Abstract
Objectivo
Para investigar o significado clínico da expressão de MHC classe I relacionadas com a cadeia de gene a (MICA) em pacientes com câncer de pulmão de não pequenas células avançado e explorar a relação entre a expressão MICA e a eficácia da terapia de células assassinas induzida por citocinas (CIK) para o tratamento de câncer de pulmão de não pequenas células avançado .
Métodos
Foram obtidos dados em 222 pacientes com câncer de pulmão de não pequenas células avançado, incluindo dados sobre a expressão MICA, idade, sexo, índice ECOG, tipo patológico, palco, história de tratamento ( incluindo 38 pacientes que receberam infusão de células CIK autólogo) e sobrevida global (OS). expressão MICA no tecido de câncer de pulmão foi avaliada por coloração imuno-histoquímica. As análises de expressão MICA e associação terapêutica CIK com os resultados de sobrevivência foram realizadas utilizando modelos de Cox proporcionais, métodos de Kaplan-Meier, eo teste de log-rank.
Resultado
s
MICA foi expressa tanto em membrana e no citoplasma. expressão MICA correlacionados com o estágio do câncer de pulmão, pontuação ECOG, sexo e idade. análise de regressão multivariada de Cox mostrou que a expressão de MICA foi um fator prognóstico independente de cancro do pulmão avançado de células não-pequenas (p = 0,002). Na análise de subgrupo, dividimos os 222 pacientes em grupos CIK e controle. No grupo CIK, o sistema operacional médio (MOS) de pacientes com uma alta expressão de MICA foi maior do que naqueles com baixa expressão de MICA (27 meses versus 13 meses). No grupo controle, os Mós, em pacientes com uma elevada expressão de MICA foi menor do que em pacientes com baixa expressão MICA (9 meses versus 18 meses). A análise de regressão de Cox mostrou que a expressão MICA afeta o efeito da terapia CIK (p 0,0001).
Conclusão
1) A alta expressão de MICA é um dos indicadores de mau prognóstico para não-pequenas pacientes com câncer de pulmão de células avançados. 2) A expressão elevada de MICA pode ser um dos fatores preditivos para a terapia CIK sucesso
Citação:. Chen Y, Lin G, Guo Zq, Zhou Zf, Ele Zy, Ye Yb (2013) Efeitos da MICA expressão no prognóstico de avançada não-pequenas células do cancro do pulmão e a eficácia da terapia CIK. PLoS ONE 8 (7): e69044. doi: 10.1371 /journal.pone.0069044
editor: Alfons Navarro, da Universidade de Barcelona, Espanha |
Recebido: 02 de março de 2013; Aceito: 05 de junho de 2013; Publicação: 23 de julho de 2013
Direitos de autor: © 2013 Chen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite o uso unrestrict`ed, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
O financiamento.: o projecto foi apoiado pela Fundação para Jovens Pesquisadores de Fujian Departamento Provincial da Saúde, China. (Grant No. 2011/01/24). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o cancro do pulmão continua a ser a principal causa de mortalidade relacionada ao câncer no mundo, e cerca de 1,4 milhões de pessoas são diagnosticadas com câncer de pulmão a cada ano [1]. Aproximadamente, 85% de todos os casos de cancro do pulmão são categorizados como o cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC), e mais do que 50% de doentes com NSCLC têm avançado invasão local e /ou metástases distantes. Na última década, muitas pesquisas têm-se centrado sobre os aspectos imunológicos de câncer de pulmão. Imunoterapia recentemente se tornou a quarta importante modalidade de tratamento para tumores malignos após a cirurgia, radioterapia e quimioterapia [2], [3], [4], [5].
