Abstract

Fundo

Para investigar a frequência e relação do

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

mutações e a perda de expressão de PTEN em pacientes chineses com cancro colorectal (CRC).

Metodologia /Principais achados

o DNA genômico foi extraído das (FFPE) tecidos embebidos em parafina fixadas em formalina de 69 pacientes com confirmação histológica CRC. sequenciamento automatizado foi conduzido para detectar mutações em

KRAS

(códons 12, 13 e 14),

BRAF

(códon 600) e

PIK3CA

(códons 542, 545 e 1.047). a expressão da proteína PTEN foi avaliada por imuno-histoquímica em secções de tecido FFPE 3 mm. A análise estatística foi realizada usando SPSS 16.0 software. A frequência de

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

mutações e perda de expressão de PTEN foi de 43,9% (25/57), 25,4% (15/59), 8,2 % (5/61) e 47,8% (33/69), respectivamente. A mutação mais freqüente em

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

foi V14G (26,7% de todas as mutações), V600E (40,0% de todas as mutações) e V600L (40,0 % de todas as mutações), e H1047L (80,0% de todas as mutações), respectivly. Seis

KRAS

pacientes mutatant (24,0%) abrigava

BRAF

mutações.

BRAF

e

PIK3CA

mutações eram mutuamente exclusivas. Não houve correlação significativa entre os quatro biomarcadores e características do paciente.

Conclusões /Significado

BRAF

taxa de mutação é muito maior neste estudo do que em outros estudos, e se sobrepõem muito com

KRAS

mutações. Além disso, os tipos específicos de

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações em pacientes chineses poderia ser bastante diferente daquela dos pacientes em outros países. Mais estudos são necessários para examinar o seu impacto no prognóstico e resposta ao tratamento alvejado

Citation:. Mao C, Zhou J, Yang Z, Huang Y, Wu X, Shen H, et al. (2012)

KRAS

,

BRAF Comprar e

PIK3CA

Mutações ea perda de PTEN Expressão em pacientes chineses com cancro colorectal. PLoS ONE 7 (5): e36653. doi: 10.1371 /journal.pone.0036653

editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 04 de janeiro de 2012; Aceito: 08 de abril de 2012; Publicado em: 07 de maio de 2012

Direitos de autor: © 2012 Mao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Nenhuma corrente fontes de financiamento externas deste estudo

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Dois anticorpos monoclonais (AcMo) voltado para fator de crescimento epidérmico. receptor (EGFR), o quimérico cetuximab IgG1 MoAb eo panitumumab IgG2 completamente humanizado, têm provado ser eficaz em combinação com quimioterapia ou como agente único para o tratamento de câncer colorretal metastático (mCRC) [1], [2], [3] . No entanto, a eficácia de MoAb não é consistente para cada paciente; alguns pacientes experimentam resposta dramática para Moab, enquanto outros mostram nenhuma resposta [4], [5], [6]. A fim de facilitar a selecção dos doentes com CCRm que pode beneficiar de tratamentos anti-EGFR MoAbs, há uma clara necessidade para a identificação de biomarcadores preditivos, que indicam a probabilidade de resposta entre os potenciais receptores.

Tem sido relatado que as activações de oncogénicos vias de sinalização intracelular a jusante de EGFR, incluindo RAS-RAF-MAPK e vias de sinalização PI3K-PTEN-AKT, são mecanismos importantes para a geração de resistência ao EGFR anti-MoAbs. Na via RAS-RAF-MAPK, mutações activas de

KRAS

ou

BRAF

não são incomuns, como essas mutações estão presentes em 35,0-45,0% e, em 4,0-15,0% dos pacientes com CCRm respectivamente, [7]. Na via de PI3K-PTEN-AKT, mutações de

PI3KCA

ou perda de expressão de PTEN são observados em 10,0-18,0% e 19,0-42,0% de pacientes, respectivamente CCRm [7]. Mutações do

PIK3CA

, podem coexistir com qualquer um

KRAS

ou

BRAF

dentro do mesmo tumor [8], mas

KRAS Comprar e

BRAF

mutações parecem ser mutuamente exclusivas [7].

até à data,

KRAS

mutações foram identificadas como um marcador preditivo de resistência ao anti-EGFR MoAbs em pacientes com mCRC, e o uso de anti-EGFR MoAbs agora está restrito a pacientes com CCRm com o tipo selvagem

