Abstract
Fundo
A doença inflamatória intestinal (DII) aumenta o risco de câncer colorretal. As bactérias probióticas produzir metabólitos imunorregulatórios
in vitro
como o ácido linoleico conjugado (CLA), um ácido gordo polinsaturado com efeitos anti-cancerígenos potentes. Este estudo teve como objetivo investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes a eficácia de bactérias probióticas em modelos de ratos com câncer.
Metodologia /Principais Achados
Os mecanismos imunomoduladores de VSL # 3 bactérias probióticas e CLA foram investigados em modelos de ratos com câncer colorretal orientado a inflamação. espécimes de cólon foram coletadas para exame histopatológico, expressão gênica e de citometria de fluxo análises. subconjuntos de células imunitárias nos nódulos linfáticos mesentéricos (MLN), baço e linfócitos da lâmina própria (LPL) do cólon foram caracterizados fenotipicamente e funcionalmente. Ratos tratados com CLA ou VSL # 3 recuperaram mais rapidamente da fase inflamatória aguda da doença e apresentaram menor severidade da doença na crónica, fase de portador de tumor da doença. Adenoma e formação de adenocarcinoma também foi diminuída por ambos os tratamentos. VSL # 3 aumentou a expressão de ARNm de TNF-α, angiostatina e γ PPAR Considerando que o CLA diminuiu os níveis de COX-2. Além disso, os ratos VSL # 3 tratados com tinha aumentado IL-17 expressão em células e acúmulo de Treg LPL e as células CD4 + T de memória MLN CD4 + T.
Conclusões /Significado
Ambos CLA e VSL # 3 suprimida cólon carcinogênese, embora VSL # 3 apresentaram maiores actividades anti-cancerígenas e anti-inflamatórias que CLA. Mecanicamente, o CLA modulada expressão de COX-2 níveis na mucosa do cólon, enquanto que as respostas das células VSL # 3 alvo da mucosa regulamentar T CD4 +
Citation:. Bassaganya-Riera J, Viladomiu M, Pedragosa M, De Simone C, Hontecillas R (2012) imunorreguladoras mecanismos subjacentes Prevenção da colite-Associated Câncer Colorretal por bactérias probióticas. PLoS ONE 7 (4): e34676. doi: 10.1371 /journal.pone.0034676
editor: Georgina L. Segure, University of Aberdeen, Reino Unido
Recebido: 20 Janeiro, 2012; Aceito: 06 de março de 2012; Publicação: 12 de abril de 2012
Direitos de autor: © 2012 Bassaganya-Riera et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Os autores não têm apoio ou financiamento para relatar
Conflito de interesses:. Co-autor Josep Bassaganya-Riera é membro do conselho editorial PLoS ONE. Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
O câncer colorretal (CRC) é o terceiro câncer mais comumente diagnosticado nos Estados Unidos [ ,,,0],1]. Estima-se que 50.000 mortes são atribuídas à CRC ao redor do mundo a cada ano [2]. Juntamente com as síndromes hereditárias de polipose adenomatosa familiar e hereditário sem polipose, doença inflamatória intestinal (DII) está entre os três melhores condições de alto risco para [3] CRC. Entre os pacientes com colite ulcerosa (UC), um dos dois principais manifestações de IBD, o risco relativo de desenvolvimento de CRC se correlaciona com a extensão e a duração da doença [3], [4]. Em pacientes com DII, esse risco aumenta por 0,5-1,0% por ano após 8-10 anos [5].