A gênese e evolução de um tumor estão intimamente relacionados com a resposta do sistema imunitário. A teoria da “immunoediting” tem tentado para descrever a interacção complexa de um tumor em desenvolvimento com uma resposta imunitária em evolução. Isto é pensado para incluir três fases; uma fase de eliminação em que o sistema imunitário destrói o tumor, uma fase de equilíbrio em que o tumor e sistema imune coexistem, e uma fase de escape em que o tumor se desenvolve mecanismos para escapar de destruição pelo sistema imunológico. Moléculas que são regulados para cima ou para baixo durante immunoediting podem representar potenciais marcadores prognósticos [6]. Os (MIC) principais proteínas relacionadas com a cadeia de histocompatibilidade de classe I complexo representam uma nova família de altamente glicosilada, ancorada à membrana de MHC de classe I de moléculas semelhantes. Embora compartilhem estrutura semelhante à classe clássica I cadeias pesadas, MICA e MICB não associam com β2-microglobulina ou com o transportador associado com processamento de antígenos (TAP) [7]. proteínas MIC tem uma distribuição nos tecidos restrita e eles raramente são expressos pelas células normais. Tem sido relatado que a mica é constitutivamente expressa pelas células epiteliais intestinais e é amplamente expresso numa variedade de tumores malignos. Por conseguinte, considera-se ser um antigénio associado a um tumor (TAA) [8], [9], [10].
proteínas MIC funcionar como ligandos para o receptor NKG2D-lectina de tipo C-estimuladora como, em primeiro lugar identificados em células NK e subsequentemente mostrado para ser expresso em células CD8 +, células T e ap γδ. NKG2D é uma glicoproteína transmembranar de tipo II que é expresso como um homodímero ligado por dissulfureto na superfície da célula. Actua como um receptor de activação após a ligação ao ligando, apoiando a actividade citotóxica das células NK e células T contra as células tumorais [11], [12]. As células tumorais transf ectadas estavelmente para expressar mica e as versões de murino dos ligandos NKG2D RAE-1 ou H60 em níveis elevados, são removidos por células T CD8 + e células NK [13], [14], o que indica que as células tumorais sobre-expressando NKG2D ligandos tornam mais sensíveis à citólise mediada por células imunes. No entanto, relatórios recentes identificaram um mecanismo pelo qual os tumores parecem ser capazes de subverter o mecanismo de vigilância. Foram identificadas as formas solúveis de mica a ser derramado por tumores e mostrado para causar regulação negativa da NKG2D acoplando com o receptor em linfócitos infiltrados no tumor (TIL), prejudicar a função da célula T [15]. Este estudo pretende analisar os casos NSCLC avançados para realizar uma análise retrospectiva explorar a associação entre a expressão MICA e o prognóstico dos pacientes com NSCLC avançado.
assassino induzida por citocinas células (CIK) são uma população única de linfócitos T citotóxicos com uma característica de células CD3 + /CD56 + fenótipo, e eles podem ser gerados a partir de células mononucleares do sangue periférico induzidos por cocktail de citoquina (PBMC). Estas células mostraram maior proliferativa e actividades citolíticas em comparação com células assassinas activadas por linfocina CD3- /CD56 + (LAK) [16]. Actualmente, as células CIK são reconhecidos como um novo tipo de célula efectora anti-tumor, com actividade anti-tumoral mais forte e um espectro mais amplo de tumores segmentada do que outras células efectoras antitumorais relatados. Além disso, as células CIK pode regular e geralmente melhorar as funções imunológicas em pacientes com câncer [17], [18]. Os dados atuais de fase I /II estudos sobre os efeitos anti-NSCLC de células CIK são altamente limitado, e os benefícios terapêuticos de células CIK são desconhecidos em pacientes com NSCLC. Como terapia-alvo e quimioterapia têm feito avanços substanciais no tratamento individualizado, devemos explorar os fatores preditivos de terapia imunológica para melhorar o efeito da terapia CIK em pacientes com NSCLC. Alguns estudos têm mostrado que o receptor NKG2D é altamente expresso na superfície de células CIK, e espera-se que um efeito citolítico pode ser mediada pela interacção entre o receptor NKG2D em células CIK e o ligando MICA em células cancerosas [19], [20], [21]. Então, teoricamente, as células CIK pode reconhecer ligantes MICA nas membranas celulares de cancro do pulmão e matar as células cancerosas. Se a alta expressão MICA pode ser usado como um factor preditivo do resultado da terapia CIK ainda precisa ser determinado. Pretendemos estudar a expressão MICA e o efeito da terapia CIK para determinar se a expressão MICA é um fator preditivo da terapia CIK bem sucedido.
