Abstract

modelos de tumores de roedores atualmente utilizados, incluindo modelos de tumor transgénicos, ou subcutânea crescendo tumores em ratinhos, não são suficientes para representar o cancro clínica. Relatamos aqui desenvolvimento de métodos para obter um modelo de câncer retal altamente clinicamente precisas. Este modelo foi estabelecido por transplante de células de cancro intra-rectal do rato rectais, que expressam de forma estável a proteína verde fluorescente (GFP), seguido por perturbar a camada de células epiteliais da mucosa rectal por instilação de uma solução de ácido acético. tumoral na fase inicial foi detectado na mucosa rectal de 6 dias após o transplante. O tumor, em seguida, tornou-invasiva para a submucosa. A incidência do tumor foi de 100% e volume (± SD) médio foi de 1232.4 ± 994,7 milímetros

3 a 4 semanas após o transplante detectado por imagem de fluorescência. Espontânea metástase em linfonodo e metástase pulmonar também foram encontrados cerca de 4 semanas após o transplante em mais de 90% dos ratos. Este modelo de tumor rectal imita precisamente a história natural do câncer de reto e pode ser usado para estudar o desenvolvimento precoce de tumores, metástases, ea descoberta e avaliação de novas terapêuticas para esta doença resistente ao tratamento

Citation:. Kishimoto H, Momiyama H, Aki R, Kimura H, Suetsugu A, Bouvet, M, et al. (2013) Desenvolvimento de um Modelo rato Clinicamente precisa do cancro retal. PLoS ONE 8 (11): e79453. doi: 10.1371 /journal.pone.0079453

editor: Mateus, da Universidade de Stanford, Estados Unidos da América

Recebido: 27 de agosto de 2013; Aceito: 01 de outubro de 2013; Publicação: 12 de novembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Kishimoto et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte por doações de Jovens cientistas (B), o Ministério da Educação, Cultura, Desporto, Ciência e Tecnologia, Japão (HK). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores têm as seguintes participações: Hiroyuki Kishimoto, Masashi Momiyama, Ryoichi Aki, Hiroaki Kimura, Atsushi Suetsugu eram ex-filiais da AntiCancer Inc. Robert M. Hoffman é uma filial não-remunerada da AntiCancer Inc. AntiCancer Inc. comercializa modelos animais de câncer. Não há outros interesses concorrentes. Não há patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento, como detalhado em linha no guia para os autores.

Introdução

modelos de implantação heterotópico, tais como implantes subcutâneos de tumor em camundongos têm sido tradicionalmente utilizados para avaliar o tratamento antitumoral por causa de sua reprodutibilidade e monitoramento de formação de tumores. No entanto, os modelos heterotópicos não tem microambientes tumorais (TME) [1].

modelos de ratos geneticamente modificadas de câncer geralmente requerem um longo tempo para desenvolver tumores e são imprevisíveis no que diz respeito à freqüência, tempo e localização correspondente de tumores primários e ainda mais imprevisível quando e onde a metástase ocorre. Desde o desenvolvimento de tumores nestes animais raramente é síncrono, um grande grupo de animais devem ser alojados, a fim de se preparar para um número suficiente de animais em estágios apropriados de câncer. Um grande número de animais precisam ser examinados durante longos períodos de tempo para avaliar o tratamento do câncer, e apenas a sobrevivência é frequentemente utilizado como um ponto final, devido à dificuldade de acompanhamento quando os tumores aparecem em órgãos internos [2].

Vários tipos de modelos que utilizam o implante ortotópico de tumores têm sido desenvolvidas e utilizadas para avaliar a eficácia do fármaco anti-tumoral essencialmente [3]. Nestes modelos, quer suspensões celulares de cancro são injetadas nos fragmentos de órgãos ou de tecidos de tumor ortotópicos são suturados no órgão correspondente [4], [5] com o implante de fragmentos de tecido que tem sido mostrado para ser mais preciso [5], [6] . No que diz respeito aos modelos de cancro colorrectal, os tumores foram estabelecidos em tecidos submucosas ou na serosa do cólon, mas não sobre a superfície da mucosa do qual os tumores surgem, na verdade, em pacientes.