KRAS

[9]. No entanto, a ocorrência de

KRAS

mutações representa apenas cerca de 30% a 40% dos pacientes não responsivos [10]. Em pacientes com

KRAS

do tipo selvagem tumores, ainda não está claro por que um grande número de pacientes ainda não respondem ao tratamento. Mais recentemente, outras mutações oncogênicas, tais como

BRAF

[11], [12],

PIK3CA

mutações [10] ou perda de expressão de PTEN [12], [13], são encontrados susceptível de ser preditores promissoras para a resistência em pacientes com CCRm com o tipo selvagem

KRAS

.

a maioria dos estudos que investigou o valor preditivo da

KRAS

,

BRAF

,

PIK3CA

mutações e perda de expressão de PTEN foram realizados em países ocidentais. Pouco se sabe sobre a relação desses biomarcadores com os resultados clínicos do tratamento MoAb em pacientes chineses com mCRC. Nós nem sequer conhecer a frequência desses biomarcadores ocorreram em pacientes chineses. Neste estudo, nós investigamos o estatuto de

KRAS

,

BRAF

,

PI3KCA

expressão mutação e PTEN no tumor primário de 69 pacientes com CCRm chineses, clarificar a taxa de mutações e para detectar a correlação entre mutações e fatores clínico-patológicos.

Materiais e Métodos

pacientes e amostras de tecido

a análise foi realizada em 69 pacientes com diagnóstico histológico de câncer colorretal ( 40 homens e 29 mulheres, com idade média de 54 anos), submetidos a ressecção do tumor em Nanfang Hospital durante o período de julho de 2010 a março de 2011. Sessenta e nove amostras de tumores primários foram coletados a partir de amostras cirúrgicas. Todas as amostras são recolhidas (FFPE) tecidos fixados com formalina e embebidos em parafina. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Institucional do Hospital Nanfang e foi realizada de acordo com as orientações institucionais. consentimento escrito foi dada pelos pacientes para a sua informação a ser armazenada na base de dados do hospital e utilizadas para a investigação. Em nosso estudo, consentimento informado por escrito não foi obtido dos participantes, porque o estudo foi retrospectivo e nossa dados foram analisados ​​de forma anónima. Um resumo dos dados demográficos e clínico-patológico foi listado na Tabela 1. Os pacientes que nunca fumaram pelo menos um cigarro por dia durante pelo menos 6 meses foram classificados como fumantes, incluindo fumantes e fumantes anteriores. O resto dos pacientes foram classificados como não-fumantes. Foram considerados os pacientes que têm pelo menos 3 doses por semana, em média, nos últimos dois anos como bebedores, enquanto o resto dos pacientes foram classificados como não-bebedor.

extração de DNA e análise mutacional do KRAS, BRAF e PIK3CA

Duas amostras FFPE apropriados foram selecionados de cada paciente. Para cada amostra, foram preparados três secções 5-10 uM. O ADN genómico foi extraída por um procedimento de SDS-proteinase K padrão. Após a extração, o DNA foi purificado.

Temos procurado por mutações no

KRAS

exão 2,

BRAF

exão 15 e

PIK3CA

exons 9 e 20.

KRAS

exão 2 inclui códons 12, 13 e 14,

BRAF

exão 15 inclui códon 600,

PIK3CA

exão 9 inclui códons 542 e 545 e

PIK3CA

exão 20 inclui codão de 1047, em que a grande maioria das mutações ocorrem nestes genes [11]. Dez tipos de mutações no

KRAS

códons 12, 13 e 14 (G12C, G12D, G12V, G12R, G12a, G12G, G13D, G13G, V14G e V14A), 4 tipos de mutações no

BRAF

códon 600 (V600E, V600Q, V600L e V600V), 4 tipos de mutações no

PIK3CA

códons 542 e 545 (E542K, E545K, E545G e E545A) e dois tipos de

PIK3CA

códon 1047 (H1047R e H1047L) foram detectados. A sequência de nucleótidos correspondente a cada exão foi amplificado a partir de DNA genómico extraído. A Tabela 2 apresenta a lista de iniciadores utilizados para cada exão. As condições para a amplificação de regiões específicas do exão de ADN genómico por PCR foram descritos no estudo anterior [11]. Os produtos de PCR foram sujeitos a sequenciação automática por ABI PRISM 3730 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). Todos os casos mutados foram confirmadas por duas vezes com reacções de PCR independentes. Novos dados não foi gerada em nosso estudo. Os resultados de análises de mutação são dadas no apêndice S1 e S2 (Figuras para resultados de sequenciamento).