A microflora intestinal humana, que contém cerca de 100 trilhões organismos microbianos, desempenha um papel crítico na manutenção da saúde do hospedeiro , tanto no tracto gastrintestinal e a absorção sistémica através de metabolitos (por exemplo vitaminas e ácidos gordos de cadeia curta) [6]. Estudos recentes têm demonstrado que as estirpes específicas de bactérias estão implicados na regulação da homeostase intestinal, proporcionando sinais de regulação para o epitélio, o sistema imune da mucosa e para a actividade neuromuscular do intestino [7], [8]. Além disso, alguns comensais e patogénicos organismos do microbioma entérico humana são essenciais na patogênese da IBD e CRC. Assim, manipulando a composição bacteriana do intestino e produção de metabolitos local usando bactérias probióticas tem sido explorada como uma avenida promissora para a intervenção terapêutica contra o CRC. Os probióticos são suplementos alimentares vivos microbianos que beneficamente impacto sobre a saúde do hospedeiro. Eles contam com a introdução de determinadas cepas exógenos na microflora intestinal [8], [9]. Estas estirpes são frequentemente escolhidos para actividades benéficas específicas, como a produção de lípidos, tais como ácido linoleico conjugado (CLA), e isómeros de ácido linoleico conjugado (ClNa) [10], [11]. Estes lípidos variam em estrutura química a partir de ácidos gordos curtos, tais como propionato, butirato de etilo e de ácidos gordos poli-insaturados (PUFA) e estão envolvidos na regulação da apoptose e a resposta imune [10], [12] – [14].
a seleção de 36 diferentes cepas de Bifidobacterium para a sua capacidade para produzir CLA a partir do ácido linoleico livre e de NaCl a partir de ácido alfa-linolênico (LNA) revela que seis cepas (quatro
Bifidobacterium breve
estirpes, um
B . bifidum
tensão e um
B. pseudolongum
tensão) são capazes de produzir CLA diferente e isômeros de NaCl a
in vitro
[15]. Outros demonstraram que as bactérias probióticas podem sintetizar CLA [16] – [18]. CLA produtoras de estirpes bacterianas pode ser encontrado numa formulação probiótico disponível comercialmente conhecido como VSL # 3. Este produto é composto de quatro cepas de lactobacilos (
Lactobacillus casei
,
L. Plantarum
,
L. Bulgaricus
, e
L. Acidophilus
) , três cepas de bifidobactérias (
Bifidobacterium longum
,
B. breve
,
e B. infantis
) e
Streptococcus thermophilus
. Recentemente, demonstrámos que VSL # 3 bactérias probióticas produzir CLA localmente que tem como alvo o receptor de macrófagos proliferador de peroxissoma activado (PPAR) y para suprimir colite [19]. Além disso, VSL # 3 pode desempenhar um papel fundamental na manutenção do equilíbrio microbiano intestinal através da síntese de substâncias antibacterianas como lantibióticos [20], e outros compostos de tipo bacteriocina [21]. Além disso, o tratamento VSL # 3 está associada com uma sub-regulação de LPS-activada de IL-8 e suprimiu a secreção de TNF-α e IFN-γ [22]. Essas ações imunorregulatórios são consistentes com a ativação do PPAR γ pelas microflora intestinal seguintes VSL # 3 tratamento probiótico. O objetivo deste estudo é investigar a capacidade de VSL # 3 bactérias para modular as respostas imunes das mucosas e, assim, melhorar a carcinogênese do cólon.
Materiais e Métodos
procedimentos animais e dietas experimentais
murganhos C57BL /6 de tipo selvagem (n = 60) foram utilizados para o estudo CRC induzida por DSS. Em um estudo de acompanhamento, nós também utilizado IL-10 com deficiência (IL-10 – /-) e do tipo selvagem camundongos em um /SvEv fundo 129 (n = 60). Para cada experiência, os ratos foram alimentados com dietas purificadas roedor AIN-93G (Tabela S1) com ou sem 1% de CLA durante 24 dias antes da indução de cancro relacionado com a inflamação, em que todos os requisitos onde atingidos ou excedidos. O suplemento CLA administrado continha uma mistura 50:50 do
cis
-9,
trans
11 CLA e
trans
-10,
cis
-12 isômeros (Clarinol, Loders Croklaan BV).
