase água, quantificada utilizando o kit Quant-ITTM PicoGreen dsDNA Ensaio (Invitrogen /Life Technologies, Grand Island, NY), e normalizada para uma concentração de 5 ng /mL.
a genotipagem usando OncoMap_V4.4-core Painel
Profiling de mutações somáticas para 41 genes críticos relacionados com o desenvolvimento do tumor foi realizada utilizando OncoMap versão 4.4-core (OncoMap_v4.4C) sob a tecnologia Sequenom MassARRAY plataforma (Sequenom, San Diego, CA). OncoMap_v4.4C é um painel de multiplex de 32 piscinas de genes que em conjunto abrangem 471 locais de mutação original em 41 oncogenes e genes supressores de tumor (Tabela S1) que são conhecidos por serem alvos druggable. Este painel OncoMap é uma versão actualizada do OncoMap_v1, o qual é descrito na literatura publicada [7], [8]. Um total de 320 ng de ADN genómico purificado foi utilizado como um molde para 32 conjuntos diferentes de amplificação multiplex utilizando Iplex química (# 10134-2; Sequenom, San Diego, CA), com 10 ng por reacção. Um 50-80 ng de DNA adicional, foi então utilizado para a validação homogénea de extensão de massa (HME) de candidatos de mutações que foram identificados pela reacção Iplex. amplificação multiplex PCR foi realizada em 10 ng de DNA genómico num volume final de 5 ul de uma placa de 384 poços com 0,5 L de HotStarTaq ADN Polimerase (Qiagen), 0,12 uM de cada iniciador de PCR, de 500? M de mistura de dNTP e 3,5 mM MgCl
2, usando um Motor de DNA Díade Cycler (Bio-Rad, EUA). Multiplex PCR foi realizada com o seguinte programa: 95 ° C durante 15 min; 45 ciclos de 95 ° C durante 20 seg, 56 ° C durante 30 seg, e 72 ° C durante 60 seg; em seguida 72 ° C durante 3 min. desoxinucleótidos residuais nos produtos de PCR foram inactivados por incubação durante 40 min a 37 ° C com 2 uL de fosfatase alcalina de camarão (SAP) a partir do kit de Iplex-Pro (# 10142-2; Sequenom, San Diego, CA), seguido por um incubação adicional durante 10 min a 85 ° C para inactivar a SAP. Em seguida, extensão de uma única base (SBE) foi realizada com 2 ul adicional de mistura Iplex ouro Química (0,1 ul de Iplex mix rescisão, 1,2 l de mistura de sonda de extensão, e 0,0205 l da enzima Iplex) como segue: 94 ° C para 30 seg; 40 ciclos de 94 ° C durante 5 seg e cinco ciclos de internos (52 ° C durante 5 sec e 80 ° C durante 5 seg); e 72 ° C durante 3 min. Depois de SBE, adicionaram-se 16 ul de água destilada isenta de ADNase e dessalinização foi realizada por incubação durante 25 minutos com 6 mg de resina de permuta catiónica (Sequenom). Finalmente, 10 nl do produto dessalinizado foi manchado para um formato de 384 SpectroCHIP II com o MassARRAY Nanodispenser (Sequenom). a determinação da massa foi feita com o espectrómetro de massa MassARRAY Analisador compacto MALDI-TOF. Genótipos foram chamados usando um algoritmo de análise de cluster desenvolvido pela CCGD de DFCI, então revistos manualmente por dois pesquisadores independentes para eliminar quaisquer chamadas incertos devido a artefatos de agrupamento. a qualidade da amostra foi considerada adequada para a análise, se mais do que 80% das tentativas de genótipos resultou em produtos identificáveis. Para a validação das mutações candidatos, genotipagem HME específico foi utilizado para amostras inteiras. pools de validação para HME foram projetados usando software AssayDesigner no pacote MassARRAY Tipos (v4.0). SNPs proximais foram filtrados, e a especificidade da amplificação por PCR e a subsequente reacção de extensão do iniciador foram confirmados com um máximo de seis ensaios por pool. tratamento de amplificação e SAP PCR multiplex foram realizadas da mesma maneira como para a reacção Iplex, excepto que o ADN foi de 5 ng utilizado para o modelo de PCR em multiplex. A reacção HME foi realizada com um 2 ul adicionais de HME master mix (0,2 ul de mistura HME apropriado EXTEND, 1 uL de mistura de iniciadores MassEXTEND, e 0,025 mL de enzima ThermoSequenase) como se segue: 94 ° C durante 2 min; 75 ciclos de 94 ° C durante 5 seg, 52 ° C durante 5 seg, e 72 ° C durante 5 seg; e 72 ° C durante 5 min. Os restantes passos, incluindo a adição de água, dessalinização, manchas e análise, foram efectuadas tal como para a reacção Iplex. Só foram consideradas as chamadas concordantes, tanto do Iplex ea análise HME ser mutações validados. Todas as mutações detectadas foram confirmados por padrão, bidirecional sequenciamento Sanger
Análise Estatística
A análise de sobrevida foi realizada utilizando o método de Kaplan-Meier e log rank, ea significância estatística foi definida como p 0,05. SPSS v21.0 foi usado para todas as análises estatísticas.
