Abstract
Este estudo teve como objetivo determinar a incidência e implicações clínicas de
HER2
estado câncer colorretal primário (CRC).
HER2
estatuto foi investigada em duas coortes retrospectivos de 365 pacientes consecutivos CRC (coorte 1) e 174 pacientes com CCR avançado com metástases à distância síncrona ou metacrônica (coorte 2).
HER2
estatuto foi determinada através da realização de prata de duas cores hibridização in-situ (SISH), mRNA de hibridização in-situ (ISH), e imuno-histoquímica (IHQ). A incidência da superexpressão da proteína HER2 (IHC 2 + /3 +) foi de cerca de 6% (22 de 365 na coorte 1; 10 de 174 na coorte 2).
HER2
amplificação do gene foi observada em 5,8% dos pacientes do grupo 1 e 6,3% dos pacientes do grupo 2.
HER2
amplificação do gene foi mais frequentemente observada em CRCs localizados no reto do que na direita e cólon esquerdo (
P
= 0,013 na coorte 1;
P
= 0,009 na coorte 2).
HER2
status, determinado por IHQ, ISH, e SISH dual-cor, não foi significativamente associada com o comportamento agressivo ou CRC prognóstico dos pacientes em ambos os grupos. Da coorte combinado com um total de 539 casos, a taxa de concordância foi de 95,5% entre SISH de duas cores e métodos de detecção de IHC. Em excluindo casos equivocally imunocoradas (IHC 2+), a taxa de concordância foi de 97,7%.
HER2
overtranscription mRNA, detectada por ISH, significativamente correlacionada com superexpressão da proteína e amplificação do gene (
P Art 0,001).
HER2
amplificação do gene foi identificado em uma minoria de pacientes com CCR com altas taxas de concordância entre SISH dual-cor e métodos de detecção de IHC. Embora
HER2
estatuto não prever o prognóstico dos pacientes, os nossos resultados podem servir como base para estudos futuros sobre seleção de pacientes para
HER2
terapia-alvo
Citation:. Seo AN , Kwak Y, Kim DW, Kang SB, Choe G, Kim WH, et al. (2014)
HER2
Estado no câncer colorretal: seu significado clínico e da relação entre
HER2
Gene Amplification e Expressão. PLoS ONE 9 (5): e98528. doi: 10.1371 /journal.pone.0098528
editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 06 de março de 2014; Aceito: 02 de maio de 2014; Publicado em: 30 de maio de 2014
Direitos de autor: © 2014 Seo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados são incluídos nos arquivos de dados do manuscrito e apoiar
Financiamento:. Este estudo foi apoiado pelo número de concessão 02-2013-041 do Bundang Fundo de Investigação Seoul National University Hospital. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. Os autores declararam não haver conflitos de interesse
Introdução
Apesar dos avanços nas técnicas cirúrgicas e regimes de quimioterapia adjuvante, câncer colorretal (CRC) continua a ser uma das principais causas principais de mundo mortes relacionadas ao câncer mais [1], [2]. Outras melhorias na compreensão da biologia do tumor e a identificar os factores oncogénicos levaram ao desenvolvimento de novos alvos terapêuticos [2], [3]. Portanto, a identificação de marcadores biológicos para a terapia-alvo continua a ser uma alta prioridade no tratamento do câncer humano [4]. receptor do factor de crescimento anti-epidérmico (EGFR), o tratamento com anticorpo monoclonal, incluindo que com cetuximab e panitumumab, tem sido relatado para melhorar a sobrevivência livre de progressão em pacientes de CRC avançada com o tipo selvagem
KRAS
[5] – [7 ]. Apesar do progresso terapêutico inegável, uma proporção considerável de pacientes com câncer respondem mal ao tratamento e resposta terapêutica não pode ser exatamente o previsto. Portanto, é de grande interesse para identificar biomarcadores para prever resultados, a resposta terapêutica, e alvos terapêuticos potenciais em pacientes de CRC.