Materiais e Métodos
Ética Declaração
Todos procedimentos foram realizados em conformidade com a declaração de Helsínquia, e com a aprovação do Comitê de Fujian Provincial Hospital Cancer Ética. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes.
Pacientes e amostras
Os pacientes (n = 222) com a avançada ou localmente avançado câncer de pulmão não-pequenas células (fase III-IV) a partir do 12
Departamento de Fujian Provincial Hospital Cancer th foram recrutados entre dezembro de 2005 e dezembro de 2010. O principal critério de exclusão foi a falta de tecido suficiente para imuno-histoquímica (IHQ). Dados clínico-patológicas principais foram coletadas a partir desses pacientes, incluindo estágio TNM, pontuação ECOG, sexo e idade. Generalidades paciente é mostrada na Tabela 1. Todos os tumores recebidos após a ressecção na sala de operação ou transbrônquica biópsias pulmonares ou biópsias foram imediatamente aspiração fixo e colocado em 10% de formalina tamponada neutra, antes do processamento e incorporação em parafina, para a fixação do tecido e preservação óptima para exame histológico. Os conjuntos de slides histopatológicos originais e relatórios foram obtidos de cada caso, e estes foram revisados para confirmar o diagnóstico e precisão dos dados existentes, e para completar as informações em falta a partir da base de dados sempre que possível.
Tratamentos
Fora de 222 pacientes 32 recusou o tratamento após ser diagnosticado. Os 190 pacientes restantes receberam tratamentos, incluindo quimioterapia, terapia-alvo, radioterapia, tratamento CIK, eo melhor tratamento sintomático de suporte. Para os casos de câncer de pulmão localmente avançado (22 casos com estádio IIIA, 6 casos com estágio IIIB), o modelo de tratamento consistiu de quimioterapia pré-operatória de indução, cirurgia e quimioradioterapia adjuvante pós-operatório. Quatro dos vinte e quatro pacientes receberam quatro ciclos de tratamento complementar CIK (Tabela 2). Os pacientes receberam tratamento autólogo de célula CIK após quimioradioterapia. tratamento de células CIK foi determinado em intervalos de 1 mês. Os pacientes eram elegíveis para o tratamento de manutenção CIK até que já não concordaram em continuar o tratamento de manutenção ou até progressão da doença ocorreu. Para cada tratamento, os pacientes receberam uma infusão de pelo menos 1,0 × 10
10 CIK células.
Casos avançados (34 casos com estágio IIIB, 128 casos com estágio IV), receberam regimes de tratamento de quimioterapia, o EGFR-TKI terapia-alvo, e o tratamento CIK. A quimioterapia incluiu primeira linha, de segunda linha, e tratamento de terceira linha. Quimioterapia de primeira linha utilizados agentes quimioterapêuticos de terceira geração que contêm um catalisador de platina regime de duas drogas. A quimioterapia de segunda linha com docetaxel como agente único e pemetrexed foi usado mais frequentemente do que a quimioterapia e tratamento de terceira linha foi dada de acordo com a situação da doença. terapia de TKI de EGFR com 250 mg QD de gefitinib ou erlotinib 150 mg foi continuada até que a progressão da doença ou toxicidade até que não podia ser tolerado. Havia 34 pacientes com doença avançada que receberam tratamento com CIK (Tabela 2). tratamento de células CIK foi determinado em intervalos de 1 mês. Para cada tratamento, os pacientes receberam uma infusão de pelo menos 1,0 × 10