Ética Declaração
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê animal Care e Use a Virginia tech Institucional (IACUC) e alcançado ou ultrapassado requisitos da Serviço de Saúde pública Institutos /Nacionais de Saúde e do animal Welfare Act.
tratamento oral com bactérias probióticas
Para cada experimento, cerca de metade dos ratos recebeu 0,5 mL da VSL # solução probiótica 3 diariamente por sonda orogástrica usando uma agulha de ponta gavage bola. A solução probiótico foi preparada de fresco diariamente em soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS) a pH 7,1, em condições estéreis para uma concentração final de 0,0072 g VSL # 3 /mL, correspondendo a 1,2 mil milhões de bactérias por ratinho /dia, uma dose que mostrou eficácia na colonização do cólon e do íleo terminal [23], [24]. Além disso, esta dose é biologicamente relevante, uma vez que se baseia numa dose diária de cerca de 3,6 mil milhões de bactérias para um ser humano adulto que pesa 70 kg. VSL # 3 é uma mistura probiótico comercial composto de quatro cepas de lactobacilos (
Lactobacillus casei
,
L. Plantarum
,
L. Bulgaricus
, e
L. acidophilus
), três cepas de bifidobactérias (
Bifidobacterium longum, B. breve e B. infantis
) e
Streptococcus thermophilus
.
indução de cancro colorrectal
Um protocolo estabelecido anteriormente foi seguido para induzir quimicamente-driven inflamação CRC [25], [26]. ratinhos de tipo selvagem foi desafiado com azoximetano (10 mg /kg) na semana 6 do estudo, seguido por um sulfato de dextrano de sódio 2,0% de tratamento (DSS) na água potável durante 7 dias começando na semana 7. IL-10 deficientes 129 /SvEv ratinhos foram desafiados com uma dose única de 5 × 10
7 ufc
Helicobacter typhlonius
por sonda oral para acelerar a carcinogénese do cólon, como mostrado anteriormente [27]. índices de atividade da doença e pontuações sangramento retal foram calculados utilizando uma modificação de um score combinado previamente publicado [28]. Os ratinhos foram sacrificados no momento da formação do tumor, o que corresponde ao dia 68 (estirpe C57BL /6) ou 18 dias após a infecção com
H. typhlonius
(129 /SvEv estirpe).
Histopatologia
seções do cólon foram fixadas em formalina a 10% tamponada neutra, depois embebidos em parafina e seccionados (6 mm) e coradas com H e para exame histológico. lâminas de tecido foram examinados em um microscópio Olympus (Olympus America Inc., Dulles, VA). Dois pontos foram pontuados para a infiltração de leucócitos, a erosão epitelial, espessura da mucosa, adenocarcinomas e adenomas.
isolamento do ARN e em tempo real de reacção em cadeia da polimerase de citocinas
O ARN total de cólon foi isolado usando o RNA Qiagen kit de isolamento (Qiagen) de acordo com as instruções do fabricante, e, em seguida, foi utilizada para gerar o molde de ADNc utilizando o kit de síntese de ADNc iScript (Bio-Rad, Hercules, CA) e em tempo real de RT-PCR foi realizada como previamente descrito [12] .
Imunofenotipagem
Baço e linfonodos mesentéricos (MLN) foram excisadas e uma única célula suspensões de tecidos foram novamente suspensas em PBS e enumerado com o contador Coulter (Beckman Coulter, Fullerton, CA). amostras de cólon foram processadas para lâmina própria de linfócitos (LPL) isolamento. Especificamente, as células (6 × 10
5 células /poço) foram semeadas em placas de 96 poços, centrifugada a 4 ° C a 3000 rpm durante 3 minutos, e lavou-se com PBS contendo 5% de soro e 0,09% de azida de sódio (tampão FACS). As células foram então incubadas para a avaliação de macrófagos com anticorpos primários fluorocromo-conjugados com marcadores de células T e de macrófagos.
A análise estatística
Para determinar a significância estatística do modelo, a análise de variância (ANOVA) foi realizada utilizando o processo geral do modelo linear de Software de Análise estatística (SAS), e valor de probabilidade (
P
) 0,05 foi considerado significativo. Quando o modelo foi significativa, ANOVA foi seguido por diferença mínima significativa método de comparação múltipla protegido de Fisher.