O objectivo deste estudo foi estabelecer um ” verdadeiro “modelo rectal ortotópico clinicamente preciso em que os tumores começam a se formar no tecido da mucosa do reto.

cultura celular

a linha de células de cancro colo-rectal do rato Materiais e Métodos

CT26 e a linha celular de cancro colorrectal humano HCT-116 foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de FBS. CT26 é uma N-nitroso-N-methylurethane- (NNMU) indiferenciada linha de células de carcinoma do cólon do rato induzida por [7]. HCT-116 foi derivado de uma primária amostra de cancro do cólon humano [8].

GFP e RFP vector de produção

O vector retroviral Plein (Clontech), expressando reforçada proteína verde fluorescente (GFP) e o gene de resistência à neomicina no mesmo mensagem bicistrónica, foi usado como um vector de expressão da GFP. PT67, uma linha de células de empacotamento derivada de células NIH3T3, que expressa o envelope viral 10 Al, foi adquirido a Clontech Laboratories, Inc. células PT67 foram cultivadas em DMEM suplementado com FBS a 10%. Para a produção de vector de GFP, células de empacotamento PT67, a 70% de confluência, foram incubadas com uma mistura precipitada de reagente DOTAP ™ (Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana), e quantidades saturantes de plasmídeo plein durante 18 h. Meio fresco foi reabastecido neste momento. As células foram examinadas por microscopia de fluorescência 48 h pós-transdução. Para a selecção, as células foram cultivadas na presença de 500-2.000 fig /ml de G418 (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) durante 7 d. O clone celular de empacotamento isolado foi denominado PT67-GFP [9] – [12].

Para a produção RFP retrovírus, o

Hind

III /

Não

I fragmentar a partir pDsRed2 (Clontech), contendo o ADNc de comprimento completo RFP, foi inserido no

Hind III

/

não

local I de pLNCX2 (Clontech) contendo o gene de resistência à neomicina. células PT67 foram cultivadas em DMEM suplementado com FBS a 10%. Para produção de vector, as células de empacotamento PT67, a 70% de confluência, foram incubadas com uma mistura precipitada de reagente LipofectAMINE (Life Technologies) e quantidades saturantes de plasmídeo pLNCX2-DsRed2 durante 18 h. Meio fresco foi reabastecido neste momento. As células foram examinadas por microscopia de fluorescência 48 h pós-transdução. Para a selecção de um clone de produção de grandes quantidades de vector retroviral RFP (PT67-DsRed2), as células foram cultivadas na presença de 200 a 1.000 ug /ml de G418 (Life Technologies) durante 7 d. O clone celular de empacotamento isolado foi denominado PT67-DsRed2 [9] – [12].

GFP e transdução gene RFP de linhas celulares de cancro

Para GFP e transdução gene RFP, as células cancerosas foram incubadas com uma mistura 1: 1 de precipitado sobrenadantes retrovirais de células PT67-DsRed2 PT67-GFP ou e RPMI 1640 contendo 10% de FBS durante 72 h. Meio fresco foi reabastecido neste momento. As células foram recolhidas por tratamento com tripsina /EDTA 72 h pós-transdução e subcultivadas a uma razão de 1:15 em meio selectivo, que continha 200 ug /ml de G418. O nível de G418 foi aumentada até 800 ug /ml de um modo passo a passo. Os clones expressando níveis elevados de GFP ou RFP foram isoladas com cilindros de clonagem (produtos de arte BEL) utilizando tripsina /EDTA e amplificadas por métodos convencionais de cultura, na ausência de agente selectivo [9] – [12].

Ratos

Nude

nu /nu

ratos (AntiCancer, Inc., San Diego, CA) foram mantidos em uma instalação de barreira na AntiCancer, Inc., sob a filtração HEPA e alimentados com uma dieta de roedores autoclavada laboratório (Tecklad LM-485, Western Research Products, Orange, CA). Todos os estudos com animais foram realizados com uma Comissão AntiCancer Institutional Animal Care e Uso (IACUC) -protocol aprovado especificamente para este estudo e de acordo com os princípios e procedimentos descritos no Instituto Nacional de Saúde Guia para o Cuidado e Uso de Animais sob Assurance Número A3873-1. Todos os procedimentos com animais foram realizadas sob anestesia utilizando s.c. administração de uma mistura de cetamina (10 ul cetamina HCL, 7,6 ul xilazina, 2,4 ul acepromazina maleato, e 10 ul de PBS).