O receptor humano do factor de crescimento epidérmico 2 (HER2) é uma tirosina cinase de receptor de transmembrana, que é um membro da família de EGFR [8], [9]. A activação do
HER2
desempenha um papel fundamental na proliferação celular, diferenciação celular, inibição da apoptose, e a progressão do tumor [8] – [10]. Trastuzumab, um anticorpo monoclonal humanizado, tem como alvo o domínio extracelular de
receptor HER2. Seu benefício terapêutico foi demonstrado em
HER2
pacientes com câncer de mama -positivas [11], [12]. Além disso, um estudo de referência em 2010 relatou que a combinação de trastuzumab com quimioterapia convencional melhorou significativamente a sobrevida dos pacientes em pacientes com
HER2
-positivo avançado câncer de junção gástrica ou gastro-esofágico [13].
HER2
amplificação e /ou proteína do gene sobre-expressão foram observados em 15-20% dos casos de câncer de mama e foram correlacionadas com o fenótipo agressivo, metástases, e o resultado clínico adverso [14], [15]. Por outro lado,
HER2
amplificação e /ou a sobre-expressão do gene de proteína foram detectadas em -22% de doentes com cancro gástrico, mas significado prognóstico foi controversa [16]. Porque o trastuzumab tenha melhorado significativamente a sobrevivência global na mama e cancros gástricos, é de grande interesse clínico, se o bloqueio de HER2 pode ser uma estratégia clínica útil em outros cancros humanos [17]. Embora alguns estudos têm relatado a incidência e implicações clínicas de
HER2
estado pacientes CRC [18] – [22]., Seu significado clínico ainda não foi totalmente elucidado
Nós, portanto, , conduziu este estudo para determinar a incidência e significado clínico da
HER2
estatuto -positivo em pacientes CRC primários consecutivos. Porque a quimioterapia alvo foi aplicada a pacientes avançados CRC na prática diária e os casos avançados não foram suficientemente incluídas na coorte consecutiva 1, nós inscritos adicionalmente pacientes com CCR avançado com metástases à distância síncrona ou metacrônica (coorte 2). Nós avaliamos
HER2
amplificação do gene, RNA mensageiro (mRNA) de transcrição e status expressão da proteína em tumores primários de duas coortes retrospectivas, e também analisou os índices de concordância dos métodos de detecção.
Materiais e Métodos
pacientes e amostras
Um total de 539 casos de CRC tratados por cirurgia radical, sem qualquer terapia pré-operatória foram incluídos no estudo do Departamento de Patologia da Seoul National Bundang Hospital Universitário. Coorte 1 consistiu de 365 pacientes CRC consecutivos tratados entre janeiro de 2005 e dezembro de 2006. coorte 2 constituída por 174 pacientes com CCR avançado com metástases à distância síncrona ou metacrônica, que tinham sido submetidos a ressecções cirúrgicas para CRC primária entre maio de 2003 e dezembro de 2009, exceto coorte 1. Todos os pacientes receberam tratamento de acordo com as diretrizes de prática padrão após a cirurgia, a menos que medicamente contra-indicada. Todos os casos foram revistos por 2 patologistas (A.N.S e H.S.L) e foram encenadas de acordo com o 7
th edição do American Joint Committee
Manual Cancer Staging
[23]. características clinicopatológicas foram obtidos a partir dos prontuários dos pacientes e relatórios de patologia. foi coletado informações de acompanhamento, incluindo o resultado do paciente e o intervalo de tempo entre a data da ressecção cirúrgica e morte. Os casos perdidos para follow-up e as mortes de outros que CRC causas foram considerados dados censurados para a análise de sobrevivência.
Ethical declaração
Todos os espécimes humanos foram obtidos a partir dos arquivos de casos cirurgicamente ressecados examinou no Departamento de Patologia da Seoul National Hospital Bundang Universidade para o diagnóstico patológico. O estudo retrospectivo foi realizada utilizando as amostras armazenadas após o diagnóstico patológico, e todas as amostras foram anónimos antes do estudo. O estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board of Seoul Bundang National University Hospital (referência: B-1210 /174-301). Os participantes não forneceu consentimento informado por escrito neste estudo. A Institutional Review Board dispensou a necessidade de consentimento informado por escrito sob a condição de anonimização e nenhuma intervenção adicional para os participantes.