Resultados
VSL # 3 e atividade da doença melhoram as CLA em ratos com CRC
em ambos os modelos, VSL # 3 e tratamentos de CLA diminuiu contagens de actividade de doença associados com CRC associado a colite em comparação com o grupo de controlo não tratado. No modelo CRC induzida por azoximetano, os ratos tratados com CLA ou VSL # 3 recuperaram mais rapidamente da fase inflamatória aguda da doença (dias 1-26) e teve menor severidade da doença na crónica, fase de portador de tumor da doença (dias 63 -68). Em geral, VSL # 3 tratamento bactérias probióticas foi mais eficaz do que o CLA na diminuição da inflamação e reduzir a actividade da doença em ambos os modelos (Figura 1A e Figura 2a). De acordo com estes resultados clínicos, VSL # 3 e CLA melhorou significativamente patologia grave em cólon, baço e MLN, em comparação com os ratinhos de controlo não tratados na azoximetano induzida CRC (Figura 1B-C). No IL10 – /- modelo, a mistura probiótico VSL # 3, mas não CLA diminuiu lesões relacionadas à inflamação no MLN, cólon e do baço de
H. typhlonius
ratinhos infectados em comparação com o grupo de controlo (Figura 2B-D).
C57BL /6J (n = 60) foram tratados com o VSL # 3 probiótico (n = 20), cla- suplementado (1 g /100 g) (n = 20) ou dietas de controlo (n = 20) durante 32 dias e desafiados IP com azoximetano (10 mg /kg) seguido por sulfato de dextrano a 2% de sódio (DSS) na água potável durante 7 dias para induzir cancro colorectal associada à colite (CRC). O índice de atividade da doença, uma pontuação composta que reflete os sinais clínicos da doença (isto é, de sujidade perianal, sangramento retal, diarréia e piloereção) foi avaliada diariamente para os ratos submetidos ao desafio DSS (A). Os ratos foram sacrificados no dia 68. Colon e linfonodos mesentéricos (MLN) (B C) foram macroscopicamente marcou para a inflamação. Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
bacteriana-free 129 /SvEv e IL-10 gene deficiente (IL 10 – /-) 129 ratinhos /SvEv em um /SvEv fundo 129 (n = 60) foram tratados com o VSL # 3 probiótico (n = 20), suplementado com CLA (1 g /100 g) (n = 20) ou dietas de controle (n = 20) por 32 dias e, em seguida, foram infectadas com o
H. typhlonius
a fim de desenvolver câncer colorretal experimental associada à colite. O índice de atividade da doença, uma pontuação composta que reflete os sinais clínicos da doença, foi avaliada diariamente para os ratos submetidos ao desafio DSS (A). Colon, baço e gânglios linfáticos mesentéricos (MLN) (B-D) foram macroscopicamente marcou para a inflamação. Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
VSL # 3 e CLA evitar lesões histológicas do cólon em camundongos com CRC
Em relação a /DSS modelo azoximetano CRC associado a colite, tratamento de CLA, mas não VSL administração # 3, diminuição da infiltração de leucócitos e a espessura da mucosa do cólon (Figura 3 a B). Curiosamente, VSL # 3 foi mais eficaz do que o CLA na redução da infiltração de leucócitos na espessura da mucosa em IL-10 – /- murganhos infectados com
H. typhlonius
(Figura 4 A B). Além disso, ambos os VSL # 3 e tratamentos de CLA diminuiu adenoma e adenocarcinoma de formação quando comparadas com o controlo. Estes resultados eram consistentes para ambos os modelos de CRC (Figura 3 C D e A Figura 4 C D).