Resultados
Neste estudo, 46 pares de amostras EOC primários recorrente (isto é, 92 amostras EOC, dos quais 46 eram de sites de câncer primário e 46 eram de sites recorrentes pares combinados) foram analisados. Todos os pacientes tinham confirmado histologicamente EOC, dos quais papilares adenocarcinoma seroso foi mais comum (67,4%). Todos os pacientes, exceto um, recebeu quimioterapia à base de platina adjuvante entre janeiro de 2002 e dezembro de 2011. As características basais da população de pacientes estão resumidos na Tabela 1.
Das 92 amostras FFPE testados, foram identificadas 35 mutações e validado de 31 amostras (33,7%). Uma única mutação foi detectada em 29,3% das amostras, e os restantes 4,3% tinha duas ou mais mutações. Os 35 mutações que foram validados ocorreu em quatro genes, e 19 dessas mutações foram localizados em
TP53
(Tabela 2). As mutações foram validados em genes
TP53
(20,7%),
MLH1
(8,7%),
KRAS
(6,5%), e
CDKN2A
( 2,2%), com o gene supressor de tumores
TP53 of the gene mais frequentemente mutado em EOC (20,7% das amostras). Esta descoberta está de acordo com dois relatórios recentes que demonstraram que
TP53
mutações são as mutações genéticas somáticas mais comuns no câncer de ovário seroso de alto grau [6], [10]. No entanto, não houve correlação entre a presença de uma mutação no
TP53
gene e prognóstico clínico num total de 46 pacientes. A mediana livre de doença Sobrevivência (DFS) foi de 20,1 (variação, 4,7-55,4) meses no TP53
grupo mutação negativa e 27,9 (variação, 5,1-40,6) meses no
TP53
grupo mutação-positivo (P = 0,958). A sobrevida global (SG) mediana foi de 47,9 (15.8-177.4) meses na antiga e 55.0 (37.7-97.1) meses no último grupo (P = 0,433) (Fig. 1). A análise de sobrevivência entre
TP53
tipo selvagem e
TP53
tipo mutante obtido o mesmo resultado quando eles incluem apenas 31 amostras serosa (Fig. 1).
TP53
mutações e
MLH1
mutações apareceu em adenocarcinoma seroso papilífero, e outra
KRAS
mutações e
CDKN2A
mutações mostrou-se principalmente no adenocarcinoma mucinoso (Tabela 3).
doença livre de sobrevivência e sobrevivência global não são diferentes entre
TP53
grupo mutação negativa e
TP53
grupo mutação-positiva. A e B, doença livre de sobrevivência e sobrevida global em pacientes EOC totais (n = 46, 36
TP53
mutação (-) vs. 10
TP53
mutação (+)). C e D, livre de doença-sobrevivência e sobrevida global em adenocarcinoma seroso (n = 35, 27
TP53
mutação (-) serosa vs. 8
TP53
mutação (+) serosa).
