Abstract

Objectivo

Para explorar a associação de uma variante da linha germinativa funcional no 3′-UTR de

KRAS

com o risco de cancro do endométrio, bem como a associação de microRNA assinaturas e (miRNA) a

KRAS

-variant com características clínicas e os resultados de sobrevivência em dois RTOG estudos prospectivos de câncer endometrial.

Métodos /Materiais

a associação do

KRAS

-variant com o risco de câncer endometrial foi avaliada por análise de 467 mulheres de caso-controle com tipo 1 ou 2 câncer de endométrio e 582 controles pareados por idade. miRNA e DNA foram isoladas para criação de perfis de expressão e genotipagem de amostras tumorais de 46 mulheres com tipo 1 câncer endometrial envolvidos em ensaios RTOG 9708 e 9905. Os níveis de expressão de miRNA e

KRAS-

genótipo variante foram correlacionados com a paciente e do tumor características , e os resultados de sobrevivência foram avaliados por tipo alelo variante.

resultados

O

KRAS

-variant não foi significativamente associada com o risco global do cancro endometrial (controles de 14% e 17% cancros do tipo 1), embora tenha sido enriquecida em tipo 2 cancros do endométrio (24%, p = 0,2). Na análise combinada de RTOG 9708/9905, expressão miRNA diferiam por idade, presença de invasão linfática e

KRAS

estatuto -variant. as taxas de sobrevida global em 3 anos para pacientes com os alelos variantes e do tipo selvagem foram de 100% e 77% (HR 0,3, p = 0,24), respectivamente, favorecendo a variante.

Conclusões

o

KRAS-

variante pode ser um marcador genético de risco de câncer endometrial tipo 2. Além disso, a expressão de miARN tumor parece estar associada com a idade do paciente, e a invasão linfovascular

KRAS-

variante, suportando a hipótese de que alterou a biologia do tumor pode ser medida através de expressão de miARN, e que o

KRAS-

variantes prováveis ​​impactos biologia tumor endometrial

Citação: Lee. LJ, Ratner E, Uduman M, Inverno K, Boeke M, Greven KM, et al. (2014) O

KRAS-

Variant e miRNA Expressão em Ensaios Clínicos RTOG cancro Endometrial 9708 e 9905. PLoS ONE 9 (4): e94167. doi: 10.1371 /journal.pone.0094167

editor: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 02 de dezembro de 2013; Aceito: 12 de março de 2014; Publicação: 14 de abril de 2014

Direitos de autor: © 2014 Lee et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado pelo NCI-NIH concessão 5R01CA098346. Esta pesquisa também foi apoiado pelo Radiation Therapy Oncology Group /American College of Radiology (RTOG /ACR) Programa de Bolsas e RTOG concede U10 CA21661 e concessão CCOP U10 CA37422 do National Cancer Institute (NCI), e pelo NCI-NIH concessão 5R01CA098346. JW foi apoiada por R01 CA131301-04, CA-157749-01A15 e 5R01CA131301-05. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:. Dr. Weidhaas e Dr. Slack descobriu o KRAS variante, que é patenteado pela Universidade de Yale. Esta patente é chamado de “Genetic lesão associada ao câncer”, e o número é 8221980. Ele foi licenciado para uma empresa, Mira Dx, que o Dr. folga e Dr. Weidhaas co-fundador. Nem Dr. Slack nem Dr. Weidhaas são empregados ou pagos por Mira Dx, mas agir como consultores científicos não pagos. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

A heterogeneidade clínica e biológica do câncer endometrial tem sido bem reconhecido desde a descrição dos dois principais subtipos por Bokhman em 1983 [1]. Tipo 1 cancro do endométrio, o subtipo endometrioid, está associada à exposição sem oposição estrogênio, anovulação crônica, nuliparidade e obesidade. Tipo 2 cancro do endométrio inclui os subtipos não-endometrióides menos comuns de carcinoma seroso papilífero e clara uterina. Tipo 2 cancros são freqüentemente vistos em mulheres mais velhas, surgem no endométrio atrófico, e não são estrogênio responsivo. A classificação de duas camadas de cancro do endométrio com base em fatores clínicos e patológicos também é suportado em um nível molecular. Outra classificação molecular foi recentemente avançada pela publicação de The Cancer Genome Atlas [2]. A perda do supressor tumoral