10 CIK células.
CIK celular Preparação
células CIK foram isoladas e cultivadas de acordo com o protocolo padrão. Sangue periférico (50 ml) é desenhada de pacientes usando heparina como um anticoagulante. As células mononucleares foram isoladas por centrifugação Ficoll-Conray gradiente de densidade e a sua viabilidade avaliada por exclusão de azul de tripano. Cerca de 2,0 × 10
6 /células mononucleares ml foram plaqueados em seis poços pratos e cultivadas com Meio I contendo meio RPMI 1640 mais 1,0 × 10
6U /L humana interferão gama (IFN-γ), 5,0 × 10
5 U /L recombinante humana interleucina-2 (IL-2), 10% de soro humano inactivado calor, 25 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina, 100 U /ml de penicilina, e 100 ug /ml de estreptomicina. As células foram incubadas numa atmosfera humidificada com 5% de CO
2 a 37 ° C. Após 24 h, 100 ug de anticorpo /L monoclonal (mAb) contra CD3 e 1,0 × 10
5 U /L de IL-1α foram adicionados. Após mais 48 h, o sobrenadante foi aspirado e as células foram cultivadas em meio II; Meio I, na ausência de IFN-γ. O meio foi mudado de três em três dias. A viabilidade celular foi determinada utilizando coloração com azul de tripano. células CIK foram transfundidos de volta para os doadores seguintes oito dias de cultura. Todas as culturas de células CIK foram testados quanto à contaminação (bactérias, fungos e micoplasma) ao longo do estudo para garantir a qualidade da cultura e segurança das transfusões.
análise do fenótipo das células CIK
Os fenótipos de células cultivadas foram determinada por citometria de fluxo (BD FACSCalibur). As células foram marcadas com anticorpos monoclonais (M ABS) que reconhecem CD3 humano, CD4, CD8, CD56, e NKG2D.
A imuno-histoquímica
a detecção imuno-histoquímica de mica foi realizada por uma rotina de estreptavidina-biotina técnica peroxidase empregando o anticorpo anti-MICA policlonal de coelho. Rotina de corte de parafina, de desparafinagem e hidratação utilizando 3% de peróxido de hidrogénio foi realizada para bloquear a actividade da peroxidase endógena. recuperação de antigénio de microondas foi feito antes de bloqueio com soro de vitela fetal, durante 2 h. Cerca de 50 ul (1:25) de anticorpos policlonais de coelho anti-MICA humana foi adicionada, e a mistura foi incubada a 4 ° C durante a noite. Cerca de 50 ul de biotinilado de cabra anti-IgG de coelho Solução de trabalho de anticorpo secundário foi adicionado, e a mistura foi incubada a 37 ° C durante 30 minutos, seguido por coloração diaminobenzidina. A amostra foi contra-coradas com hematoxilina, lavou-se com etanol e ácido clorídrico, saturada com carbonato de lítio até que a cor voltou ao azul, e depois desidratadas com gradiente de álcool e xileno antes da montagem com resina neutra.
A omissão do anticorpo primário e a sua substituição com PBS foi utilizado como controlo negativo, e os leucócitos infiltrantes tumorais foram utilizados como controlos positivos internos para coloração MICA. Uma secção de tecido colorrectal que tinha sido mostrado para ser positivo para MICA também foi usado como um controlo positivo [22], [23].
Avaliação da coloração imunológica
Dois patologistas independentes examinados a imuno-histoquímica sondado slides sem qualquer conhecimento prévio sobre a história clínica dos pacientes. MICA expressão foi avaliada de acordo com a intensidade de coloração e classificadas como se segue. A intensidade da imunomarcação foi classificada em quatro categorias: 0 = sem manchas ou apenas uma cor de fundo inespecífica, 1 = amarelo claro, 2 = amarelo ou amarelo profundo, e 3 = marrom ou bege. A percentagem de células positivas foi avaliada semi-quantitativamente e classificados em cinco grupos: células positivas 0 = ≤5%, 1 = 6% de células positivas -25%, as células positivas 2 = 26-50%, 3 = 51-75% positiva células, e 4 = 76% de células positivas -100%. A pontuação histoquímica da imunorreatividade foi obtida pela soma das pontuações de intensidade e percentuais. pontuações histoquímica foram divididos em dois grupos, casos com dezenas de 0-4 foram definidas como o grupo de baixa expressão, e casos com dezenas de 5-7 foram definidos como o grupo de alta expressão. [23], [24], [25].
