Abstract

Não-músculo-invasivo cancro da bexiga (NMIBC) é um dos mais tumores malignos comuns no sistema urológico com um elevado risco de recidiva, e biomarcadores não invasivos eficazes para NMIBC recaída ainda são necessários. O proteoma urinária humana pode reflectir o estado do microambiente do sistema urinário e é uma fonte ideal para o diagnóstico clínico de doenças do sistema urinário. Nosso trabalho anterior proteômica para identificar 1643 de alta confiança proteínas urinárias na urina de uma população saudável. Aqui, utilizou-se bioinformática para construir uma rede de interacção proteína-proteína associada a cancro (PPI) que compreende 16 proteínas urinárias de alta abundância com base no banco de dados do proteoma urinária. Como resultado, o receptor beta do factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGFRB) foi seleccionado para posterior validação como um biomarcador candidato para o diagnóstico e prognóstico NMIBC. Embora os níveis de PDGFRB urinária não apresentou diferença significativa entre os pacientes pré e pós-cirurgia (n = 185, P 0,05), mais de 3 anos de follow-up, PDGFRB urinária mostrou-se significativamente maior nos pacientes recidiva (n = 68) do que em pacientes livres de recidiva (n = 117, P 0,001). Os níveis de PDGFRB urinária foram significativamente correlacionados com o risco de recorrência de NMIBC de 3 anos, e esses níveis melhorou a precisão de um modelo de previsão NMIBC risco de recorrência, que incluiu idade, tamanho do tumor, e número de tumores (área sob a curva, 0.862; CI 95%, 0,809-0,914) em comparação com o PDGFR sozinho. Portanto, supomos que PDGFRB urinária poderia servir como um biomarcador não invasivo para predizer recorrência NMIBC

Citation:. Feng J, Ele W, Song Y, Wang Y, Simpson RJ, Zhang X, et al. (2014) Derivado de Plaquetas Crescimento Receptor do Factor Beta: A Novel urinária biomarcador para recorrência de não-músculo-invasivo cancro de bexiga. PLoS ONE 9 (5): e96671. doi: 10.1371 /journal.pone.0096671

editor: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences Center, Estados Unidos da América

Recebido: 16 Outubro, 2013; Aceito: 10 de abril de 2014; Publicado em: 06 de maio de 2014

Direitos de autor: © 2014 Feng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Laboratório Key Chongqing para a doença Projeto Proteomics. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de bexiga é o sétimo tipo de câncer mais prevalente em todo o mundo, e aproximadamente 80% dos casos são não-músculo invasivo cancro da bexiga (NMIBC), enquanto os restantes 20% são músculo-invasivo cancro da bexiga (CINM) [1 ] – [3]. De todos os casos diagnosticados de carcinomas de células transicionais, cerca de 80% apresentam como tumores não-invasiva do músculo (Ta-T1) [3]. Para NMIBC, 50-70% dos pacientes desenvolvem recorrência da doença dentro de dois anos após o diagnóstico inicial [4]. Atuais parâmetros histopatológicos clínicos e convencionais, tais como o estágio do tumor, grau e tamanho dos tumores, são bem estudados em termos de fornecimento de informações de prognóstico quanto à progressão para invasão muscular e recorrência. No entanto, nenhum destes factores têm provado ser suficiente para prever o comportamento diferente das NMIBC. Assim, os biomarcadores para NMIBC recidiva, que são não-invasiva, são urgentemente necessários para tratamento clínico.