PTEN

foi avaliado em 30-50% dos cancros do tipo 1 [3] – [5], mas raramente é observada nos subtipos de células serosas ou claras [6]. O HER2 /neu proto-oncogene, um receptor do factor de crescimento trans-membrana, é geralmente amplificado ou sobre-expresso em cancros do tipo 2 [7], [8]. Gene perfil de expressão por análise de microarray, também confirmou a presença de distintos subtipos de cancro do endométrio [9]. Outras alterações moleculares característicos incluem microsatélites instabilidade [10] e mutação do

beta-catenin

[11] em carcinomas do endométrio endometrióides e perda de expressão e p53 mutações E-caderina em cânceres serosa [5]. Tumor mutações adquiridas em

KRAS

foram identificados em 15-30% dos cancros do endométrio tipo 1, mas são raramente observadas (0-5%) em cancros de tipo 2 [12]. A prevalência da adquirida na tumor

KRAS

mutações foi variável associada com o estágio, grau e sobrevivência no cancro endometrial [13] – [16].

KRAS

mutações também foram detectados na hiperplasia endometrial, e pode representar um evento precoce na tumorigênese para o tipo 1 câncer de endométrio.

Embora a terapia adjuvante para o tipo 2 câncer de endométrio geralmente envolve quimioterapia, o papel de quimioterapia e radioterapia combinada (RT) para o de alto risco e tipo estágio avançado 1 cancros é mais controverso. Mulheres com tipo 1 cancros uterinos com fatores de risco patológicas tais como invasão profunda do miométrio, alto grau tumoral, invasão cervical e /ou disseminação extra-uterina pélvico-confinados têm um risco 15-30% de recorrência apesar radioterapia adjuvante pélvica (RT) [17]. O Therapy Oncology Group (RTOG) realizou dois ensaios prospectivos multi-institucionais (9708 e 9905) que foram projetados para avaliar a viabilidade e eficácia da quimioterapia concomitante e pós-operatório RT para mulheres com Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia (FIGO) Fases IC-IIIC, de alto risco, tipo 1 câncer endometrial. Dadas as taxas de resposta relatados de 30-35% com a quimioterapia sozinha, esses ensaios foram conduzidos para avaliar os resultados de segurança e de sobrevivência para uma abordagem modalidade combinada para de alto risco e câncer endometrial estágio avançado. RTOG 9905, a comparação randomizada entre quimioradioterapia adjuvante em relação ao sozinho RT, foi fechado mais cedo devido à má competência e, portanto, terminais de sobrevivência não foram analisados. No entanto, o tecido foi coletada para a exploração de novos biomarcadores e correlações clínicas.

Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNA não-codificante pequena que inibem a expressão do gene de alvos a jusante por sítios de ligação complementares em regiões não traduzidas 3 ‘ (UTR) do RNA mensageiro. Como reguladores de genes globais, função miARNs como uma nova classe de oncogenes ou supressores de tumor, dependendo do contexto celular. Alterações nos níveis de expressão de miARN têm sido implicados na oncogénese, bem como a biologia do tumor em praticamente todos os tipos de cancro [18]. assinaturas de expressão miRNA distintos também foram descritas para os cânceres de tipo 1 e tipo 2 endometriais [19], apoiando a sua capacidade de refletir a biologia do tumor inerente. Além disso, as variantes herdadas em sítios de ligação em oncogenes miARN foram mostrados para prever o risco de cancro, a biologia do tumor e assinaturas de miARN alterados [20].

O primeiro exemplo de uma mutação no local de ligação funcional miARN é um alelo variante 3′-UTR de

KRAS

(rs61764370), uma mutação germinativa encontrados para interromper

let-7

ligação, aumentar a

KRAS

expressão [21] e prever risco de câncer [21] – [24]. Esta mutação tem sido adicionalmente associado a expressão genética alterada e miARN em tumores [21] – [23], [25]. Curiosamente, o

KRAS-

variante prevê risco de câncer de ovário em mulheres na pós-menopausa [22], câncer triplo-negativo de mama em mulheres na pré-menopausa [22], e da biologia do tumor de mama agressivo em mulheres pós-menopáusicas com um história da terapia de reposição hormonal [26], o que sugere que há um provável impacto do estrogênio sobre a função associada ao tumor do