em seguida, os 46 pares de amostras de tumores primários e recorrentes foram comparados a fim de avaliar a taxa de concordância de mutações somáticas. A maioria dos pacientes mostraram as metástases múltiplas e as amostras de tumores recorrentes testados foram obtidos a partir da recorrência local e metástases distantes (Tabela 3). Curiosamente, quaisquer mutações somáticas ocorreu no único tumor recorrente não tinha detectados nesta análise OncoMap de EOC (Tabela 4). Uma taxa de concordância quase 100% foi observada quando se compara mutações entre os pares de tumores primários e recorrentes. A apenas um paciente (caso 12) mostrou uma TP53
mutação na amostra principal, no entanto, que não foi detectada na amostra recorrente. Além disso, a frequência de detecção da mutação foi semelhante entre tumor primário e recorrente. Em outras palavras, mutações somáticas não foram afetados pela recorrência local ou metástase em EOC.
Discussão
OncoMap é uma mutação otimizado profiling plataforma desenvolvida para analisar de forma eficiente mutações em oncogenes conhecidos e tumor genes supressores, muitos dos quais são conhecidos para prever a resposta ou resistência a terapias específicas [8]. A nossa versão atual do OncoMap (v.4.4) interroga 471 mutações em 41 genes que são relevantes para o câncer. A plataforma OncoMap pode ser usado para analisar o ADN derivado de ambos os tecidos fresco congelado e as amostras FFPE. A sensibilidade e especificidade de OncoMap foram 93,8% e 100%, respectivamente, em ADN derivado a partir de tecido fresco congelado, e de 89,3% e 99,4%, respectivamente, no ADN derivado de FFPE [8]. Quando o tecido FFPE é usado, a sensibilidade e especificidade de OncoMap são comparáveis com os resultados usando o tecido fresco congelado. OncoMap não tenha sido desenvolvido para um tipo de cancro específico, por isso, tem a limitação de que contém muitos genes não ser pertinente para uma biologia específica de cada cancro. No entanto, a vantagem mais notável de OncoMap é que ele permite o rastreio de centenas de mutações de ponto de acesso a partir de tecido FFPE a um custo razoável [8]; portanto, esta tecnologia poderia torná-lo mais fácil para os médicos para triagem de mutações druggable em diversos tipos de câncer. OncoMap já ter sido classificado como um método de confiança para a triagem de mutações somáticas em vários tipos de tumores sólidos [7], [9] – [12].
Um estudo foi realizado em OncoMap EOC para identificar mutações que sejam druggable com novos agentes biológicos. Embora não EOC é caracterizada por mutações genéticas específicas (excepto para
TP53
, de acordo com os dados TCGA) [6], é necessário investigar as mutações somáticas associadas com diferenças em estados de doença. No total, 31 (33,7%) de 92 tecidos FFPE rastreadas utilizando OncoMap tinham mutações somáticas. Das amostras EOC, 20,7% tinham
TP53
mutações, e menos amostras abrigavam
MLH1
(8,7%),
KRAS
(6,5%), ou
CDKN2A
(2,2%) mutações.
TP53
é um gene supressor de tumor que codifica para uma proteína de mediar a apoptose celular, e mutação de perda de função de
TP53
é uma das características mais comuns de câncer em humanos [13]. Desde o primeiro mapeamento abrangente do TP53
taxa de mutação em um grupo homogêneo de pacientes com câncer de ovário seroso de alto grau, o total
TP53
taxa de disfunção se aproximou de 100% de 123 pacientes. Patogênico
TP53
mutações foram identificadas em 96,7% destas amostras por sequenciação exons 2-11 e fronteiras intrão-exão no ADN do tumor [14]. Consistente com estes resultados publicados,
TP53
foi mutado em 303 de 316 amostras (95,9%) no estudo TCGA [6]. A frequência de
TP53
mutação foi menor em nosso estudo (20,7%) em relação ao relatado em estudos anteriores. Desde OncoMap única investiga
TP53
mutações em sete loci e não detecta eventos de deleção, a menor taxa de
TP53
mutações observadas neste estudo está de acordo com recente trabalho de TCGA, conforme mencionado na outro estudo realizado usando OncoMap (Fig. 2) [10]. Este estudo OncoMap anterior foi realizada em um conjunto de 203 FFPE avançado encenado câncer seroso de alto grau dos espécimes de ovário em Instituto de Câncer Dana-Farber, usando OncoMap v.3.0. Nós usamos uma plataforma atualizada do OncoMap (v.4.4), incluindo mais de genes e ensaios e investigou o perfil de mutação de apenas mulheres coreanas; No entanto, a mutação somática de EOC frequente não é distintiva comparando estudo anterior OncoMap (Fig. 2). Numerosos estudos avaliaram a associação entre
TP53
mutações no câncer de ovário e prognóstico. Nossos dados não mostraram diferenças de DFS ou OS com relação a
TP53
estado de mutação. Embora tenha havido muitos relatos de que a presença de
TP53
mutações está associada com o prognóstico no câncer de ovário, nenhuma associação entre o
TP53
mutação e ou OS livre de progressão foi encontrado no mapeamento abrangente de
TP53
mutação no estudo [14]. É possível que o baixo número de pacientes com
TP53
mutações pode ser insuficiente para detectar diferenças de prognóstico.