Tissue método de array
Para ambos os grupos, ressecados cirurgicamente espécimes CRC primários foram formalina -Fixed e parafina-embedded (FFPE). Estes blocos de tumores primários foram utilizados para a construção de blocos de arranjos de tecidos. Resumidamente, a partir das áreas representativas dos blocos colhidas em cada caso, um único núcleo com um diâmetro de 2 mm foram obtidos e precisamente dispostos em novos blocos receptores, utilizando um aparelho de trefina, tal como descrito anteriormente por grupo do autor (Superbiochips Laboratories, Seul, Coréia do Sul) [24]. Um caso adequado foi definido como um tumor ocupando ≥20% da área central
imuno-histoquímica (IHQ)
HER2 IHC foi realizada utilizando CAMINHO anti-HER2 /neu (4B5;. Monoclonal de coelho; pré-diluição; Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, EUA), anticorpos e kit UltraView Universal DAB (Ventana Medical Systems) em um imunohistoquímica automática (benchmark XT, Ventana Medical Systems), de acordo com as instruções do fabricante. IHC pontuação foi realizada de forma independente por dois patologistas (A.N.S e H.S.L) sem conhecimento prévio de informações clínico-patológico ou resultados moleculares obtidos através de outros métodos. A pontuação foi realizada de acordo com o DAKO HercepTest ™ orientações (DAKO) para o cancro gástrico como se segue [25]: 0, nenhuma reactividade ou membrana coloração em 10% das células tumorais; 1+, coloração ligeira /quase imperceptível parcial membrana em ≥10% das células tumorais; 2+, fraca a moderada coloração da membrana basolateral ou completa em ≥10% de células tumorais; 3+, moderada a forte coloração da membrana completa em ≥10% de células tumorais. Os dois patologistas completamente de acordo sobre todos os casos IHC 3+, enquanto consenso final foi determinado pela discussão através do microscópio multi-cabeça em alguns casos discrepantes com IHC 1+ ou 2+. IHC 2+ e 3+ foram consideradas para indicar superexpressão da proteína.
HER2
mRNA de hibridização in situ (ISH)
Para detectar
HER2
overtranscription mRNA , RNAscope 2-Plex (Diagnostics Advanced Cell, Hayward, CA, EUA) foi realizada de acordo com as recomendações padrão do fabricante. A interpretação foi realizada de acordo com as instruções no âmbito RNA FFPE Assay Kit, como descrito anteriormente [26]: nenhuma mancha (0 ponto); coloração em 10% das células tumorais que foi difícil identificar a lente objetiva x40 (1 ponto); coloração em ≥10% das células tumorais que foi difícil identificar a lente objetiva x20, mas fácil em objectiva x40 (2 pontos); coloração em ≥10% das células tumorais que foi difícil identificar a lente objetiva x10, mas fácil em objectiva x20 (escore de 3); coloração em ≥10% das células tumorais que era fácil de identificar pelo objectiva x10 (escore 4). Uma pontuação de 4 indica
HER2
overtranscription. ISH foi independentemente interpretada por dois patologistas (ANS e HSL) sem conhecimento prévio de informações clínico-patológico ou o status HER2 obtidas através de outros métodos.
Dual-cor de prata
in-situ
hibridação (SISH)
-campo brilhante cor dual-análise SISH foi realizada utilizando o dispositivo SISH coloração automática (benchmark XT, Ventana Medical Systems), de acordo com os protocolos do fabricante para INFORM
HER2
DNA e informar cromossomo 17 ( CEP17) sondas (Ventana Medical Systems).
sinais sish HER2
/CEP17 foram contados de acordo com a orientação interpretativa para Ventana INFORM
HER2
coloração sonda de DNA de células de câncer gástrico (Ventana Medical Systems). As células tumorais foram verificados quanto a pontos quentes, usando 20 × ou 40 × objetivos, e a área com os maiores sinais foi selecionado. Os sinais foram contados em 20 núcleos das células tumorais não sobrepostos de cada caso, utilizando 60 × ou 100 × objectivos por dois patologistas (A.N.S e H.S.L) que foram cegados para o status HER2 por outros métodos de detecção e informação clínica. agrupamentos pequenos ou grandes foram considerados como sendo sinais de 6 e 12 sinais, respectivamente.