expressão de PTEN

expressão da proteína PTEN foi avaliada por imuno-histoquímica em 3

mm

secções de tecido FFPE como relatado em um estudo anterior [13]. O anticorpo anti-PTEN humano anti-ratinho monoclonal foi aplicado a 1: 50 de diluição. Cada execução incluídos lâminas de controlo positivas e negativas adequadas. A pontuação semi-quantitativa foi dado a PTEN coloração de tecido tumoral por dois patologistas independentes sem conhecimento dos dados clínicos ou resultados de análises moleculares: negativa (-), ausência total de coloração; fraca (+), coloração fraca independentemente de percentagens de células positivas ou moderada coloração de ≤30% das células; moderada (++) coloração, moderada de 30% de células ou forte coloração de ≤50% das células; forte coloração forte (+++), de 50% das células. Tumores com pontuação PTEN de -, + ou ++ foram considerados como tendo perda de PTEN. Os valores para análise imuno-histoquímica são dados em S3 apêndice.

A análise estatística

A análise estatística foi realizada usando SPSS 16.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL). A χ

2 e teste exato de Fisher foram utilizados para comparar a proporção de

KRAS

,

BRAF PIK3CA

mutações e perda de expressão de PTEN entre os diferentes grupos clínico-patológicas. Para investigar os efeitos da co-variáveis ​​sobre as mutações genéticas, análise de regressão logística múltipla usando um passo a passo para a frente (razão de probabilidade) método foi feito com odds ratio (OR) calculado. Os testes iniciais incluíram idade, sexo, história de tabagismo, história de beber, local do tumor e diferenciação. Apenas variáveis ​​que mostram associação estatisticamente significativa com mutações genéticas foram submetidos à análise de regressão final. O nível de significância de dois lados foi fixado em P . 0,05

Resultados

KRAS

mutação

KRAS

estado mutacional foi testado em 57 tecidos de tumor, das quais 25 (43,9%), continham pelo menos uma mutação nos codões 12, 13 ou 14. O espectro destas mutações foi resumido na Tabela 3. Dezoito (31,6%) tinham uma mutação tecidos no codão 12, 4 (7,0%) no codão 13 e 8 (14,0%) no codão 14. A mutação mais frequente era V14G, que representava 26,7% de todas as mutações, seguidas por G12D (20,0% de todas as mutações). Cinco tecidos tinham mutações concomitantes em dois códons (Apêndice 1). Nós não encontramos nenhuma associação significativa entre mutações KRAS e características dos pacientes por análise univariada (Tabela 4) e análise multivariada (dados não mostrados).

BRAF

mutação

Detectamos

BRAF

códon 600 mutações em 15 (25,4%) dos 59 tecidos tumorais. A mutação mais frequente era V600E (40,0% de todas as mutações) e V600L (40,0% de todas as mutações) (Tabela 3).

BRAF

e

KRAS

mutações não eram mutuamente exclusivas, com 24,0%

KRAS

pacientes mutantes e 29,0% do tipo selvagem

KRAS

pacientes abrigando

BRAF

mutações (Figura 1). Nenhuma associação significativa entre

KRAS

mutações e características dos pacientes foi encontrado por análise univariada (Tabela 4) e análise multivariada (dados não mostrados).

PIK3CA

mutação

O status de

PIK3CA

mutações foi analisada em 61 tecidos tumorais com 5 resultados positivos, dando uma taxa de mutação total de 8,2%.

PIK3CA

mutação Exon9 foi visto em apenas um (1,7%) de 58 tecidos tumorais testadas (Tabela 3). Por outro lado,

PIK3CA

mutações Exon20 foram identificados em 4 de 57 tecidos tumorais (7,0%), sendo todos H1047L (Tabela 3).