C57BL /6J (n = 60) foram tratados com o VSL # 3 probiótico (n = 20) , suplementado com CLA (1 g /100 g) (n = 20) ou controlo de dietas (n = 20) para 32 dias e desafiados IP com azoximetano (10 mg /kg) seguido por sulfato de dextrano a 2% de sódio (DSS) na água potável durante 7 dias para induzir cancro colorectal associada à colite (CRC). Os ratinhos foram sacrificados no dia 68. Todos os espécimes foram submetidos a exame histológico cego e foram marcados 1-4 na infiltração de leucócitos (A), e espessamento da parede da mucosa (B), os adenocarcinomas (C) e adenomas (D). Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
bacteriana-free 129 /SvEv e IL-10 gene deficiente (IL 10 – /-) 129 ratinhos /SvEv em um /SvEv fundo 129 (n = 60) foram tratados com o VSL # 3 probiótico (n = 20), suplementado com CLA (1 g /100 g) (n = 20) ou dietas de controle (n = 20) por 32 dias e, em seguida, foram infectadas com o
H. typhlonius
a fim de desenvolver câncer colorretal experimental associada à colite. Após a necropsia, todos os espécimes foram submetidos cego exame histológico e foram marcados 1-4 no espessamento da parede da mucosa (A), infiltração de leucócitos (B), adenomas (C) e adenocarcinomas (D). Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
VSL # 3 e CLA modular a expressão de marcadores inflamatórios e carcinogênese do cólon
os ratinhos desafiados com azoximetano DSS e foram sacrificados na fase de portador de tumor da doença. Aqueles ratos tratados com CLA ou VSL # 3 mostraram um aumento da expressão do mRNA de CD36 e PPAR γ. no cólon (Figura 5 A C). Além disso, a administração de CLA por via oral significativamente regulada negativamente cólon expressão de COX-2 (Figura 5B), enquanto que VSL # 3 de tratamento regulada positivamente os níveis de mRNA angiostatina no cólon distai (Figura 5D), um fragmento proteolítico de plasminogénio com efeitos anti-angiogénicos em ratinhos com CRC. Finalmente, uma regulação positiva do cólon TNF-α foi encontrado em camundongos CLA e VSL # 3 tratados, quando comparados com o grupo de controlo não tratado (dados não mostrados).
6J ratinhos C57BL /(n = 60) foram tratados com a VSL # 3 probiótico (n = 20), suplementado com CLA (1 g /100 g) (n = 20) ou dietas de controlo (n = 20) durante 32 dias e desafiados IP com azoximetano (10 mg /kg) seguido por sulfato de dextrano a 2% de sódio (DSS) na água potável durante 7 dias para induzir cancro colorectal associada à colite (CRC). Os ratinhos foram sacrificados no dia 68. A expressão de CD36 (A), ciclo-oxigenase 2 (COX2) (B), γ PPAR (PPAR γ) (C) e da angiostatina (D) foi avaliada por PCR em tempo real quantitativa. Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
VSL # 3 e modular CLA fenótipo e produção de citocinas de macrófagos e linfócitos T CD4 + subconjuntos de células no MLN e LP do cólon
Aqueles ratinhos saudáveis que receberam VSL # 3 teve percentagens maiores de IL-17 que expressam as células T CD4 + no MLN quando comparado com o grupo de controlo não tratada (Figura 6A). Da mesma forma, o tratamento de CLA aumento da população de células T CD4 + que expressam IL-17 no baço de ambos os ratinhos saudáveis e CRC (Figura 6B). Maiores percentagens de CD4
+ FoxP3
+ e CD4
+ CD44
+ CD62L
+ células LP T, correspondendo a mucosa células T reguladoras (Tregs) e CD4
+ T de memória de células, respectivamente, foram encontrados em ratinhos tratados com 3 VSL # (Figura 6C D).