nestina-driven proteína fluorescente verde (GFP-ND) ratinhos nus

foi examinado Interação do tumor CT26-RFP e anfitrião ND-GFP expressando células da mucosa retal. células CT26-RFP foram ortotopicamente transplantado para ratos pelados ND-GFP [13] pelos métodos descritos abaixo. Dez dias após o transplante do tumor, os ratinhos foram sacrificados e o anorectal foi dissecado. Tumor e interação célula ND-GFP foi observada com o sistema de imagem OV100

O rompimento da barreira mucosa rectal

A barreira mucosa rectal foi quimicamente interrompida pelo seguinte procedimento:. Depois os ratinhos foram anestesiados, um cateter de polietileno foi inserido no lúmen rectais através do ânus. O lúmen rectal foi lavada com 6 ml PBS para limpar o conteúdo do intestino. O lúmen rectal foi dilatado por meio da inserção de um afastador para a região anorectal, e, em seguida, a mucosa rectal foi bem embebida com uma solução de ácido acético a 4% durante dois minutos, seguido de uma lavagem com 6 mL de PBS (Fig. 1).

(a) a aparência normal do ânus mouse. barra de escala, 1 mm. (B) Afastador feita a partir de um tubo de infusão gota a gota. (C) O lúmen anorectais foi dilatada, inserindo o afastador na anorecto e instilado com uma solução de ácido acético. (C1) Antes de preparação de ácido acético. (C2) A cor da mucosa rectal mudou de rosa avermelhado a esbranquiçado após o tratamento com solução de ácido acético. m = mucosa rectal. barra de escala, 1 mm. (D) O exame histológico apenas após tratamento com ácido acético mostrou que a camada de células epiteliais da mucosa rectal foi traumatizado. (D1) H Secção E da anorecto normal. Um epitélio = superfície; B = mucosa; C = muscular da mucosa; D = submucosa; E = muscular externa. (D2) após tratamento com ácido acético. Note-se que apenas a parte superior da mucosa é interrompido. Top, × 40 ampliação; fundo, × 100 ampliação.

intrarretal instilação de células de câncer colorretal e exame para a formação de tumores

Imediatamente após o rompimento da barreira mucosa rectal, as células CT26-GFP (2,0 × 10

6) em 50 mL de Matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA), foram introduzidos e incutiu na superfície da mucosa rectal com uma agulha 28-gage inserido 4 mm do anel anal. O ânus foi selado, segurando o retractor no recto, por meio de fita de plástico imediatamente após a instilação de células cancerosas para evitar a fuga de células. A fita de vedação de plástico e o afastador no recto foram removidos a partir dos ratinhos depois de terem recuperado da anestesia. Após a implantação das células do cancro, observação não invasiva com o OV100 pequeno sistema de imagem animal [14] ou o microscópio de fluorescência MVX-10 [15] (ambos da Olympus, Tóquio, Japão) foi utilizado para detectar e caracterizar as células cancerígenas implantado. Em seguida, os ratos foram sacrificados para explorar possíveis metástases e para estudos histológicos. O volume do tumor foi calculado de acordo com a seguinte equação: volume do tumor (mm

3) = comprimento (mm) x largura (mm) x profundidade (mm) 0,5 × [16]

imagiologia óptica de fluorescência. e processamento

o microscópio OV100 Imaging System e MVX-10 de fluorescência foram utilizados para a detecção de fluorescência do tumor em crescimento. Imagens de alta resolução foram diretamente capturado em um PC e analisados ​​com software CellR (Olympus-Biosystems, Melville, NY) [14].

exame histológico

Depois de ratos foram sacrificados, o reto foi aberto longitudinalmente e inspeccionadas quanto à presença de tumores. O tumor rectal excisada foi então incorporado no meio de congelação, congelados e seccionados a 7 um, com um criostato. As lâminas foram observadas por fluorescência de células de tumor e subsequentemente examinadas microscopicamente por coloração com hematoxilina-eosina.