urina humana é uma das principais fluidos corporais e é uma fonte ideal para o diagnóstico clínico, especialmente para doenças do sistema urinário, como urina podem ser obtidas de forma não invasiva em grandes quantidades [5]. proteínas urinárias devem ser considerados como potenciais fontes de biomarcadores para várias doenças. Ao longo dos últimos anos, grandes avanços tecnológicos têm ocorrido em proteómica, e um grande número de proteínas no proteoma urinária de pessoas saudáveis ​​foram identificadas [6] – [10]. No entanto, a aplicação de tais bancos de dados de uma proteína urinária para facilitar a identificação de biomarcadores para doenças experimentou um progresso limitado. Até agora, a interacção proteína-proteína de dados (PPI) tem sido amplamente utilizado para a identificação de biomarcadores com a suposição de que as proteínas de interacção reflectir significativamente o estado de doença porque as proteínas não funcionam isoladamente, mas em vez interagem um com o outro. Além disso, eles podem fornecer hipóteses, tais como vias de sinalização e outros mecanismos que influenciam a evolução da doença. Construção de uma rede PPI pode destacar as proteínas associadas a doenças que têm a função biológica. Neste estudo, buscou-se selecionar potenciais biomarcadores para o diagnóstico e prognóstico NMIBC através da construção de uma rede PPI associado a um cancro baseado no proteoma urinário humano saudável, e nós revelou que PDGFRB poderia servir como um biomarcador de prognóstico para NMIBC recorrência.

Materiais e Métodos

Ética declaração

o estudo foi aprovado pelo Comitê do Hospital Xinqiao, Chongqing Ética e aderiu aos princípios da declaração de Helsinki. Além disso, o consentimento informado por escrito foi obtido pelos pacientes neste estudo.

proteínas urinárias alta abundância dataset

O nosso estudo anterior identificou 1641 proteínas urinárias de alta confiança na população saudável [11]. A definição de uma proteína de alta abundância foi arbitrariamente definida como um com 4 péptidos únicos e um número de espectros no banco de dados de 10. Foi obtido um total de 592 proteínas urinárias de alta abundância para posterior análise bioinformática (S2 Arquivo).

proteínas da membrana extracelular e de plasma foram obtidos pela análise GO

Foi utilizado o plug-in do bingo para encontrar estatisticamente sobre-representados categorias GO nos dados biológicos como uma ferramenta para análise de enriquecimento do conjunto de dados urinária de proteínas de alta abundância. Para a análise de enriquecimento, precisávamos de um conjunto de dados de teste (que continha proteínas urinárias 592 high-abundância) e um conjunto de referência de anotações ir para o proteoma humano completo. A análise foi realizada utilizando um “teste de hiper-geométrica”, e todos GO termos que foram significativos com P 0,0001 (após correcção para testes múltiplos utilizando as correcções de taxa descoberta falsa Benjamini e Hochberg) foram selecionadas como sobre-representados. Em seguida, as proteínas que foram anotadas como “extracelular” e “membrana plasmática” foram selecionados para a construção da rede PPI.

rede PPI construção

interações proteína-proteína foram preditos usando a ferramenta de pesquisa para o recuperação de genes que interagem /Proteínas v9.0 (STRING) do banco de dados (https://www.string-db.org/). As proteínas foram ligados com base nos critérios seguintes seis; bairro, fusão de genes, co-ocorrência, co-expressão, evidências experimentais e bancos de dados existentes [12].

proteínas associadas ao câncer na rede PPI foram analisados ​​por KEGG via de enriquecimento

Nós usamos ClueGO, uma ferramenta easy-to-use Cytoscape plug-in [13], para integrar Ontologia termos (GO) Gene, bem como a enciclopédia de Kyoto de genes e genomas (KEGG) /caminhos BioCarta para criar uma rede termo GO /via funcionalmente organizada para a rede de proteína na urina. Os testes de enriquecimento para termos e grupos eram dois lados (/exaustão de enriquecimento) testes baseados na distribuição hiper-geométrica, e todos os termos associados ao câncer que foram significativos com P 0,05 (após correcção para múltiplos testes usando o Benjamini e Hochberg falsa foram selecionados correcções de taxa descoberta) para análise posterior. O limiar de classificação Kappa foi ajustado para 0,5. ClueGO visualiza os termos selecionados em uma rede de anotação funcionalmente agrupados que reflete as relações entre os termos com base na similaridade das suas proteínas associadas.