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações não eram mutuamente exclusivas (Figura 1). Três (12,0%)

KRAS

pacientes mutantes tinham

PIK3CA

mutações, todos localizados na Exon20, enquanto dois (6,3%)

KRAS

pacientes do tipo selvagem abrigava

PIK3CA

mutações, uma em Exon9 e outro em Exon20. De nota,

BRAF

e

PIK3CA

mutações eram mutuamente exclusivas no presente grupo de pacientes. Nenhuma associação significativa entre

PIK3CA

mutações e características dos pacientes foi encontrado por análise univariada (Tabela 4) e análise multivariada (dados não mostrados).

Perda de expressão de PTEN

Testamos a expressão de PTEN em 69 tecidos de tumor. Perda de expressão de PTEN foi detectada em 33 deles (47,8%), e não eram mutuamente exclusivas com

KRAS

,

BRAF

ou

PIK3CA

mutações (Figura 1). Quatorze (56,0%)

KRAS

pacientes mutados teve perda de expressão de PTEN (Figura 1). Nós não detectou qualquer associação estatisticamente significativa entre a expressão de PTEN e as características dos pacientes por análise univariada (Tabela 4) e análise multivariada (dados não mostrados).

Discussão

Neste estudo, nós detectamos várias mutações dos genes KRAS, BRAF e PIK3CA, bem como a perda de expressão de PTEN em 69 pacientes de CRC chineses. Além disso, nós também tentou correlacionar as mutações com algumas características clínicas e patológicas. Alguns estudos anteriores têm investigado a relação entre estes eventos moleculares e várias características clínico-patológicas. Os resultados foram no entanto inconsistente. Por exemplo, Sartore-Bianchi et al descobriram que

KRAS

mutações foram significativamente mais em mulheres do que em homens, enquanto

PIK3CA

mutações e perda de PTEN não foram significativamente associados ao sexo, idade ou local de tumores [14]. Em contraste, Barault et al e Benvenuti et al descobriram que

PIK3CA Comprar e

BRAF

mutações, mas não mutações do

KRAS

, ocorrem com uma frequência maior em mulheres do que homens [10]. Em pacientes com CCR chinês, Shen et al concluíram que o sexo era o único fator que mostrou uma relação óbvia com o

KRAS

mutações (sexo feminino 44,7% vs 28,2% do sexo masculino, p = 0,037) [15]; Liou et al relataram mais frequente

KRAS

mutações no sexo feminino e em não-fumantes, e

KRAS Comprar e

BRAF

mutações foram significativamente associados com a localização proximal de câncer [16 ]. No entanto, no estudo de Li et al,

BRAF

mutação não se relacionou com a idade, sexo, tipo histológico ou encenação Dukes ‘, mas co-existente

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações eram mais propensos a desenvolver em metástases hepáticas [17].

no presente estudo, não encontramos quaisquer correlações significativas entre estes eventos moleculares e várias características clinicopatológicas (Tabela 4), o que pode ser parcialmente atribuível ao tamanho relativamente pequeno da amostra. Observou-se algumas tendências potenciais. Por exemplo,

KRAS

mutações e perda de PTEN parecia ser maior no sexo feminino do que em pacientes do sexo masculino. Além disso,

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

mutações parecem ser mais frequente em pessoas com histórico beber ou fumar. No entanto, estudos mais amplos são necessários para tirar uma conclusão firme sobre estas questões.

gene KRAS

codifica uma proteína 21 kDa RAS, que é um membro da família de GTPases envolvidos em processos de transdução de sinal. Mutações no

KRAS

constitutivamente pode activar a proteína na sinalização através da eliminação da actividade de GTPase [15]. Foi estabelecido que o

KRAS

mutações são biomarcador preditivo para a resistência a anticorpos monoclonais anti-EGFR (MoAbs) de tratamento em termos de taxa de resposta, sobrevida livre de progressão ea sobrevida global. De acordo com relatórios anteriores, o

KRAS

taxa de mutação dos pacientes CRC varia de 20,0% a 50,0%, principalmente sobre 35,0% -45,0% [10], [15]. Neste estudo, 43,9% tinham um mutante

KRAS

genótipo, o que significa que, se

KRAS

testes estado mutacional é aplicada para seleccionar candidatos para o tratamento anti-EGFR MoAbs, a proporção de CRC chinês pacientes que seriam excluídos é semelhante ao de outros países.