Resultados

A ruptura da barreira mucosa do recto

A barreira mucosa do recto de ratinhos nus foi interrompida por tratamento da mucosa com uma solução de 4% de ácido acético (Fig. 1A-C). Não houve mortes ou toxicidade patente relacionada a este procedimento. O exame histológico revelou que a camada de células epiteliais da mucosa rectal foi interrompido e desenrolada após tratamento com ácido acético (Fig. 1d). O tecido da mucosa estava agora pronto para aceitar as células cancerosas.

implantação ortotópico de células CT26-GFP

Imediatamente após a interrupção química da barreira mucosa rectal, rato colorectal células cancerosas CT26-GFP, misturado em Matrigel, foram introduzidos no lúmen rectal. O ânus foi selado com fita plástica após o enchimento do lúmen rectais com a suspensão de células do cancro, o que assegurou que as células cancerosas se manteve na mucosa rectal durante a anestesia. O tempo total do procedimento foi de aproximadamente 15 minutos por rato, e não houve complicações ou óbitos relacionados tanto tratamento com ácido e-célula cancerosa implantação acético.

Após o implante de células de câncer, o lúmen rectal foi noninvasively examinados com o MVX-10 microscópio de fluorescência ou OV100 pequeno Imaging System animal (Fig. 2a). As células CT26-GFP sobre a mucosa rectal podem ser facilmente visualizados por fluorescência de GFP com início 6 dias após o implante, o mais tardar. A incidência de tumores rectais na mucosa rectal foi de 100%. Nem a instilação de células cancerosas só ou tratamento com ácido acético sozinho resultou no crescimento de um tumor rectal.

(a) O reto foi representada por imagem de forma não invasiva de 10 dias após o implante. Esquerda, observação de campo claro; meio, tumores CT26-GFP que crescem na mucosa rectal eram claramente visíveis sob observação de fluorescência; direita, observação simultânea sob brilhante luz e imagens de fluorescência. barra de escala, 500 mm. (B) Após laparotomia, do recto foi aberto longitudinalmente a partir da parede anterior. À esquerda, aspecto macroscópico da cavidade abdominal. Barra de escala: 10 mm; meio, detalhe da região encaixotado; direita, observação simultânea sob brilhante-luz e de fluorescência. A localização da formação de tumores foi limitado na parede posterior do recto terminal. A linha vermelha, a direcção do corte transversal da rectal (c). A linha branca, a direcção do tumor secção transversal de (d). barra de escala, 2 mm. (C) A análise histológica confirmou que as lesões GFP positivas eram do tipo medular adenocarcinomas sem estruturas glandulares. À esquerda, detecção de fluorescência de tumores em uma seção congelada; meio, tumores positivas para GFP mostraram alta celularidade e foram confirmados como tumores que crescem na camada mucosa do recto; direita, fundiu imagem da H corte histológico e detecção de fluorescência E. Note-se que as células cancerosas localizar apenas na camada mucosa do recto. adenocarcinomas (D1-3) CT26 de tipo medular que invadem a camada submucosa para além dos limites da mucosa muscular (cabeças de seta vermelha). T = tumor. cabeças de setas pretas, muscular da mucosa. (E) a aparência histológica do tipo medular adenocarcinoma humano. cabeças de setas verdes indicam borda tumor [23].

Como mostrado na Fig. 2b, o local de formação de tumores foi limitada à parede posterior do recto terminal. Esta limitação da formação de tumores pode ser devido a permitir que a suspensão de células de cancro para contactar apenas o mucosa dorsal interrompido do recto.

Aos 10 dias após a implantação, a microscopia de fluorescência de secções congeladas e análises histológicas revelaram que os tumores eram crescente na camada de mucosa de um modo semelhante ao carcinoma do cólon medular humana (Fig. 2C-e). Em torno deste tempo, as células CT26-GFP que invadem a camada submucosa, para além dos limites da mucosa muscular, também foram detectados (Fig. 2d).

Todos os ratinhos tinham eventualmente, apenas um único tumor formado na mucosa rectal e o tamanho do tumor aumentou gradualmente ao longo do tempo (Fig. 3a). Uma vez que os tumores rectais prolapso através do ânus quando atingiram aproximadamente 3 mm de tamanho e, em seguida, cresceu fora do ânus, sem obstrução rectal ocorreu durante todo o período de observação em qualquer um dos ratos (Fig. 3b).