Este estudo v.4.4 OncoMap de mulheres coreanas revelaram a frequência similar de
TP53
mutação somática (20,7% vs. 22,7%) eo resultado distintivo da
MLH1
mutação (8,7% vs. 0%) comparando estudo v.3.0 OncoMap anterior realizado no Instituto de Câncer Dana-Farber.
neste estudo, o segundo gene mais comumente mutado em EOC foi
MLH1
(8,7%), o que não foi encontrado para ser mutado nos dados publicados OncoMap em alto grau câncer de ovário seroso. mutações germinativas em genes de reparo, incluindo
MLH1
,
MSH2
, e
MSH6
, foram identificados em pacientes com câncer ovariano com câncer colorretal hereditário não-polipose (HNPCC) [15]. Um estudo que incluiu 1.893 mulheres com EOC sugeriram que menos de 1% das mulheres com cancro do ovário abrigar uma mutação da linha germinativa em genes HNPCC, e portadores de mutações patogénicas tinham uma idade média anterior no momento do diagnóstico de cancro do ovário, com uma maior probabilidade de um produto não -serous histologia, e um maior número de parentes com cancros relacionados com HNPCC [15]. Em uma meta-análise, mutações somáticas no
MLH1
e
MSH2
genes foram encontrados para ser prevalente no câncer colorretal, além disso, uma maior prevalência de mutações somáticas no
MLH1
gene em relação ao
gene MSH2
foi observado no grupo Europeia [16]. No entanto, não há relatos sobre
MLH1
mutações somáticas no EOC. Este é o primeiro relatório de detecção de mutações somáticas no
MLH1
em EOC esporádica; portanto, não há dados disponíveis de validação independentes. Será necessário interrogar se
MLH1
mutações somáticas estão associadas com tipos de cancro do ovário específicos.
KRAS
mutações (6,5%) e
CDKN2A
mutações (2,2%) foram também detectados neste estudo. Mutações no
gene KRAS Quais são uma das anormalidades genéticas mais frequentes em câncer de ovário, e são mais frequentemente presentes em carcinoma de um grau inferior e Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia fase (FIGO), e em lesões de um histotipo mucinoso [17].
KRAS
mutação está associada com a diferenciação mucinoso, porque estas mutações também se acumulam nos carcinomas mucinosos de outros órgãos [18], [19]. Três pacientes tiveram
KRAS
mutações, e que dois deles tinham tumores mucinosos. Além disso, foi recentemente mostrado que os tumores ovarianos mucinosos pré-invasivas são caracterizadas por 2A dependente de ciclina inibidor de cinase (CDKN2A) e aberrações via de Ras [20]. Notavelmente, a um paciente com um
CDKN2A
mutação em nosso estudo também tinha um
KRAS
mutação. Este estudo é o maior e mais alta-resolução da análise de tumores benignos e borderline mucinoso realizados até à data e fornece suporte forte para a hipótese de que essas lesões são precursores de adenocarcinoma mucinoso ovariana primária.