no entanto, deve notar-se que, neste estudo, 14,0% dos pacientes tinham mutações codão 14 (V14G). Dentre os poucos estudos que tiveram interesse no códon 14, uma grande série de US mostrou que 14 mutações codões (V14I) ocorreram em apenas 0,1% dos pacientes CRC [18]. E não se sabe se estas variantes são de patogenicidade específica [18]. Assim, seria interessante ver se os resultados são reprodutíveis em pacientes chineses futuras com mCRC. Mais importante ainda, mais estudos são necessários para investigar o impacto do códon 14 mutações no prognóstico e resposta dos pacientes ao EGFR anti-MoAbs. Se estas mutações não conferem resistência ao tratamento, em seguida, mais pacientes com CCRm chinesa pode beneficiar de anti-EGFR MoAbs.

Em relatórios anteriores de populações ocidentais, transições G12D foram o tipo mais frequente de

KRAS

codão 12 mutações, seguidas por G12V, G12C, G12S e G12a [18], [19]. No entanto, em nosso estudo, a ordem correspondente é G12D, G12V, G12a, G12G e G12C, entre os quais G12G foi raramente visto em outros estudos. Como para o codão 13 mutações, a maioria deles foram G13D, seguido por G13C e G13R em populações Ocidentais [18], [19]. No presente estudo, apenas G13G, uma variante recém-descoberta, e G13D foram detectados. Estes dados sugerem que pode haver diferença racial nos padrões de

KRAS

mutações. Tem sido relatado que o uso de cetuximab foi associada com mais global ea sobrevida livre de progressão em pacientes com câncer colorretal quimioterapia refratária com tumores com mutação G13D do que pacientes com outros

tumores -mutated KRAS

[20]. Se algumas das mutações raramente vistas ou novas encontradas em nosso estudo também estão associados com um melhor resultado do tratamento permanece desconhecido e merece uma investigação mais aprofundada.

Semelhante ao gene KRAS,

BRAF

também codifica proteínas que atuam na via de sinalização RAS-RAF-MAPK. Estudos anteriores, tanto ocidentais e chineses, informou que

BRAF

mutações foram detectadas em 5,0% -10,0% dos pacientes com CCR. Surpreendentemente, nosso estudo demonstrou uma muito alta taxa de mutação, de 25,4%, para

BRAF

. Uma possível explicação é que a maioria dos estudos de

BRAF

mutação estavam focados em V600E apenas [21], ao passo que o nosso estudo analisou quatro tipos de mutações, isto é, V600E, V600Q, V600L e V600V. No entanto, mesmo no estudo de De Roock que detectou D594G, V600E, V600M e K601E, a taxa de mutação foi de apenas 10,9% [22]. Portanto, a alta taxa de mutação em nosso estudo pode ser devido a outras razões, tais como a diferença racial e fatores ambientais. Ainda não há consenso sobre o papel preditivo da

BRAF

mutações no tratamento anti-EGFR MoAbs de mCRC. Alguns acharam que a mutação V600E foi associada com pior resultado em pacientes com CCR metastático tratados com EGFR-anti MoAbs [23]. Outros sugeriram que esta mutação era apenas um fator prognóstico geral em vez de um fator preditivo específico para anticorpos monoclonais anti-EGFR, porque o seu relacionamento com mau prognóstico é independente do tratamento dado [24]. Mutações do

KRAS Comprar e

BRAF

genes são frequentemente encontrados para ser mutuamente exclusivos em câncer colorretal, tanto em pacientes chineses e ocidentais [25], [26]. Assim, em geral, com um

KRAS

taxa de mutação de 40,0% e um

BRAF

taxa de mutação de 10,0%, um sexto, ou 16,7% do

KRAS

wild- digite pacientes abrigavam

BRAF

mutações. De nota,

BRAF

mutações se sobrepõem muito com

KRAS

mutações neste estudo, com 29,0% do tipo selvagem

KRAS

pacientes abrigando

BRAF

mutações. Se

BRAF

mutações foram usadas para selecionar mais de tipo selvagem

KRAS

pacientes para tratamento anti-EGFR MoAbs, em seguida, significativamente mais pacientes com CCRm chinesa pode ser excluída.