KRAS-

variante. Além disso, o

KRAS-

variante parece prever biologia do cancro em todos os cancros até agora estudados, incluindo aqueles para os quais ele não aparece para prever risco aumentado [27] – [28].

os objectivos deste estudo foram multifold: 1) para determinar se o

KRAS-

variante está associada com o risco de câncer endometrial; 2) avaliar a associação de assinaturas de expressão miRNA com características clínicas em amostras de tumores de RTOG 9708 e 9905; e 3) para determinar se o

KRAS

-variant está associado com a biologia do cancro endometrial, avaliando as duas associações expressão clínica e miRNA nesses mesmos ensaios.

Materiais e Métodos

dados de caso-controle

os sujeitos do estudo caso-controle foram os residentes de Connecticut diagnosticado com câncer endometrial primária entre outubro de 2004 e setembro de 2008. equipe estudo do braço Apuração rápida caso do Yale cancer Center visitou o general Connecticut hospitais para determinar a elegibilidade caso e informações de identificação. Os controles foram identificados por marcação aleatória dígitos. As amostras de sangue ou amostras de saliva foram coletadas a partir desses sujeitos do estudo. A partir de amostras recolhidas, o ADN foi isolado utilizando o kit de MagNA pura de ácido nucleico (de diagnóstico Roche, Indianapolis, IN) para as células do sangue buffy-coat, e Oragene kit (ADN Genotek Inc, Canadá) para amostras de saliva. A presença do

KRAS

-variant foi detectada utilizando um ensaio TaqMan PCR para identificar o tipo selvagem (T) ou alelo variante (G), utilizando sondas específicas de alelo, como previamente descrito [21]. Devido à freqüência do alelo menor, o heterozigoto (TG) e formas homozigotos (GG) foram combinados para análise para comparar com o alelo selvagem (TT).

Declaração de Ética para dados de caso-controle

Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Investigações Humanos da Yale e Estado do Departamento de Comitê de Investigação Humana Saúde Pública Connecticut. Certos dados utilizados neste estudo foram obtidos a partir do Registro Tumor Connecticut no Departamento de Saúde Pública de Connecticut.

RTOG 9708 e 9905

RTOG 9708 foi um estudo de fase II de braço único de adjuvante RT combinado com cisplatina e paclitaxel quimioterapia, que envolveu 45 pacientes com tipo I FIGO 1988 Fase IC-IIIC endometrióide adenocarcinoma do útero. O julgamento sucessor, RTOG 9905, era um de dois braços estudo randomizado de fase III da RT adjuvante com ou sem o mesmo regime de quimioterapia, que envolveu 42 pacientes. Todos os pacientes incluídos nos dois estudos começou a radioterapia adjuvante no prazo de 8 semanas após a cirurgia (histerectomia abdominal total e salpingo-ooforectomia bilateral). Os doentes elegíveis tinham grau 2 ou 3 de adenocarcinoma com maior do que 50% invasão do miométrio, o envolvimento do estroma cervical ou doença extra-uterina pélvica-confinado e /ou citologia positiva peritoneal. Pacientes com histologia não-endometriod, tal como células seroso papilar ou clara, foram excluídos destes estudos. Tratamento

adjuvante incluía pélvica RT para uma dose de 45-50,4 Gy seguido por braquiterapia vaginal. A cisplatina (50 mg /m2) foi entregue concorrentemente nos dias 1 e 28. Após a conclusão da RT, os doentes receberam 4 ciclos de cisplatina adjuvante (50 mg /m

2) e paclitaxel (160-175 mg /m

2) dada a cada 4 semanas. Os pacientes foram observados em follow-up a cada 4 meses para 2 anos, depois a cada 6 meses para um ano e depois anualmente. Um exame de Papanicolaou e radiografia de tórax foram realizadas a cada ano.

Declaração de Ética para RTOG 9708 e 9908

consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes antes da inscrição. Os resultados e toxicidade dados clínicos para RTOG 9708 foram previamente publicados [17], [29]. RTOG 9905 foi interrompido precocemente devido à má competência e acompanhamento foi interrompido após pelo menos 12 meses de acompanhamento para cada paciente.