HER2
amplificação do gene foi definida como
HER2 relação
/CEP17 de ≥2.0 em 20 núcleos tumorais. O casos duvidosos (proporção: 1,8 a 2,2) foram contada em pelo menos 20 núcleos não sobrepostos de diferentes células de tumor a uma segunda zona de alvo, e uma nova
relação
HER2 /CEP17 foi recalculada. células epiteliais do cólon normais e outras células benignas adjacentes serviu como controles internos.
microssatélites instabilidade (MSI)
Resultados da MSI foram gerados pela comparação dos perfis de alélicas dos 5 marcadores microssatélites (BAT- 26, BAT-25, D5S346, D17S250, e S2S123) no tumor e amostras normais correspondente. Os produtos da reacção em cadeia da polimerase para tecidos FFPE foram analisadas utilizando um auto-sequência de ADN (ABI 3731 Genetic Analyzer; Applied Biosystems, Foster City, CA). De acordo com o protocolo descrito anteriormente [27]
Análise estatística
A associação entre características clínicas e
HER2
estatuto foi analisada por meio do qui-quadrado ou teste exato de Fisher, e teste de Wilcoxon /Mann-Whitney, se for o caso. O ranking de correlação de Spearman ou o teste tau-b de Kendall foi utilizado para avaliar a correlação entre os métodos de detecção. A associação entre o
HER2
status e sobrevida global foi determinada utilizando o método de Kaplan-Meier, e o significado das diferenças entre os grupos foram comparados pelo teste de log-rank ou teste de Breslow, se as curvas de sobrevida foram cruzados durante o acompanhamento períodos -up. análises de sobrevivência multivariados foram realizadas utilizando o modelo de riscos proporcionais de Cox, e a taxa de risco e seu intervalo de confiança de 95% foram calculados para cada fator. Todos os testes foram bilaterais, com
P valor
de 0,05 considerado para indicar significância estatística. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando as estatísticas IBM SPSS 20 (Armonk, NY, EUA) de software.
Resultados
características clinicopatológicas dos pacientes
A Tabela 1 fornece dados demográficos e de linha de base características clinicopatológicas dos pacientes incluídos em cada coorte. Coorte 1 incluiu 202 (55,3%) do sexo masculino e 163 (44,7%) do sexo feminino com idade média de 65 anos (variação: 20-95 anos). Além disso, entre 353 pacientes com análise MSI disponíveis, 321 (90,9%) tiveram estável microssatélite (MSS) ou microsatélites instabilidade de baixa (MSI-L), enquanto que 32 (9,1%) tiveram microsatélites instabilidade de alta (MSI-H). Por outro lado, coorte 2 incluiu 94 (54,0%) do sexo masculino e 80 (46,0%) do sexo feminino, com idade média de 60 anos (variação: 28-93 anos). MSS /MSI-L foi encontrado em 159 (98,1%) e MSI-H em 3 (1,9%) dos 162 pacientes com análise MSI disponíveis.
HER2
estado pacientes de CRC
a proteína HER2 foi fracamente ou fracamente expresso na membrana e /ou citoplasma do epitélio do cólon normal, enquanto que a membrana das células tumorais apresentados vários padrões de coloração (Figura 1). Na coorte consecutiva 1, IHC 0 foi encontrado em 296 de 365 pacientes (81,1%), IHC 1+ em 47 (12,9%), IHC 2+ em 14 (3,8%), e IHC 3+ em 8 (2,2%). Na coorte 2 de casos avançados, IHC 0 foi observada em 139 de 174 pacientes (79,9%), IHC 1+ em 25 (14,4%), IHC 2+ em 5 (2,9%), e IHC 3+ em 5 (2,9% ). HER2 sobre-expressão foi detectada em 6,0% do grupo 1 e 5,8% da coorte 2.
(A) IHC 0 (40 × objetivo); (B) escore 0 pelo mRNA ISH (40 × objetivo); (C)
HER2
dissomia gene (60 × objetivo); (D) IHC 3+; (E) marcar 4 por mRNA ISH; (F)
HER2
amplificação do gene (razão
HER2
/CEP17 ≥2).