Nós investigamos mutações genéticas em emparelhado amostras de tumores inicialmente diagnosticados e recorrentes de 46 pacientes com câncer de ovário. Muitos oncologistas têm sido interessados em heterogeneidade intratumoral, bem como a heterogeneidade intertumoral entre amostras de tumores primários e recorrentes do mesmo paciente. Um grande estudo prospectivo no cancro da mama identificado um interruptor no estado receptor de ER em 10,2% dos pacientes, para o PR em 24,8%, e para HER2 em 2,9%; o interruptor no estado do receptor conduziu a uma mudança no plano de tratamento posterior para 17,5% dos pacientes [21]. Os autores, portanto, sugeriram que a gestão do cancro da mama recaída deve incluir amostras de tecido para identificar interruptores em estado de ER, PR, ou HER2 em localmente recorrente ou metastático da mama, o que pode influenciar o tratamento planejado. Na verdade, alguns relatórios em câncer de pulmão têm demonstrado padrões de mutação discordantes entre tumores primários e metastáticos e uma distribuição heterogênea do receptor do factor de crescimento epidérmico (
EGFR
) mutações em tumores individuais [22] – [25]. No entanto, mutações heterogéneas em
KRAS Comprar e
TP53 Quais são escassos, pois estas mutações estão associadas à patogénese precoce do câncer [26]. Em um relatório que examina amostras de tumores a partir do Catálogo do Somatic mutações no cancro do banco de dados (COSMIC) eo Cancer Aichi Centro de coorte, não há padrões de mutação discordantes foram detectados entre 77 amostras de site primários e metastáticos emparelhados, ou entre 54 pares de tumores primários e recorrentes [27 ]. Os autores concluíram que a distribuição heterogênea da
EGFR
mutações é raro, mas porque mutante
EGFR
alelos são amplificados selectivamente dentro dos tumores, as amostras analisadas por métodos de detecção menos sensíveis podem erroneamente parece ser heterogénea para
EGFR
mutações
no câncer de ovário, alguns estudos têm mostrado expressão discordante de genes ou proteínas biomarcadores em amostras de tecido de cancro do ovário primárias e recaíram emparelhados, como medido por análise de imuno-histoquímica [28] -. [30 ]. Recentemente, no entanto, os dados oposto tem sido relatado que há novas mutações surgiram de diagnóstico para recidiva após quimioterapia por sequenciação exome de amostras correspondentes a partir de um doente, sugerindo que as mutações já presentes no tumor primário contribui para a metástase e a resistência à quimioterapia [31]. No nosso estudo, uma taxa de concordância quase 100% foi observada em amostras primários e recorrentes associados a este. Apesar de um paciente mostrou discordância, o
TP53
mutação foi detectada na amostra primária, mas não na amostra recorrente. Nossas descobertas sugerem que estes genes (
TP53
,
MLH1
,
KRAS,
e
CDKN2A
) estão envolvidos no desenvolvimento do tumor inicial, como mencionado acima .
Esta análise OncoMap revelou que mutações somáticas foram raras nas EOC.
TP53
mutações eram mais comum, de acordo com dados publicados OncoMap e TCGA, e mutações somáticas no
CDKN2A
,
KRAS
, e
MLH1
também foram detectados, embora a taxas muito mais baixas. Como não houve discordância entre amostras primárias e recorrentes, não conseguimos encontrar a mutação somática específica associada à recorrência de tumores e metástases à distância em EOC, entre oncogenes bem conhecidos e genes supressores de tumor. Para entender a biologia da recorrência do tumor na EOC, mais estudos, incluindo modificações epigenéticas ou mutações adicionais em outros genes são necessários. Além disso, estudos futuros serão necessários para correlacionar a presença de
TP53
mutações com a atividade biológica e prognóstico clínico do câncer. Além disso, os tipos não-serosa de EOC devem ser analisados, porque os eventos moleculares nesses cancros podem proporcionar uma oportunidade para tratamentos visando mutações e caminhos específicos. genética melhor funcionais e estratificação de doença no câncer de ovário vai fazer novela, alvo alvos terapêuticos e tratamentos individualizados possível.
Informações de Apoio
Tabela S1.
OncoMap_4.4C consiste de 439 ensaios em 32 reacções separadas destinadas a tela 471 mutações em genes 41critical
doi:. 10.1371 /journal.pone.0099451.s001
(DOC)