Prognosis avaliação
A sobrevida global (OS) serve como o padrão ouro na avaliação da eficácia terapêutica do tratamento do tumor, por isso adotamos oS ao avaliar o prognóstico. Os pacientes foram acompanhados a partir da data do diagnóstico da doença Stage IIIB /IV da data da morte. Os doentes sem data conhecida da morte foram censurados no momento do último follow-up.
A análise estatística
A análise estatística dos dados foi realizada utilizando o pacote SPSS (versão 13 para Windows) . O teste do qui-quadrado (teste exato de Fisher) e teste t de Student foram utilizados para avaliar as diferenças nas variáveis categóricas e variáveis contínuas, respectivamente. Os pacientes cuja morte relacionada com o seu câncer de pulmão foram considerados nos cálculos de sobrevivência para certas doenças. Aqueles que morreram de causas relacionadas ao câncer não-pulmonares, sem evidência de recorrência foram censurados no momento da morte. As curvas de sobrevida foram estimadas pelo método de Kaplan-Meier e as diferenças na sobrevivência foram avaliados pelo teste de log-rank. A análise multivariada pelo modelo de relação de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para testar a significância dos fatores prognósticos incluindo expressão MICA, sexo, idade, histologia, pontuação ECOG e terapia CIK. Um valor de p 0,05 foi considerado estatisticamente significante
Resultados
expressão MICA
expressão imuno-histoquímica de MICA dentro dos tumores pulmonares foi amplamente homogênea.. Combinou coloração citoplasmática granular com coloração da membrana celular. Não se observou coloração de estroma, matriz extracelular, ou núcleos, enquanto que se infiltram no tumor positivo para leucócitos coradas MICA (Figura 1).
Expressão de mica no epitélio pulmonar normal (A). MICA baixa expressão em tecidos de tumor de pulmão (B), mica alta-expressão em tecidos de tumor de pulmão (C).
Análise de expressão MICA em 222 casos de NSCLC revelou que 98,2% dos tumores pulmonares apresentou coloração positiva para MICA. Quarenta e cinco (20,3%) das amostras demonstraram coloração amarelo claro, 33,8% (n = 75) foram amarelo ou amarelo escuro, e 44,1% (n = 98) eram castanhos ou cor castanho-amarelado (Tabela 3). Uma proporção variável de células MICA-positivas também foi observada; 47,3% (n = 105) dos tumores mostrou extensa expressão de células positivas MICA (76% -100%), ao passo que 1,8% (n = 4) de casos demonstraram imunorreactividade MICA em menos do que 5% das células de tumor (Tabela 4 ).
Caracterização e fenótipos de células CIK
As células CIK expandidas foram analisadas por citometria de fluxo. A análise fenotípica das células CIK de 38 pacientes após 14 dias de cultura demonstraram que as percentagens de células CD4 +, CD8 +, CD3-CD56 +, CD3 + CD56 + células foram de 45,2 ± 7,5%, 37,1 ± 9,2%, 25,2 ± 9,8% e 18,2 ± 5,6 %, respectivamente (Figura 2). Analisou-se a expressão em células de NKG2D CIK expandidas in vitro. Verificou-se que apenas 2,6 ± 1,2% de células T CD4 + foram NKG2D +, enquanto que as outras células CIK expressa NKG2D. populações, a percentagem de NKG2D + em CD8 +, CD3-CD56 + e CD3 + CD56 + foram de 88,6 ± 5,4%, 97,2 ± 2,1% e 92,8 ± 3,8%, respectivamente (Figura 3).