Os participantes do estudo

Um total de 185 casos NMIBC histologicamente demonstrada foram seleccionados a partir de janeiro de 2007 a janeiro de 2010. os critérios para inclusão no estudo foram os seguintes: diagnóstico histopatológico de carcinoma de células transicionais da bexiga, que foi recentemente diagnosticada e não tratada, sem história de outros tumores, e a capacidade de realizar o acompanhamento. Os pacientes incluídos 160 homens e 25 mulheres de 32 a 83 anos (idade média de 62,1 anos). Todos os pacientes foram submetidos a ressecção transuretral de tumor da bexiga (TURBT). Todos os pacientes com NMIBC recebeu intravesical mitomicina C (MMC) ou instilações pirarubicina (THP) uma vez por semana durante as primeiras 8 semanas, e depois mensalmente até 1 ano. Consideramos como recidiva como a recorrência de NMIBC primária com um estágio patológico igual ou inferior. Outras características clínicas e patológicas de pacientes inscritos encontram-se resumidos na Tabela 1. O grau e estágio dos pacientes foram definidos de acordo com os critérios da OMS de 1973 para o grau e o sistema de classificação TNM 2002.

Amostra de urina preparação

amostras de urina da manhã foram coletados diariamente durante os 3 dias antes da cirurgia primária e ao longo dos 3 dias após a cirurgia. As amostras de urina foram armazenadas a -80 ° C até que todas as amostras foram recolhidas. Dez mililitros de urina foi feita a partir de cada amostra antes da cirurgia e após a cirurgia e reunidas. As amostras de urina foram centrif ugados a 10000 × g durante 30 min a 4 ° C para remover quaisquer restos celulares e o sobrenadante foi concentrado e dessalinizado utilizando uma membrana com um limite de exclusão de 10 kDa. A quantidade de proteína nos concentrados de urina foi medido usando um Kit de Ensaio de Proteínas Coomassie (Pierce, Rockford, IL, EUA). Logo depois, os concentrados de urina foram congeladas a -80 ° C.

análise de expressão PDGFRB em tecidos NMIBC

Foram selecionados os tecidos NMIBC de recaída e os pacientes livre de recidiva para validação de imuno-histoquímica. Todos os tecidos foram fixados com formaldeído a 10% e paraffinembedded. Os tecidos foram cortados em 4μm de espessura. O anticorpo para PDGFRB foi comprado de Abcam. Utilizou-se uma técnica de imuno-histoquímica de dois passos. Resumidamente, os cortes foram desparafinados e hidratados, e, em seguida, fervida em 10 mM de tampão citrato, pH 6,0 durante 10 min. O bloqueio foi realizado com a ligação não especifica com 5% (v /v) de albumina de soro bovino (BSA) durante 10 min. As secções foram incubadas com Ab PDGFRB (1:200 diluição de trabalho) a 4 ° C durante 12 horas numa câmara húmida. Após lavagem com tampão de fosfato 0,02 M de solução salina (PBS) pH 7,4 três vezes, as secções foram incubadas com anticorpo secundário conjugado com polímero marcado com HRP (Abcam) a 37 ° C durante 30 min. As secções foram então incubadas com substrato DAB líquido-cromogénio durante 10 min à temperatura ambiente, enxaguadas em água destilada e contrastadas com hematoxilina.

A validação por Western Blot

Aproximadamente 20 ug de proteína urinária foi separados por 12% SDS-PAGE, em seguida, transferidos para uma membrana de PVDF (Millipore, EUA), e sondados com anticorpo anti-proteínas PDGFRB humanos de coelho policlonal (1:2000, Abcam, EUA), respectivamente. Os blots foram marcadas com anticorpos secundários conjugados com peroxidase de rábano (1:10000), e visualizada com quimioluminescência aumentada (ECL) sistema de detecção (Pierce Biotech Inc., Rockford, IL).

ELISA

A quantidade de proteína nos concentrados de urina foi medido usando um Kit de Ensaio de proteínas Coomassie (Pierce, Rockford, IL, EUA). proteína PDGFRB humana foi quantificada com kits ELISA de Uscn Life Science Inc. (Wuhan, China) de acordo com as instruções do fabricante.

A análise estatística

foram usadas Um teste t não pareado e ANOVA one-way analisar a correlação entre os grupos. Um processo de selecção do modelo stepwise foi utilizado para chegar a um modelo parcimonioso. O modelo de regressão logística foi utilizada para descrever a relação entre os níveis de PDGFRB urinária e o risco de recorrência do câncer de mama e outras observações clínicas. operating characteristic (ROC) do receptor foram plotados para avaliar a sensibilidade e especificidade das medições de biomarcadores em predizer a recorrência de NMIBC. Os valores de P bicaudal menor que 0,05 foram considerados significativos. As variáveis ​​contínuas são expressos como a média ± o desvio padrão salvo indicação em contrário.