C57BL /6J (n = 60) foram tratados com o VSL # 3 probiótico (n = 20), cla- suplementado (1 g /100 g) (n = 20) ou dietas de controlo (n = 20) durante 32 dias e desafiados IP com azoximetano (10 mg /kg) seguido por sulfato de dextrano a 2% de sódio (DSS) na água potável durante 7 dias para induzir cancro colorectal associada à colite (CRC). Os ratinhos foram sacrificados no dia 68. MLN (A-C), baço (D) e LPL (E-F) a partir de ratinhos do tipo selvagem foram immunophenotyped para identificar células subconjuntos imunes por citometria de fluxo. Os dados estão representados como a média ± erro padrão. Pontos com um asterisco são significativamente diferentes quando comparados com o grupo controle (
P Art 0,05).
Discussão
inflamação intestinal crônica, que se IBD induz persistente danos e aumentada a permeabilidade da mucosa ao longo do tracto gastrointestinal, que joga um papel importante no desenvolvimento do cancro colo-rectal (CRC) [29]. Manipulação de bactérias do cólon com probióticos foi demonstrado ser eficaz na regulação da homeostase do intestino, em parte, através da produção de metabolitos bacterianos [30]. VSL # 3 bactérias probióticas podem produzir CLA localmente no intestino, um composto que modula para baixo-respostas inflamatórias através da activação de PPAR γ [31]. Além disso, o CLA evita ou melhora DII experimental em ratos e porcos [12], [13], [32]. Além disso, os agonistas de PPAR y mostraram eficácia clínica contra UC humano [33], [34]. Recentemente, demonstrou-se que a mistura probiótica VSL # 3 suprime a inflamação intestinal, por produzir CLA localmente no cólon e activação de PPAR γ em macrófagos [19]. Este estudo teve como objetivo investigar os mecanismos de CLA e VSL # 3 em modelos do rato do CRC associada à colite.
A resposta clínica no modelo /DSS OMA teve uma distribuição bimodal em que o primeiro pico correspondeu a inflamação aguda devido ao desafio DSS seguido de um período de recuperação clínica caracterizada por uma inflamação crónica inferior. O segundo pico da doença apareceram no dia 48 que corresponde à formação de tumores. Este padrão é consistente com os resultados de estudos anteriores do nosso grupo que caracterizaram as propriedades anti-cancerígenas do CLA [25]. CLA e VSL # 3 ratos tratados também apresentaram menores lesões relacionadas à inflamação macroscópicas e melhorou significativamente a histopatologia do cólon em ambos os modelos experimentais. No entanto, enquanto VSL # 3 foi o composto que impediu a formação de tumores de forma mais eficaz, não evitar a infiltração de leucócitos em comparação com os outros grupos no modelo de cancro colo-rectal induzida por azoximetano, sugerindo um possível papel dos leucócitos que se infiltram nas ações anti-cancerígenos de VSL # 3. Em um estudo de acompanhamento, utilizando um modelo diferente de carcinogênese do cólon associada a colite, IL-10 – /- ratos em um fundo 129 /SvEv foram infectadas com o
H. typhlonius
, acelerando assim a inflamação do cólon que a IL10 – /- desenvolvem espontaneamente e promovendo a carcinogênese do cólon [27]. Neste modelo, tanto VSL # 3 e CLA melhorada a gravidade da doença, mas apenas a mistura probiótica foi eficaz em reduzir lesões relacionadas com a inflamação em MLN, baço e cólon. Esta consistência de resultados em ambos os modelos demonstra que a eficácia do VSL # 3 em restaurar a homeostasia da mucosa e atenuando CRC associado a colite não é dependente de um modelo.