Comparação de expressão MICA com paciente e do tumor características
A pontuação histoquímica da imunorreatividade foi obtida pela soma das pontuações de intensidade e percentuais. Casos com dezenas de 0-4 foram definidos como o grupo de baixa expressão, e os casos com escores de 5-7 foram definidos como o grupo de alta expressão. O grupo de baixo expressão incluídos 84 casos (37,8%) e do grupo de alto expressão contida 138 casos (62,2%). Análise utilizando o método de pontuação histoquímica revelou relações estatisticamente significativas entre a expressão MICA e o estadiamento do câncer de pulmão, pontuação ECOG, sexo e idade. Não houve correlação significativa entre a expressão MICA e tipo patológico (Tabela 5).
sobrevivência Análise univariada
Entre 222 pacientes, havia 160 machos e 62 fêmeas e a sobrevida global mediana foi de 13 meses, 95% CI (11,918-14,082), ea taxa de sobrevivência de 1 ano e taxa de sobrevida de 2 anos foram de 52,3% e 19,8%, respectivamente (Figura 4A). Pela análise univariada, expressão MICA, sexo, idade, estágio TMN, pontuação ECOG e terapia CIK foram preditores para a sobrevida global (todos p 0,05), enquanto que o subtipo histológico não foi (p = 0,544) (Tabela 6). A sobrevida média dos pacientes com uma alta expressão de MICA foi significativamente menor do que aqueles com uma baixa expressão do MICA, p = 0,01 pelo teste log-rank (Figura 4B).
OS em 222 pacientes (A ). OS na população em geral e pela expressão MICA (B). OS na população em geral através da expressão MICA e terapia CIK (C).
Para confirmar a importância da terapia CIK no tratamento do NSCLC avançado com alta expressão de MICA, dividimos o 222 pacientes em um grupo grupo CIK e controle. Na análise de subgrupo do OS médio (MOS) dos pacientes no grupo CIK com alta expressão de MICA foi mais longo do que o OS para pacientes com baixa expressão de MICA (27 meses versus 13 meses). No grupo controle, os MOS de pacientes com alta expressão de MICA foi menor do que em pacientes com baixa expressão de MICA (9 meses versus 18 meses) (Figura 4C). Além disso, a análise de regressão de Cox mostrou que a expressão MICA tem um efeito significativo sobre a terapia CIK (p = 0,001).
multivariada análise
Na análise multivariada, expressão MICA, sexo, idade, ECOG marcar e terapia CIK foram fatores prognósticos independentes (Tabela 7). Pudemos ver que o risco de morte para pacientes com alta expressão de MICA foi 3,08 vezes maior do que para os pacientes com baixa expressão de MICA. Isto sugere que a expressão elevada de mica era um indicador de prognóstico pobre em doentes avançados de cancro NSCLC. A interação de MICA e CIK (p 0,0001), indicou que MICA superexpressão foi um preditor independente para a terapia CIK bem sucedido. Isto foi consistente com os resultados da análise de subgrupos univariada. Nós não introduzir estágios clínicos na análise multivariada como os doentes incluídos em nosso estudo foram todos os casos NSCLC avançado.
Discussão
A terapia para NSCLC avançado entrou na era da individualizado tratamento. Como imunoterapia no tratamento do cancro do pulmão está se tornando disponíveis, é agora importante identificar os fatores que predizem quais pacientes respondem melhor à terapia imune.