Resultados

Construção de uma rede PPI urinária associada a cancro com base em nosso anterior proteoma urinária banco de dados

Nós relatado anteriormente que 1641 proteínas urinárias de alta confiança foram identificadas numa população humana saudável por quatro técnicas de fraccionamento (em gel, 2DLC, OFFGEL e MRP) acoplado com HPLC-Chip-MS /MS [11]. Aqui, procurou-se encontrar não-invasivos candidatos biomarcador de prognóstico para NMIBC recorrência por meio de análise bioinformática do proteoma urinária população saudável. Para encontrar proteínas biomarcadores urinários que são adequados para os métodos de exame clínico de rotina, primeiro rastreadas para proteínas urinárias de alta abundância no banco de dados do proteoma urinária, que por nossa definição tiveram 4 péptidos únicos e tinha um número de espectros de 10. Um total de 592 proteínas urinárias de alta abundância foram obtidos a partir do banco de dados do proteoma urinária para posterior análise (S2 do ficheiro).

Para evitar a contaminação com resíduos celulares, as proteínas que foram anotados como “extracelular” e “membrana plasmática “entre as proteínas urinárias totais foram selecionados por meio da análise de bingo. No total, 544 proteínas foram ligados a pelo menos um termo anotação no interior do componente celular GO. Em, a significância 37 termos exibiu total (P 0,0001) como sendo sobre-representados e sub-representados termos em comparação com toda a lista de entradas de proteína Internacional Index (IPI). Informações mais detalhadas sobre a análise GO está disponível como S2 Arquivo. Como mostrado na Figura 1A, na categoria de componente celular, GO termos relacionados com proteínas extracelulares, tais como a região extracelular (269 proteínas encontrado), o espaço extracelular (140), a matriz extracelular (68), e a membrana de plasma (197) foram sobre-representados, como era esperado. Um total de 373 proteínas urinárias que foram anotadas como “região extracelular” e “membrana plasmática” foram obtidos para posterior construção de rede PPI (S2 Arquivo). Uma vez que a rede de PPI é significativa de modo a reflectir o estado da doença em comparação com proteínas individuais, as proteínas de 373 foram utilizados para construir uma rede de PPI através de análise STRING. nódulos simples e os pequenos componentes da rede de PPI que foram inicialmente montados foram removidos, e apenas o maior componente foi guardado como uma nova rede de PPI, que era composta por 312 nodos e interacções 1779 (Figura 1B). A informação da rede PPI é descrito em detalhe como S2 de arquivo. Para investigar mais proteínas associadas ao câncer nesta sub-rede, as 312 proteínas codificadas foram analisados ​​utilizando o Cytoscape plug-in ClueGO + CluePedia. Uma rede de anotação com base em vias de KEGG foi criado como um grupo de rede de termos GO /via funcionalmente organizada (Figura S1 no arquivo S1). A informação da rede termo é descrito em detalhe como S2 de arquivo. Entre estas redes prazo, uma rede associada a cancro funcionalmente agrupados é mostrado na Figura 1C. Ele dispõe de 6 termos significativamente sobre-representadas específicos, tais como “caminhos no câncer”, “cancro do endométrio”, “cancro da próstata”, “glioma”, “melanoma”, “câncer de bexiga” e “câncer de pulmão de pequenas células”. A informação sobre os termos de cancro na rede associada KEGG é descrito em detalhe na Tabela 2. Além disso, um total de 15 proteínas, que foram associados com todos os termos 6 cancerosas (Tabela 3), foram utilizados para construir um PPI urinária associada a cancro rede (Figura 1D). Constatou-se ainda que o EGF e CDH1 na rede PPI foram anotados como proteínas associadas a cancro da bexiga, sendo, tanto o receptor e FGFR2 e PDGFRB poderia interagir com EGF (Tabela 3). Porque heterodímeros PDGFRB /EGFR foram relatados para expressar em células de câncer de bexiga [14], e da via EGF /EGFR desempenhou um papel importante no desenvolvimento do câncer da bexiga [15], [16], PDGFRB foi seleccionado para posterior validação como um biomarcador candidato câncer de bexiga