O isolamento de DNA e RNA e Testes do

KRAS

-variant e miRNAs

amostras tumorais de blocos fixados em formalina e embebidos em parafina foram microdissectados após a identificação de áreas com celularidade tumor suficiente por um patologista. secções de tumor foram de-parafinado utilizando xileno e o DNA foi isolado para a genotipagem do

KRAS

-variant como descrito acima. O ARN total foi isolado a partir de amostras de tumor embebidas em parafina usando o Ambion Recuperar Todos Kit (Life Technologies, Grand Island, NY) seguindo as instruções do fabricante. miRNA foi executado na plataforma ABI Taqman TLDA. As amostras foram genotipados para o

KRAS-

variante. Os dados estava em Hardy-Weinberg.

Análise Estatística

A análise estatística foi realizada utilizando o software estatístico JMP, v. 8.0.1 (SAS Institute, Cary, NC). Para a análise de caso-controle, a prevalência do alelo variante (TG /GG) foi comparada para os casos com controles de câncer e populacionais endometrial utilizando o teste exato de Fisher. Clínica, patológicos e tratamento características dos pacientes nos ensaios RTOG foram comparados por tipo alelo (tipo selvagem vs. variante) usando um teste t ou o teste exato de Fisher. estimativas atuariais de sobrevida livre de doença (DFS) e sobrevida global (OS) foram calculados pelo método de Kaplan-Meier. O método incidência cumulativa foi usada para estimar as taxas de falha local-regional (LRF) e insuficiência distante (DF). OS foi calculado a partir da data da randomização até a morte por qualquer causa. DFS foi definido como o intervalo entre a data da randomização até que o desenvolvimento de metástases distantes, insuficiência loco-regional ou morte devido a qualquer causa. LRF foi definido como recorrência primária ou progressão, a recorrência vaginal e /ou recorrência nodal ou progressão. DF foi definida como metástases à distância e /ou falha para-aórtica. A análise univariada foi realizada utilizando Cox modelos de riscos proporcionais. taxas de prevalência estimada para o alelo variante foram usados ​​para cálculos de potência. Um erro tipo 1 (α) inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Para dados de expressão de miRNA, todas as análises estatísticas pré-processamento e foi realizada no ambiente de programação estatística R, usando funções personalizadas e do limma Bioconductor pacote. Cada amostra foi normalizada separadamente usando os oito ARN de controlo endógenos, e, em seguida, as intensidades foram dimensionados através das amostras de ter distribuições semelhantes. mudanças estatisticamente significativas na expressão de miRNA entre as amostras agrupadas por idade, raça, presença de invasão do espaço linfovascular, DFS e

Status -variant KRAS

foram determinadas usando limma com p 0,05 ajustados por uma correção de Bonferroni, e uma dobra absoluta -change ≥2. agrupamento hierárquico foi baseado em distância euclidiana métrica e articulação de Ward.

Resultados

O

KRAS

-variant e Endometrial Cancer Risk

No caso-controle estudo, para avaliar o papel do

KRAS-

variante em predizer o risco de câncer uterino, os dados de alelos foi obtida para 583 controles populacionais, 430 pacientes com o tipo 1 do cancro endometrial e 37 pacientes com câncer de tipo 2. A prevalência do alelo variante foi de 13,9% entre os controles e 16,5% para os pacientes com câncer de endométrio (p = 0,29). Como mostrado na Tabela 1, a prevalência da variante aparentemente mais elevada em pacientes com cancro do útero tipo 2 da histologia não-endometrióide (24,3%) em comparação com o tipo 1 do cancro endometrial (16,7%) ou controlos da população (13,9%). No entanto, nenhuma das diferenças atingiram significância estatística provavelmente devido ao pequeno número de tipo 2 tipos de câncer neste estudo.