(a) Todos os ratos, eventualmente, teve apenas um único tumor formado na mucosa retal. O tamanho do tumor aumentou ao longo do tempo. (B) Prolapso tumor CT26 rectal crescente fora do ânus às 4 semanas após a implantação (cabeças de seta vermelha). Branco tubo inserido no recto (seta branca) mostra que a passagem ano-rectal é bem preservada, e não há nenhuma obstrução. Barra de escala, 10 milímetros

Em 4 semanas após a instilação de células cancerosas, o volume médio do tumor (volume ± DP média) atingiu 1232.4 ± 994,7 milímetros

3 (Fig. 3a), e espontânea metástases linfáticas foram detectados com alta ocorrência (Fig. 4). A taxa metastático para o nó de linfa mesentérica caudal (nó inferior linfa mesentérica em humanos) [17], [18], que é um linfonodo regional no cancro rectal, foi de 90,9%. Metástase para os linfonodos para-aórtico foi de 54,5% (Tabela 1). metástases do pulmão espontâneas, também foi detectada em 91,8% dos ratos (Fig. 5). No entanto, apenas 9% dos murganhos (1/11) tinham metástases do fígado (Tabela 2).

(a) Representação esquemática da anatomia em (b). O nó de linfa mesentérica caudal na origem da artéria mesentérica caudal. Este nó de linfa é equivalente para o nódulo linfático mesentérico inferior em seres humanos. barra de escala, 2 mm. (B1) linfonodo mesentérica caudal sob observação de luz brilhante. fluorescência (B2) GFP do nó de linfa mesentérica caudal em (b1), indicando que o nó de linfa continha uma metástase. barra de escala, 2 mm. (C) Dois linfonodos para-aórtica (vermelho e setas amarelas) foram identificados em outro mouse. seta branca indica metástase de linfonodo mesentérica caudal. barra de escala, 2 mm. (D) a observação Maior ampliação de um linfonodo para-aórtico indicado pela seta vermelha (c). GFP fluorescência de uma micro-metástases foi detectada (setas brancas). barra de escala, 1 mm.

(a) Aparência macroscópica do pulmão. Lung focos metastáticos foram detectados com fluorescência de GFP. barra de escala, 2 mm. (B) Aparência macroscópica do fígado. imagens de fluorescência detectada a expressão da GFP de CT26-GFP metástases hepáticas (setas vermelhas). Barra de escala, 10 mm.

Em cerca de quatro semanas, os ratos apresentaram sintomas caquéticos e teve de ser sacrificado por causa do tamanho do tumor.

Angiogenesis de rectal do rato ortotopicamente do tumor implantado em ND-GFP ratinhos nus

células CT26 que expressam RFP foram implantados ortotopicamente no recto de ratinhos nus GFP-driven nestina (ND-GFP) através dos métodos descritos acima. Dez dias após o implante,-ND-GFP expressando vasos sanguíneos nascentes foram visualizados crescendo na CT26 tumor rectal que expressam RFP no ratinho nu ND-GFP (Fig. 6).

(a) tumor CT26-RFP crescente na mucosa rectal do ND-GFP ratinhos nus (cabeças de seta brancas). A linha a vermelho, o sentido da secção transversal do tumor rectal de (b). barra de escala, 2 mm. (B) Corte transversal do tumor rectal. observação de luz luminosidade. barra de escala, 2 mm. (C) a observação de fluorescência de (b). barra de escala, 2 mm. (D) Detalhe da região em caixa em (c). ND-GFP-expressando vasos sanguíneos derivados do hospedeiro foram visualizados na CT26 tumor rectal que expressam RFP na ND-GFP ratinho nu (setas brancas). barra de escala, de 200 mm.

formação de tumores por instilação rectal de recursos humanos de células cancerosas em ratos pelados

A aplicabilidade deste método de implantação foi avaliada com células cancerosas humanas. Com a mesma técnica, câncer de cólon humano células HCT-116-RFP também formaram tumores do reto em ratinhos nus.

Discussão

modelos animais clinicamente precisos em que os tumores surgem a partir de início de carreira e mais tarde se tornar invasivo e metastático seria de grande valor, a fim de prever os resultados clínicos para tratamento de câncer com maior precisão. Poucos modelos transgênicos de câncer colorretal invasivo existem [4]. O

Apc

modelo Min +/- rato tipicamente desenvolver adenomas mas não adenocarcinomas invasivos [19]. Além disso, o desenvolvimento de tumores em ratinhos geneticamente manipulada é raramente síncrona, o que faz com que seja difícil preparar um número suficiente de animais em estágios apropriados para a avaliação do tratamento do cancro [2].