O nosso expressão do gene análises mostraram uma regulação positiva do cólon TNF-α em o CLA e VSL # 3 ratinhos tratados quando comparados com o grupo de controlo não tratado, o que pode ser indicativo de imunoestimulação e capacidade de cura epitelial aumentada. Mais notavelmente, o TNF-α exerce efeitos anti-tumorais potentes por estimulação de respostas imunitárias, incluindo a regulação positiva de antigénios de antigénios de leucócitos humanos em superfícies de células de tumores [35], a citotoxicidade melhorada [36] a estimulação de células T citotóxicas e células assassinas naturais (NK) [37] – [40], bem como cicatrização do epitélio [41]. Além disso, os ratinhos tratados com CLA mostrou uma expressão significativamente reduzida de ciclo-oxigenase-2 (COX-2), uma enzima envolvida na cascata do ácido araquidónico e a inflamação mediada por prostaglandina. Estudos anteriores sugeriram que os efeitos supressores de CLA na carcinogénese do cólon devido a alterações nesta cascata e na activação de PPAR γ, ambos os mecanismos envolvem a inibição da expressão de COX-2 e induzir apoptose [42], [43]. Os níveis de angiostatina, um fragmento proteolítico de plasminogénio e um inibidor endógeno da angiogénese [44], foram maiores no grupo VSL # 3 quando comparado com ratinhos de controlo alimentados, sugerindo que as acções anti-cancerígenos de VSL # 3 pode ser mediada, em parte, por angiogese suprimida. Conforme demonstrado em estudos anteriores [45], [46], esse comportamento inibidor de angiostatina na angiogénese poderia ser indirectamente relacionado com a eficácia anti-cancerígena. Nossas descobertas estender as conclusões de um recente relatório demonstrando que probiótico VSL # 3 pode atenuar a inflamação crônica em ratos, atrasando a transição da inflamação para displasia e câncer [47].
A capacidade de VSL # 3 e CLA para modular as respostas imunes e prevenir CRC também foi avaliada pelo exame da distribuição de subconjuntos de células imunitárias na mucosa do cólon e sistemicamente. VSL # 3 tratamento melhorou as percentagens de células T CD4 + que expressam-17 IL no local indutivo da mucosa (isto é, MLN) e Foxp3-expressando células T CD4 + no local efector em ratinhos com CRC, sugerindo um possível papel na modulação da plasticidade entre Th17 e Treg no LNM e LP do cólon. Os resultados de um estudo recente identificou segmentado bactérias filamentosas na comensais microbiota intestinal como indutores da polarização Th17 na mucosa intestinal [48]. Ele é tentador especular que as mudanças na composição da microbiota cólon desencadeada por bactérias probióticas podem exercer efeitos semelhantes. Em conclusão, nossos dados demonstram a capacidade do CLA e VSL # 3 para melhorar câncer colorretal induzida por inflamação através de um mecanismo que envolve a modulação de polarização de células da mucosa CD4 + T e modulação da expressão do gene.
Informações de Suporte
Tabela S1.
Composição das dietas experimentais.
1 por kg de dieta: 3 g de ácido nicotínico, 1,6 g Pantotenato de cálcio, 0,7 g de piridoxina HCl, 0,6 g tiamina HCl, 0,6 g de riboflavina, 0,2 g de ácido fólico, 0,02 g de D-biotina, 2,5 g de vitamina B-12 ( 0,1% em manitol), 15 gd, l-α acetato de tocoferol (500 Ul /g), 0,8 g de palmitato de vitamina a (500.000 Ul /g), 0,2 g de colecalciferol (500.000 Ul /g), 0,075 g de vitamina K (filoquinona) e 974,705 g de sacarose.
2 por kg de dieta: 357 g de carbonato de cálcio, 196 g de fosfato de potássio monobásico, citrato de 70,78 g de potássio, 74 g de cloreto de sódio, sulfato de potássio 46,6 g, óxido de magnésio 24,3 g, 6,06 g de citrato férrico, 1,65 g de carbonato de zinco, 0,63 g de carbonato de manganésio, 0,31 g de carbonato cúprico, 0,01 g de iodato de potássio, 0,01025 g de selenato de sódio, 0,00795 g paramolybdate de amónio, 1,45 g de sódio meta-silicato, 0,275 g de sulfato de crómio de potássio, 0,0174 g de cloreto de lítio, 0,0815 g de ácido bórico, 0,0635 g de sódio flúor, 0,0318 g de carbonato de níquel, hidróxido, tetra-hidrato, 0,0066 g de vanadato de amónio, e 220,716 g de sacarose.
3Antioxidant
doi:. 10.1371 /journal.pone.0034676.s001
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