Mirna Expressão em RTOG 9708 e 9905

padrões de expressão de miRNA foram avaliados a partir de amostras tumorais de pacientes inscritos em RTOG 9708 e 9905 e testados para a associação com características clínicas e patológicas. Não foram encontradas diferenças significativas na expressão de miRNA entre amostras dos dois ensaios (dados não mostrados), portanto, as amostras foram combinados para a análise subsequente. padrões de expressão de miRNA diferiu entre os tumores com invasão linfática (LVI) versus aqueles sem. miRNAs diferencialmente expressos (valor de p 0,05 e dobre-change 2) incluiu miR-194, miR-192, miR-203, miR-345, miR-30e-3p, miR-210 e miR-301 (Tabela S1, Figura 1), todos os quais foram sobre-expressos em tumores com LVI presente. Da mesma forma, houve diferenças na expressão de miRNA com base na idade do paciente: tumores em mulheres idosas (≥51 anos) mostrou sobre-expressão de miR-20b, miR-10a e miR-187 e subexpressão de miR-432 e deixe-7d (Tabela S2 , a Figura 2) em comparação com tumores de mulheres mais jovens ( . 51 anos)

O amarelo representa pacientes com LVI e azul representa pacientes sem LVI

O amarelo representa pacientes com idade inferior. 51 anos de idade, e azul representa pacientes igual ou mais velhos do que 51 anos de idade.

Associações clínicas da

KRAS

-variant em Trials RTOG 9708 e 9905

estavam disponíveis dados alelo para 46 de 87 pacientes avaliáveis ​​(53%) matriculados em RTOG 9708 e 9905. A disponibilidade de dados alelo foi semelhante para os dois ensaios, que incluiu 22 pacientes (49%) de 9708 e 24 pacientes ( 57%) a partir de 9905. a prevalência da

KRAS

-variant foi de 22% no total, e foi de 18% (n = 4) e 25% (n = 6) a partir de 9708 e 9905, respectivamente. O

KRAS-

variante foi encontrada em apenas 1 dos 11 (10%) mulheres com menos de 51 anos de idade no momento do diagnóstico de câncer uterino, e em 9 de 35 (28%) mulheres que eram mais velhos, embora estas taxas de prevalência não foram estatisticamente diferentes (p = 0,41), provavelmente devido ao pequeno tamanho da amostra.

o tempo médio de acompanhamento para pacientes com dados alelo na análise combinada foi de 29,3 meses (min-max, 6.8-124.1 meses). As características dos pacientes, incluindo idade, estado de desempenho ECOG e raça, não foram significativamente diferentes entre mulheres com e sem o

KRAS-

variante (Tabela 2). De 1988 a distribuição estágio FIGO, histologia, profundidade de invasão do miométrio superior a 50% ea presença de LVI também foram semelhantes entre os grupos.

As taxas de SO 3 anos foram de 100% para o

KRAS-

pacientes variantes e 77% (95% intervalo de confiança [CI]: 58% -87%) para os pacientes não-variantes (hazard ratio [HR] = 0,3, IC 95%: 0,04-2,29, p = 0,24). Um dos 10 pacientes (10%) com a

KRAS-

variante tinha LRF e 2 (20%) tinha DF em comparação com 7 (19%) e 13 (36%), respectivamente, entre os pacientes com a não alelo -variant. As horas para LRF e DF foram de 0,45 (IC 95%: 0,05-3,65, p = 0,45) e 0,44 (IC 95%: 0,10-1,97, p = 0,28) para operadoras de variantes. Estas tendências não foram significativas, talvez porque o poder do estudo foi de apenas 14-41% para detectar uma diferença significativa nos parâmetros clínicos devido ao pequeno tamanho da amostra e limitado follow-up.

Expression Mirna e

KRAS

-variant no RTOG 9708 e 9905

como o

KRAS-

variante tem sido mostrado previamente para ser associado com gene alterado, bem como a expressão miRNA em tumores, avaliou-se a miRNA assinaturas de tumores com e sem a

KRAS-

variante. Além disso, dado que as assinaturas de miRNA diferiu entre os tumores com base na idade do paciente (ponto de corte de 51 anos), e que a maioria dos pacientes com a

KRAS-

variante eram pós-menopausa, avaliamos estas diferenças apenas nos tumores de pacientes com mais de 51 anos. Foram encontradas diferenças significativas nas assinaturas de miRNA entre tumores de pacientes com a

KRAS-

variante e aqueles sem o

KRAS-

variante. Estes incluíram menor expressão de miR-181b, miR-324-3p e miR-518b em

KRAS-

tumores dos pacientes variantes (Tabela 3, Figura 3).