O PIK3CA gene codifica a subunidade catalítica p110 de PI3K, que regula as vias [27]. De acordo com estudos anteriores, verificou-se que a taxa de mutação para

PIK3CA

é de 8,7%, e

PIK3CA

mutações são coexistentes com

mutações KRAS

[10], [23 ], [28]. Além disso, observamos mais mutações no exon 20 do que no exon 9, o que é consistente com estudos de pacientes chineses [29], [30] mas bastante diferentes dos resultados de populações ocidentais. Isto é muito importante, porque o exão 9 e o exão 20 mutações diferem grandemente no que afecta a resposta a MoAbs anti-EGFR. Nossa revisão sistemática anterior descobriu que

PIK3CA

exon 20 mutações foi associada a uma menor taxa de resposta, sobrevida livre de progressão mais curto e sobrevida global e, portanto, pode ser um potencial biomarcador para resistência ao EGFR anti-MoAbs em

KRAS

do tipo selvagem mCRC, enquanto que

PIK3CA

exão 9 mutações parecia não ter esse papel [31]. Portanto, por meio de testes

PIK3CA

estado de mutação, mais pacientes com CCRm chinesa pode ser impedido de receber MoAbs anti-EGFR de que sejam resistentes.

Em uma análise retrospectiva consórcio de mais de 1000 tumores reunidos de sete países europeus, de Roock descobriram que o E542K, mutações E545K e Q546K no exon 9 responderam por 15,6%, 26,8% e 4,2% de todos os

PIK3CA

mutações, enquanto as mutações H1047R e H1047L no exão 20 representavam 20,5% e 3,8% de todas as mutações [22]. No presente estudo, no entanto, o tipo mais frequente de mutações detectamos é H1047L, não os hotspots acima referidos, tal como E542K, E545K ou H1047R. Isto indica que pode haver grandes variações entre as diferentes raças. Curiosamente, descobrimos que cada paciente que empreendido

PIK3CA

análise de mutação abrigavam mutações E542K e E545K. Nós considerado estes como resultados “falsos positivos”, que foi avaliado por outros [32].

A perda de expressão de PTEN, que foi relatado para ocorrer em 19,0% -42,0% de -64,0 Ocidental e 30,0% % de tumores CRC chineses [13], [33], [34], [35], [36], [37], induz um aumento na concentração de PIP-3 e

PIK3CA

activação da via [23] . Nós detectada a perda de expressão de PTEN em 47,8% dos pacientes, consistentes com estudos anteriores. A perda da expressão de PTEN foi reportado para conferir resistência de tumores ao EGFR-anti MoAbs [38]. No entanto, uma vez que esta perda de PTEN pode coexistir com o

PIK3CA

mutações, como mostrado pelos presentes e de outros estudos, muitas vezes é difícil diferenciar a contribuição de perda de PTEN da de

PIK3CA

mutações para a falta de resposta [28].

a força deste estudo é a análise abrangente de quatro biomarcadores em pacientes com CCRm chineses. No entanto, o tamanho de amostras é relativamente pequena, tornando alguns dos nossos resultados inconclusivos. Além disso, nós não recolhemos os dados sobre o tratamento e os resultados clínicos, que serão abordados em nossos estudos futuros.

Em resumo, este estudo reforça a evidência de que

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações e a perda de expressão de PTEN em pacientes chineses CCRm ocorrer a um nível comparável ao de doentes ocidentais. No entanto,

BRAF

taxa de mutação é muito maior neste estudo do que em estudos anteriores. Além disso, os tipos específicos de

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações na população chinesa poderia ser bastante diferente daquela dos pacientes em outros países, especialmente considerando a freqüência relativamente alta de

KRAS

códon 14 mutações e

PIK3CA

exon 20 mutações. Estes resultados têm implicações importantes para o tratamento personalizado de pacientes com CCRm chinesa. Mais estudos são necessários para examinar o impacto de alguns tipos de

KRAS

,

BRAF

e

PIK3CA

mutações no prognóstico e resposta ao tratamento direcionado.

Informações de Apoio

Apêndice S1.

padrões de mutações KRAS, BRAF e PIK3CA.

doi: 10.1371 /journal.pone.0036653.s001

(DOC)

Apêndice S2. resulta

Sequencing para mutações KRAS, BRAF e PIK3CA.

doi: 10.1371 /journal.pone.0036653.s002

(DOCX)

Apêndice S3.

coloração imuno-histoquímica de PTEN no tecido cancro colorectal e do tecido normal.

doi: 10.1371 /journal.pone.0036653.s003

(DOC)