MICA raramente é expresso por células normais, embora tenha sido relatado que MICA é constitutivamente expresso por células epiteliais intestinais, e é amplamente expressa em uma variedade de doenças malignas, tais como cancro da mama, ovário, cólon, rim, pâncreas, cancro da próstata, carcinoma hepatocelular, melanoma e [8], [9], [10]. Esta análise retrospectiva de 222 tumores NSCLC investigado o papel da proteína relacionada com o stress MICA como um marcador de prognóstico no NSCLC avançado e explorou a relação entre a expressão de mica e a eficácia da terapia CIK para o tratamento de NSCLC avançado. Análise de expressão MICA nos 222 tumores NSCLC revelou que a expressão imuno-histoquímica de MICA dentro dos tumores pulmonares foi amplamente homogênea. A maioria dos tumores pulmonares neste estudo mostrou uma forte expressão citoplasmática e membrana celular de MICA, mas epitélio pulmonar normal não expressá-las. Estes resultados sugerem que a expressão de MICA ocorre somente após a transformação maligna durante o desenvolvimento do cancro do pulmão, o que é consistente com outros achados para muitas outras doenças malignas. Assim, estas moléculas têm potencial para ser utilizados como marcadores tumorais de cancro do pulmão. Andreas Busche et ai. [26] detectaram MICA em 40 casos NSCLC por imuno-histoquímica, e descobriu que 5 dos 17 casos de adenocarcinoma e 5 dos 23 casos de carcinoma epidermóide tinha expressão MICA positiva, o que significa que 27,5% dos casos NSCLC tinha expressão MICA positiva. A maior expressão MICA visto em nossos pacientes pode resultar de diferenças entre as populações e raças ou que todos os pacientes incluídos no estudo foram casos avançados, enquanto os 40 casos inscritos no estudo de Busche cobriu a faixa de fase I para a fase IV. Pelo teste do qui-quadrado e um teste de probabilidade exato, descobrimos que os pacientes com doença em estágio IV exibiu significativamente maior expressão MICA que os pacientes com doença em estágio III. Tendo em conta os resultados acima, inferiu-se que a taxa positiva de expressão MICA iria aumentar à medida que a fase do cancro do pulmão avançado. Mas ainda é preciso aumentar o tamanho da amostra e inscrever os pacientes em todos os estágios para testar a hipótese.
é bem sabido que a função citotóxica das células NK é activada directamente por células tumorais, enquanto que as células T CD8 + requer simultânea pré-sensibilização e estimulação HLA. expressão indutível-superfície do MICA em resposta ao estresse ou maligno transformação é pensado para marcar células disfuncionais para a eliminação de linfócitos citotóxicos através de mecanismos NKG2D mediadas [27], [28]. De facto, a expressão ectópica de ligandos NKG2D por tumores induz respostas dependente de perforina forte de linfócitos NK e T citotóxicos (CTL) in vivo [13], [29]. Estudos anteriores demonstraram que a expressão MICA é um marcador independente de um bom prognóstico no câncer colorretal e osteossarcomas [22], [30]. Por outro lado, a regulação positiva de MICA é um indicador independente de mau prognóstico no câncer de mama [23] e expressão MICA não se correlacionou com o prognóstico no câncer de ovário [24]. No entanto, o nosso estudo de NSCLC avançado demonstrou uma correlação significativa entre a expressão MICA e o estadiamento do câncer de pulmão. Na análise de sobrevivência, os pacientes com um prognóstico pobre eram mais propensos a ter altos níveis de MICA em seus tumores do que aqueles com um bom prognóstico.
expressão MICA em células de câncer de pulmão é uma espada de dois gumes. A mica é uma molécula induzida pelo stress que tem sido associada com a vigilância imunológica. No entanto, relatórios recentes identificaram um mecanismo pelo qual os tumores parecem ser capazes de subverter o mecanismo de vigilância imunológica. As células tumorais são conhecidos a proteína MICA expressam constitutivamente na superfície celular; No entanto, estas células também verter MICA numa forma solúvel, possivelmente através de proteólise [8], [15]. O derramamento de mica solúvel é acoplado com uma concomitante redução na expressão de superfície de célula NK de NKG2DL, conduzindo a sinais imunoestimuladores diminuídos para linfócitos citotóxicos [15]. Além disso, MICA solúvel está associada com uma regulação para baixo da expressão sistémica NKG2D na superfície de células T CD8 + e em γδ células T, desse modo, inibindo ainda mais a actividade antitumoral destas células imunes [31]. Para as células de câncer de pulmão, MICA foi expresso principalmente na membrana e no citoplasma. Assim, pode-se inferir que as células cancerosas com alta expressão de MICA na membrana poderia bloquear os receptores NKG2D liberando sMICA, e, assim, fugir rejeição imunológica. Esta pode ser uma das razões para o mau prognóstico dos casos de câncer de pulmão com alta expressão de MICA. Desse modo, MICA pode ter efeitos variáveis sobre o prognóstico e sobre o comportamento biológico dos tumores e génese do tumor influência e progressão.