O amarelo representa os pacientes sem a

KRAS-

variantes, e pacientes azuis com o

KRAS-

variante.

Discussão

Este estudo representa a primeira análise da associação do

KRAS-

variante com cancro do endométrio. Embora o

KRAS

-variant não foi um preditor de risco global de cancro endometrial, foi enriquecido em pacientes com tipo 2 tipos de câncer, com uma prevalência de 24,3%. Além disso, em dois estudos prospectivos RTOG câncer endometrial, assinaturas de miRNA, bem como o

KRAS-

variante foram associados com características clínicas distintas. assinaturas de miRNA foram diferentes entre os tumores com ou sem LVI, entre tumores no pré vs pacientes na pós-menopausa, e entre

KRAS-

pacientes variantes e pacientes não-variantes. Embora RTOG 9708 e 9905 não foram movidos para detectar associações estatisticamente significativas entre o

KRAS

resultado -variant e, a tendência era que o

KRAS-

variante foi associada a um melhor resultado, embora a confirmação da esta hipótese requer testes em um estudo maior, com maior poder estatístico.

Apesar de a associação de expressão miRNA e características clínicas alterados de um tumor tem sido bem documentada, pode parecer surpreendente que o

KRAS

-variant, uma linha de germe, não proteico mutação sequência de codificação que interrompe a ligação miRNA, prevê alterado assinaturas de miRNA em um tumor e também altera o prognóstico. No entanto, a associação do

KRAS-

variante com assinaturas de miRNA alterados foi encontrado em cada tumor em que foi analisada, incluindo o cancro do pulmão [21], melanoma [10], câncer de cabeça e pescoço [30 cancro da mama triplo negativo [23]] e.

a associação do

KRAS-

variante com prognóstico em todos os tipos de tumor também tem sido amplamente relatado. Em uma coorte de 344 pacientes com câncer de cabeça e pescoço, embora não tenha sido observada uma associação com o risco de câncer, portadores da variante tinha uma pior evolução clínica quando ajustado para idade e estágio (HR 1,6, IC 95% 1,0-2,5) [30], com menores taxas de sobrevivência mais pronunciada entre os pacientes com câncer de cavidade oral em comparação com sites da faringe e da laringe. Vários estudos descobriram que o

KRAS

-variant prediz resposta alterada para o cetuximab em doentes com cancro metastático colorectal [28], [31]. No cancro do ovário, o

KRAS-

variante prevê mau resultado devido à resistência de platina [23]. resistência de platina também foi encontrada em pacientes que receberam quimioterapia sozinha para a cabeça metastático e câncer cervical (Chung, submetido). resistência de platina é particularmente interessante no contexto dos ensaios RTOG examinadas neste estudo, em que uma proporção de pacientes receberam cisplatina entregue simultaneamente com a radiação e em conjunção com paclitaxel. Pode-se supor que a adição de radiação para agentes de platina pode superar a resistência associada, uma hipótese que está actualmente a ser avaliado em ensaios adicionais RTOG.

Entre

KRAS

-variant tumores positivos e negativos em neste estudo, 3 miARNs foram expressos diferencialmente, incluindo o miR-181b, o miR-324 e miR-518b. Em estudos pré-clínicos, de miR-181b tem sido demonstrado para promover a proliferação celular e reduzir a apoptose em células de cancro do colo do útero [32], mediar a tumorigénese através da STAT3 [33], e induzir a resistência à gemcitabina em células de cancro pancreático [34]. Em tumores de células germinais humanos, a sobre-regulação de miR-518b foi associada com um fenótipo resistente a cisplatina [35]. Estes estudos podem explicar os melhores resultados observados em nosso trabalho que favoreceu os

KRAS

pacientes -variant, como

KRAS-

tumores variantes apresentaram menores níveis de miR-518b de expressão. Em um estudo de carcinoma da nasofaringe, a regulação negativa de miR-324 foi associada a radiorresistência [36]. Em nosso estudo,

KRAS-

tumores variantes tinham menores níveis de miR-324, apesar de não haver radiorresistência claro como estes doentes tinham melhorado as taxas de controle local-regional.