Alguns espalhadas pontos puntiformes marrons foram observados no núcleo e /ou citoplasma do epitélio de cólon normal, utilizando
HER2
ARNm ISH, ao passo que vários coloração nuclear e /ou citoplasmático foi observada nas células tumorais (Figura 1). Na coorte 1, marcar ISH 0 foi observada em 12 dos 365 pacientes (3,3%), marcar 1 em 118 (32,3%), marcar 2 em 160 (43,8%), marcar 3 em 66 (18,1%), e marcar 4 em 9 (2,5%). Na coorte 2, marcar ISH 0 foi observada em 11 dos 174 pacientes (6,3%), marcar 1 em 41 (23,6%), marcar 2 em 93 (53,4%), marcar 3 em 25 (14,4%), e marcar 4 em 4 (2,3%).
HER2
overtranscription mRNA foi observada em 2,5% do grupo 1 e 2,3% da coorte 2.
sinais HER2
foram detectados como dissomia no epitélio do cólon normal, assim se utilizados como os controlos internos. No entanto,
HER2
sinais variou ao longo das células do tumor (Figura 1). A mediana
relação de HER2
/CEP17 foi de 1,16 (intervalo: 0,68-19,62) na coorte 1 e 1,19 (intervalo: 0,57-21,89) na coorte 2.
HER2
amplificação do gene foi detectado em 21 de 365 pacientes (5,8%) no grupo 1 e 11 de 174 (6,3%) no grupo 2. não houve diferença significativa na incidência de
HER2
positividade entre coorte consecutiva 1 casos e coorte avançada 2 casos , independentemente do método de detecção (IHQ, ISH, ou SISH). De um total de 32 casos amplificados, significa
HER2
número de cópias do gene (GCN) foi de 6 ou mais em 16 casos. De acordo com os critérios de câncer gástrico estabelecidos pelo julgamento de ToGA [13],
HER2
positividade é definido como IHC 3+ ou IHC 2+ com
HER2
amplificação do gene.
HER2
positividade foi encontrada em 3,6% (13 de 365 pacientes) de coorte 1 e 4,0% (7 de 174 pacientes) de coorte 2. Nós também investigados cromossomo 17 alterações (CEP17) e observaram um sinal CEP17 homogênea padrão. O CEP17 mediana foi de 2,15 (intervalo: 1,25-3,50) no grupo 1 e 1,95 (intervalo: 0,83-3,15) na coorte 2. CEP17 polissomia, que foi definida como um valor de ≥3 CEP17 sinais /núcleo, foi observada em 2,7% (10 de 365 pacientes) de coorte 1 e 2,3% (4 de 174 pacientes) de coorte 2.
as taxas de concordância entre os métodos de detecção
a fim de avaliar a concordância entre os diferentes métodos, combinamos ambos os grupos. Do total de 539 casos,
HER2
amplificação do gene foi significativamente associada com superexpressão da proteína (ρ, 0,601;
P Art 0,001) e overtranscription mRNA (ρ, 0,626;
P
0,001; Tabela 2). Todos os 3+ casos IHC e toda a ISH marcar 4 casos mostrou
HER2
amplificação do gene por SISH dual-cores. A taxa de concordância foi de 95,5% entre SISH dual-cor e métodos de detecção de IHC. Quando excluindo casos equivocally imunocoradas (IHC 2+), a taxa de concordância foi de 97,7%.
HER2
mRNA overtranscription significativamente correlacionada com superexpressão da proteína (ρ, 0,575;
P Art 0,001; Tabela S1).
Dos 539 casos, 12 casos mostrou
HER2
amplificação do gene, mas no IHC 0 ou 1+, o qual é descrito em detalhe na Tabela S2. Em um caso, homogénea
HER2
amplificação do gene e ARNm overtranscription foram observados ao longo de todo o núcleo do tumor, mas a proteína HER2 não foi expresso em qualquer área específica do núcleo do tumor (Figura 2). Nos outros 11 casos, a proteína HER2 foi expressa focalmente com uma pontuação IHC 1+, e
HER2
amplificação do gene foi observado localizado dentro da área de expressão de proteína (Figura 2).