Tem sido demonstrado que o implante ortotrópicos permite o crescimento e o potencial metastático de tumores transplantados para ser expresso e reflectir clínica do cancro [5], [20]. Muitos modelos de cancro colorrectal que empregam implantação orthotropic foram também relatados. No entanto, nestes modelos, quer uma suspensão de células de cancro foi injectada na camada submucosa do colorectum [4], [5], [21], ou os fragmentos de tecido do tumor foram simplesmente suturado sobre a serosa do cólon. Nestes modelos, os tumores crescem nos tecidos submucosos deixando a mucosa (que é a verdadeira origem do cancro colo-rectal) intacta ou a partir dos tumores começam a crescer apenas na superfície serosa, que é equivalente ao câncer em estágio colorretal avançado na clínica.

o objetivo do presente estudo foi estabelecer um modelo colorectal ortotópico clinicamente precisas em que os tumores começam a se formar no tecido da mucosa. Colocámos a hipótese de que o implante ortotópico exacta poderia ser alcançado com o rompimento da barreira química superfície mucosa do recto e instalação subsequente das células cancerosas CT26.

células cancerosas fluorescentemente marcados [22] activado altamente sensíveis, em tempo real, e detecção não invasiva de câncer muito em estágio inicial na mucosa retal e focos micro-metastático nos gânglios linfáticos e do pulmão, o que seria de outra forma indetectável no tecido vivo ou mesmo exame histológico [20].

a localização formação de tumor primário era limitada à parede posterior do recto terminal, que é o ponto de observação mais conveniente no colorectum rato. A reprodutibilidade da localização do tumor permitiu mais fácil e exame não-invasivo mais focado ao longo do tempo. A aparência histológica do tumor era muito semelhante ao cancro do cólon humano classificada como adenocarcinoma indiferenciado ou de tipo medular [23].

metástases nos nódulos linfáticos e metástases de pulmão foram detectados nos ratinhos implantados com células CT26-GFP com incidência elevada, o que poderia ser considerado como o “verdadeiro” metástase espontânea, uma vez que no presente método é altamente improvável que as células cancerosas pode ser introduzido directamente na circulação venosa ou linfática artificialmente no momento da implantação [4]. Apesar de fígado é um local metastático mais comum de cancro colorectal, metástase hepática foi encontrada em apenas 9% dos camundongos (1/11) neste modelo. Isto pode ser explicado pelo fato de que, neste modelo, tumores formar na parte inferior do recto, a partir do qual drena sangue para a circulação venosa sistémica predominantemente através da circulação venosa portal [24]. câncer retal é mais provável do cancro do cólon para resultar em metástases pulmonares sem metástases hepáticas na clínica [24].

Ao contrário do modelo de injeção cecal, este modelo não exige laparotomia, através do qual a divulgação peritoneal indesejada é causada por células cancerosas dissociado no momento do transplante [4]. O método actual é também aplicável em hospedeiros imunocompetentes com linhas celulares de cancro de origem em ratinho e seria adequado para estudos de imunologia tumoral.

em ratinhos nus ND-GFP, a expressão da GFP está sob o controlo do promotor de nestina do [13], [25] em que os vasos sanguíneos ND-GFP-expressando derivados do hospedeiro foram visualizados nos tumores do reto início de carreira formados a partir de células CT26-RFP.

Para o nosso conhecimento, este é o primeiro modelo que confiável pode fornecer câncer retal verdadeiramente ortotópico crescendo nos tecidos da mucosa, e mais tarde causar linfonodo e metástase pulmonar espontânea que são facilmente detectáveis ​​por fluorescência da GFP com alta sensibilidade. Este modelo pode ser usado para estudar os eventos precoces do crescimento do tumor ou a avaliação de factores intraluminais (compostos alimentares, ácidos biliares, a microflora intestinal, etc), que podem funcionar para aumentar ou inibir o crescimento do cancro colo-rectal em fase precoce do cancro.

em conclusão, o implante de células cancerosas para o tecido da mucosa activada pelas técnicas descritas no presente relatório permitiu que os tumores a crescer de uma maneira que imita doença clínica humana. Este modelo pode ser útil para a avaliação da eficácia terapêutica de fármacos anti-tumorais, e pode ser capaz de ser utilizado para estudar eventos precoces no TME.

Reconhecimento

Este papel é dedicado à memória de AR Moossa, M.D.