Para uma visão global do que a expressão miRNA diferenciais encontrados em nossos tumores podem representar, usamos miR System, que combina 7 algoritmos e 2 bancos de dados validados para identificar genes alvos potenciais de miRNAs e sua função, bem como análise de caminho usando KEGG (Enciclopédia Kyoto de genes e genomas) [37]. Os genes alvo de miR-181b incluem

MAP3K3

(ativada por mitógeno proteína quinase 3, hit top),

ESR1

(receptor de estrógeno 1, um alvo validado), e

KRAS

, enquanto aqueles para miR-518b incluem

CTNNBIP1

(proteína interagindo β-catenina) e

MAP3K7IP3

(ativada por mitógeno proteína quinase 7 interagindo proteína 3). Para a análise via dos genes alvo enriquecido, a expressão diferencial dos miARNs listados acima foram associadas a potenciação a longo prazo, as vias em cancro, e cancro do endométrio, bem como as seguintes vias de sinalização: TGF-β, ErbB, MAPK, e Wnt . A via de sinalização /β-catenina Wnt tem sido mostrado para ser desreguladas em 10-45% dos cancros do endométrio e é intimamente regulados por estrogénio e progesterona [38]. Além disso, KRAS é um importante mediador a montante da via de MAPK, e a sobre-expressão pode levar a um aumento da activação do /MEK RAF /MAPK e, assim, promover a tumorigénese. Os trabalhos anteriores mostraram que a via MAPK é ativado no cancro da mama triplo negativo com o

KRAS

-variant, e está associada com menor estrogênio sinalização [24]. Esses resultados e outros indicam que o papel do

KRAS

-variant no risco de câncer e biologia pode ser dependente ambiente hormonal, como o status da menopausa, um tema em curso de estudo.

Também realizamos análise de caminho para os 10 miARNs expressos diferencialmente para tumores com e sem invasão linfática. De interesse, previu vias envolvidas na adesão focal, a regulação da junção citoesqueleto de actina, junção lacuna e aderente foram top hits por KEGG, bem como a Wnt, MAPK, TGF-β, e ErbB vias de sinalização.

Embora nosso estudo foi limitado pelo pequeno tamanho da amostra dos ensaios RTOG nós utilizados, que forneceu poder estatístico insuficiente para nós desenvolver conclusões sólidas sobre o papel potencial do

KRAS-

variante em predizer o risco de câncer endometrial ou resultado , fomos capazes de ver um potencial associação com a expressão miRNA alterado nos tumores. Além disso, fomos capazes de recolher prospectivamente amostras de tecido em um ajuste do grupo cooperativo e realizar um estudo de investigação translacional, que produziu os dados preliminares vale validar em coortes maiores. Estes resultados suportam ainda a hipótese de que existem maneiras mensuráveis ​​para avaliar a heterogeneidade de cancro do endométrio, que poderia fornecer informações prognóstico importante no futuro para permitir que os profissionais a terapia mais adequada e individualmente direta paciente.

Informações de Apoio

tabela S1.

Associação entre a expressão de miRNA e invasão linfática

doi:. 10.1371 /journal.pone.0094167.s001

(DOCX)

Tabela S2.

Associação entre a expressão de miRNA e idade

doi:. 10.1371 /journal.pone.0094167.s002

(DOCX)

Reconhecimentos

A cooperação dos 28 hospitais de Connecticut, incluindo Charlotte Hungerford Hospital, Hospital Bridgeport, Danbury Hospital, Hospital Hartford, Hospital Middlesex, New Britain Hospital Geral, Bradley Hospital Memorial, Yale /New Haven Hospital, Hospital St. Francis Medical Center e, Hospital de Santa Maria, Hospital de São Rafael , Centro de St. Vincent Medical, Hospital Stamford, William W. Backus Hospital, Hospital Windham, Eastern Connecticut Health Network, Griffin Hospital, Hospital Bristol, Johnson Hospital Memorial, Hospital Kimball Dia, Hospital Greenwich, Lawrence e Memorial Hospital, Milford Hospital, New Milford Hospital, Hospital Norwalk, Midstate Medical Center, John Dempsey Hospital e Hospital Waterbury, ao permitir o acesso do paciente, é reconhecido agradecimento. Nós gostaríamos de agradecer Barbara prata e Corinne Doll para leitura crítica deste manuscrito.