(A- C) HER2 IHC 1+ no cancro da área focal (a), focal overtranscription mRNA (B) e
HER2
amplificação do gene (C) de acordo com a área de expressão da proteína. (D-F) Sem expressão da proteína HER2 (D), mas overtranscription mRNA difusa (E) e
HER2
amplificação do gene (F) em um caso.
Correlação entre
HER2
características status e clínico-patológicos
Para investigar a relevância clínica da
HER2
status, avaliou-se a associação entre as variáveis clínicas e
Status HER2
. superexpressão da proteína HER2 não foi associada com o status MSI ou comportamento agressivo, incluindo fronteira infiltrativa tumor, profundidade de invasão, metástase linfonodal, metástases à distância e invasão perineural (
P Art 0,05; Tabela S3), ao passo que foi associado com a localização do tumor no recto (
P = 0,033
na coorte 1; Tabela 3).
HER2
overtranscription mRNA não foi associada a quaisquer variáveis clínico-patológicas, exceto localização do tumor no reto (
P
= 0,001 na coorte 1,
P
= 0,026 na coorte 2; tabela 3).
HER2
amplificação do gene também foi associado a localização do tumor e foi mais frequentemente encontrado em no reto do que na direita ou cólon esquerdo (
P
= 0,013 na coorte 1,
P
= 0,009 na coorte 2;. Tabela 3, Tabela S4)
Para determinar o significado prognóstico da
HER2
estatuto -positivo, realizamos análises de sobrevida em cada coorte. Todos os pacientes do grupo 1 e 2 foram seguidos com sucesso para a análise de sobrevivência. O tempo médio de acompanhamento foi de 68 meses (intervalo: 1-85 meses); 98 pacientes (26,8%) morreu de câncer em coorte 1. Na coorte 2, o tempo médio de acompanhamento foi de 66 meses (variação: 1-105 meses); 72 pacientes (41,4%) morreu de câncer.
HER2
amplificação do gene, mRNA overtranscription ou superexpressão da proteína não foi associada com a sobrevivência específica da doença na coorte 1 e coorte 2 (
P Art 0,05; Figura S1). Na coorte 1, idade, tamanho do tumor, estágio do tumor, grau histológico, invasão linfática, invasão perineural, invasão venosa, e borda tumor infiltrativa foram significativamente associados com o prognóstico dos pacientes (
P Art 0,05) pela sobrevivência univariada analisa. diferenciação histológica, invasão perineural, idade e estágio do tumor foram identificados como fatores prognósticos independentes para a sobrevivência específica da doença (
P Art 0,05; dados não mostrados). No entanto, na coorte 2 casos, localização do tumor, estágio do tumor, diferenciação histológica, invasão linfática e invasão perineural previu prognóstico dos pacientes pela análise de sobrevida univariada (
P Art 0,05), da qual estágio do tumor (
P
= 0,018) e invasão linfática (
P
= 0,024) foram fatores de risco independentes de acordo com a análise multivariada (dados não mostrados).
Discussão
a objetivo deste estudo foi identificar a incidência de
HER2
estatuto -positivo em duas coortes retrospectivas, incluindo CRCs consecutivos e CRCs avançados com metástases à distância e para esclarecer seu significado clínico. Aqui, observamos que
HER2
amplificação do gene e proteína superexpressão foram encontrados em cerca de 6% dos CRCs de ambos os grupos, CRCs com
HER2
amplificação do gene foram localizados mais comumente no reto do que no cólon direita ou esquerda,
HER2
estatuto não foi associada com características clinicopatológicas agressivos ou pior prognóstico, e os índices de concordância entre os métodos de detecção muito alta. Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório para avaliar
HER2
estatuto -positivo usando várias técnicas em um estudo em grande escala de pacientes do Leste Asiático CRC.