assassino induzida por citocinas células (CIK) são linfócitos heterogêneos ex vivo expandidas T, com um T mista fenótipo -NK, que são capazes de exercer uma grande actividade anti-tumoral MHC-irrestrita contra os dois tumores sólidos e hematológicos [18], [32], [33], no entanto, estudos clínicos com células CIK ainda estão em sua infância e apenas informar sobre um relativamente pequeno número de pacientes, na maioria destes estudos. Actualmente, as evidências acumuladas sugerem que a resposta imunitária e amplificação de células CIK estão relacionados com a activação da via do receptor NKG2D sinalização [19], [20], [21], [34]. Tem sido demonstrado que o receptor NKG2D altamente expresso em células de CIK podem interagir com ligandos, como mica, sobre as células tumorais e activar as vias de segundo mensageiro de sinalização a jusante a partir do receptor NKG2D. CIK células se ligar a células de tumor por meio de um aumento da expressão de NKG2D e a sua ligação estimula células CIK para libertar perforina, que desempenha um papel na lise de células tumorais. A implicação é que importante CIK imunoterapia não pode ser limitado a um tipo específico de cancro ou HLA haplótipo, alargando a gama de potenciais doentes que poderiam beneficiar de uma tal abordagem. Além disso, as células de CIK pode contornar um mecanismo de escape do tumor imune importante quando as células tumorais regular negativamente a expressão de HLA. Nosso laboratório também confirmou que, com exceção de células-T CD4 +, as outras células CIK expressar NKG2D. Portanto, esperamos que a maioria das células CIK pode reconhecer o ligando MICA na membrana da célula do tumor de pulmão através de seu receptor NKG2D e tornar-se activado para matar as células tumorais.
Através da análise de fator único de 222 casos de cancro do pulmão de células não pequenas avançado no nosso estudo, verificou-se que o tratamento CIK tinha um efeito significativo no oS (p = 0,040). A análise de regressão de Cox mostrou que o tratamento com CIK podem ser utilizados como um dos factores de risco independentes, para doentes com cancro do pulmão de células não-pequenas avançada. Este estudo analisou ainda os casos em subgrupos e descobriu que pacientes com alta expressão de MICA tinha uma significativamente maior benefício de sobrevivência do tratamento CIK. Outras análises de regressão de Cox mostrou que, na intersecção de mica e a eficácia CIK, o valor de p é 0,0001, o que sugere que o tratamento com CIK tem um bom efeito em pacientes com expressão elevada de mica e de alta expressão de mica podem ser utilizados como um preditor para a eficácia do tratamento CIK.
os resultados são limitados pelo pequeno número de pacientes tratados com CIK, a natureza retrospectiva da análise, a variável número de ciclos de tratamento, eo estudo carece de uma avaliação de curto efeitos -TERM. Portanto, um modelo de tratamento para a expressão MICA guiada CIK para pacientes com câncer avançado de pulmão de não pequenas células precisa de uma investigação mais aprofundada com um tamanho da amostra expandida em estudos clínicos prospectivos.
Em conclusão, a avaliação da expressão MICA em células tumorais em pacientes com cancro do pulmão de células não pequenas avançado iria ajudar a determinar ainda mais o prognóstico do paciente. Os doentes com tumores expressando alta MICA têm um prognóstico relativamente mais pobre, no entanto, por causa da interacção entre o receptor NKG2D de activação em células CIK e mica sobre as células tumorais, de expressão elevada de mica podem melhorar a eficácia da terapia CIK e melhorar a sobrevivência. Isto proporciona um novo tratamento individualizado para imunoterapia futuro e uma base teórica para futuros estudos prospectivos, com um tamanho de amostra expandida.
Reconhecimentos
Os autores gostariam de agradecer Drs Liyuan Zhang Weifeng e Zhu (Departamento de Patologia, Fujian Provincial Hospital do Câncer) para os seus conselhos técnicos e observações histológicas.