Até à data, vários estudos relataram que a frequência da superexpressão da proteína HER2 varia muito, de 0% a 80% no CRC [28], [29] e seu significado prognóstico é controverso [28], [30] – [32]. Este debate poderiam ser atribuídas por várias causas, tais como a diferença anticorpo primário, a diferença em sistemas de pontuação para a expressão de HER2 proteína, uma diferença de abordagem técnica, tamanho da amostra, as diferenças raciais, e heterogeneidade da população do estudo. Quando foram utilizadas as técnicas de coloração e pontuação aceites, a taxa de sobre-expressão de membranas e do citoplasma para HER2 foram relatados em cerca de 5% e 30%, respectivamente [29]. Usamos aceites métodos de coloração e de pontuação, e superexpressão membranoso de HER2 foi observada em aproximadamente 6%. Estes resultados sugerem que trastuzumab pode ser eficaz numa minoria de pacientes de CRC [33]. Alternativamente, os compostos-alvo HER2 intracelulares pode ser opção de tratamento atraente em um terço dos pacientes com CCR, se HER2 citoplasmática está realmente envolvido ativamente na carcinogênese do CRC [29], [33].
É importante notar que a taxa de concordância foi de 95,5% entre SISH dual-cor e métodos de detecção de IHC no presente estudo. Quando excluindo casos equivocally imunocoradas (IHC 2+), a taxa de concordância foi de 97,7%. Estas taxas de concordância foram o suficiente para usar apenas o método IHC para o rastreio
HER2
amplificação do gene, e semelhante às taxas observadas no câncer gastro-esofágico nos estudos anteriores [4], [34], [35]. Entre os casos discrepantes, um caso teve
HER2
amplificação do gene com uma distribuição homogénea, mas a proteína HER2 não foi expressa. Esta descoberta tem sido relatada em cancro gastro-esofágico representando de 2% a 33% dos casos [4], [34] – [37]. Este fenómeno exige mais estudos, mas a seguinte hipótese poderia explicar: os processos pós-tradução errada, tais como dobragem incorrecta tridimensional, localização disfuncional da proteína para a membrana celular, e inadequado proteínas de glicosilação, que conduz a uma diminuição da expressão da proteína HER2, mesmo embora o
gene HER2
é amplificado [4]. No nosso caso,
HER2
ARNm foi overtranscribed com distribuição homogénea suportando a hipótese acima referido. No entanto, apesar das elevadas taxas de concordância entre os métodos de detecção no âmbito do presente estudo,
HER2
mRNA ISH não está neste momento um método padrão para avaliação da
HER2
status, e corte- ainda não foi estabelecida off para definir mRNA overtanscription. Assim, mais estudos são necessários para validar
HER2
método de mRNA ISH.
Recentemente, Conradi et al. [21] selecionados para
HER2
positividade usando os mesmos métodos e critérios como o nosso, e relatou que
HER2
positividade foi observada em 12,4% das amostras de biópsia retal e 26,7% do espécime ressecado retais. Além disso,
HER2
positividade nos espécimes ressecados independentemente correlacionada com a sobrevivência específica do cancro prolongada em pacientes com câncer retal. Sclafani et ai. [22] também avaliados para
HER2
positividade em alto risco, pacientes com câncer retal localmente avançados no julgamento EXPERT-C da capecitabina e oxaliplatina neoadjuvante e quimioradioterapia (CRT) com ou sem cetuximab. No entanto, em seu estudo,
HER2
positividade foi de apenas 4,3%, e não teve associação com os parâmetros clínico-patológicas e evolução de pacientes. Nosso estudo compreendeu direita e esquerda cancros do cólon e câncer retal; Assim, fomos capazes de analisar a freqüência de
HER2
amplificação e superexpressão de acordo com a localização principal.
HER2
amplificação foi mais encontrada no cancro rectal do que em qualquer outro sítio primário, e
HER2
positividade do câncer retal foi de 8,0% na coorte 1 e 7,5% no coorte 2. A inconsistência de frequência de
HER2
positividade provavelmente reflete o possível efeito de vários fatores como etnia, população de estudo diferente, e heterogeneidade do tumor. Especialmente, em dois estudos anteriores, discordância de
foi observada HER2
positividade entre biópsia e espécime ressecado [21], [22]. À luz destas conclusões, é sugerido que intratumoral
HER2
heterogeneidade podem existir em CRCs, que também tem sido relatada em estudos de cancro gástrico [10]. Mais estudos são necessários para o esclarecimento.
Tradicionalmente, alterações CEP17 ter afetado a medição da
HER2
rácio /CEP17. Consequentemente alguns casos foram erroneamente classificados como não-amplificado. No presente estudo, CEP17 polissomia foi um evento raro respondendo por 2,6% dos casos, portanto, não induziu interpretação enganosa em
HER2
amplificação do gene. CEP17 polissomia não foi clinicamente significativa em pacientes com CRCs.
Apesar de dois ensaios clínicos tinham tentado investigar o benefício da terapia anti-HER2 em avançado ou metastático CRC, os ensaios foram fechadas prematuramente devido a baixa competência relacionada com a baixa incidência de HER2 sobre-expressão em pacientes com CCR avançado [38], [39]. No entanto, um estudo recente mostrou que
HER2
serviu para prever a resistência ao anticorpo monoclonal anti-EGFR em xenoenxertos derivadas de pacientes de câncer colorretal metastático, levando os autores a sugerir a possibilidade de terapias combinadas em pacientes com CCR cetuximab resistentes [ ,,,0],40]. Além disso, um estudo recente HERACLES (HER2 amplificação para o cancro colo-rectais Estratificação avançado) está actualmente a investigar o uso de trastuzumab acrescido de lapatinib ou pertuzumab em CRCs metastáticas com o
HER2
amplificação [41]. Portanto, nossos resultados seria útil no desenvolvimento e aplicação
HER2
terapia-alvo em pacientes com CCR. Como os resultados de mutação de
KRAS Comprar e
BRAF
não foram incluídos no presente estudo, não fomos capazes de elucidar relações entre
HER2
status e
KRAS
ou
BRAF
no CRC. É a limitação em causa do nosso estudo desde
KRAS Comprar e
BRAF
são muito importantes para determinar abordagem de tratamento em pacientes com CCR. Além disso, nosso estudo tem pontos fracos em potencial, tais como estudo retrospectivo concebido, a avaliação da
HER2
usando um método de arranjo de tecido, população de estudo heterogéneo em uma única instituição, e seleção de pacientes no grupo 2. Foram incluídos os pacientes com CCR com disponíveis tecidos de câncer cirurgicamente ressecados de tumores primários no grupo 2. nem todos os pacientes com CCR avançado com doenças metastáticas foram incluídos e casos avançados agora não foram incluídos devido à sua inoperacionalidade. Portanto, preconceitos não reconhecidos pode ter influenciado nossos resultados de sobrevivência. Além disso, um pequeno número de
HER2
tumores positivos poderia excluem a análise estatística robusta, assim, ainda mais estudos em grande escala são necessários para validar os nossos resultados.
Em conclusão,
HER2
amplificação do gene e superexpressão da proteína foram identificados em cerca de 6% dos pacientes com CCR e não tem nenhuma implicação clínica exceto em localização do tumor no presente estudo. Nós também demonstrou altas taxas de concordância entre IHC e métodos sish dual-cores nas coortes combinados. Embora uma minoria de pacientes com CCR exibiu
HER2
amplificação do gene, estes pacientes seriam potenciais candidatos para a terapia anti-HER2, e IHC pode ser teste de triagem primária para seleção dos pacientes.
Informações de Apoio
Figura S1. curvas de sobrevida de Kaplan-Meier
acordo com o estado HER2 por cada método de detecção. (A-B) Curvas de sobrevivência de acordo com o estado de HER2 a expressão da proteína na coorte 1 (A) e coorte 2 (B). (C-D) As curvas de sobrevida de acordo com a
HER2
status de expressão do mRNA na coorte 1 (C) e coorte 2 (D). curvas (E-F) Sobrevivência de acordo com a
HER2
estado de amplificação do gene na coorte 1 (E) e coorte 2 (F)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s001
( JPG)
Tabela S1.
A relação entre imunohistoquímica e mRNA de hibridização in situ para
HER2
em CRCs de coorte combinada
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s002
(DOCX)
Tabela S2.
Os detalhes dos casos com
HER2
amplificação do gene, mas IHC 0 ou 1+ resultados
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s003
(DOCX)
tabela S3.
A associação entre a expressão da proteína HER2 e as variáveis clínico-patológicas em CRCs de cada coorte
doi:. 10.1371 /journal.pone.0098528.s004
(DOCX)
Tabela S4.