(a) um total de 592 de alta abundância proteínas urinárias em nosso banco de dados proteoma urinária foram selecionados de acordo com os critérios da identidade . 4 peptídeos originais e um número espectros 10. Essas proteínas foram analisados ​​utilizando o plug-in do bingo em software Cytoscape e 373 proteínas foram anotados como sendo “região extracelular” e “membrana plasmática.” Um mapa do componente celular é mostrado. (B). As redes de interação proteína-proteína das 373 proteínas foram construídas por STRING. Uma rede de PPI, que era composta por 312 nodos e 1779 interacções com remoção dos gânglios individuais, foi obtido. (C) A rede PPI foi analisada por software Cytoscape com o plug-in ClueGO + Cluepedia. Seis termos KEGG enriquecidos associados ao câncer foram obtidos e apresentados. (D) Uma rede PPI urinária associada ao cancro composta por 15 proteínas urinárias que foram associados com os 6 termos associados ao câncer foram construídos por STRING.

Não houve diferenças significativas de PDGFRB urinário entre pacientes pré e pós-cirurgia

para confirmar resultar a informática preliminares, amostras de urina de 185 indivíduos que foram confirmados para ter NMIBC (Tabela 1) foram coletadas antes e após a cirurgia. Os níveis urinários PDGFRB foram examinados por meio de ELISA. Os resultados mostraram que os níveis de PDGFRB urinária diminuiu (300,1 ng /mg antes da cirurgia vs 287,23 ng /mg após a cirurgia), mas a diferença não foi significativa (P = 0,0607) (Figura 2). Isto indicou que PDGFRB urinária não poderia ser majorly derivados de tecidos NMIBC e não poderia servir como um bom biomarcador diagnóstico precoce para NMIBC.

Não houve diferença significativa entre os níveis de PDGFRB urinário em pacientes NMIBC pré-cirurgia e pós-cirurgia (n = 185) (P = 0,067).

Correlação dos níveis de PDGFRB urinária e recorrência de NMIBC

Para saber se PDGFRB urinária pode ser associado a um recidiva da NMIBC, foi conduzido um estudo de seguimento de 3 anos em 185 pacientes NMIBC. Os dados de acompanhamento mostrou que, entre os 185 pacientes NMIBC, 68 (36,8%) foram encontrados mais tarde para ter recorrência após a cirurgia primário (Tabela 1). No grupo recaída, o nível mediano de PDGFRB urinária foi 395,3 ng /mg (intervalo interquartil 306,65-440,01 ng /mg de proteína urinária total), enquanto ele foi de 245 ng /mg (intervalo interquartil 175,12-307,16 ng /mg de proteína urinária total) para o grupo livre de recidiva (Figura 3A, P 0,0001) .Indeed, a expressão PDGFRB na urina de pacientes com recidiva foi confirmado para ser significativamente aumentada do que isso, sem recaída em 3 anos de acompanhamento por Western Blot (Figura S2A em Arquivo S1). No entanto, não houve diferenças significativas da expressão PDGFRB no tecido de câncer entre os pacientes com recidiva e livre de recidiva em 3 anos de acompanhamento por IHC (Figura S2B e S2C em S1 Arquivo).

(A) a comparação do nível de PDGFRB urinária em recidiva (n = 68) e pacientes de recaída-livres (n = 117) com NMIBC. O nível de PDGFRB urinário foi significativamente menor nos pacientes com recidiva do que aqueles sem recidiva (P 0,001). (B) A curva Receiver Operating características (ROC) de PDGFRB urinário. A AUC foi 0,826 (IC 95%, 0,768-0,884). (C) A AUC da idade, tamanho do tumor e número de tumores combinada foi 0,636 (Cl 95%, 0,552-0,721). (D) Inclusão de PDGFRB neste modelo aumentou a AUC de 0,862 (IC 95%, 0,809-0,914).

Um modelo de regressão logística foi utilizado para estimar a relação entre PDGFRB urinária e outras observações clínicas . Foram observadas associações positivas significativas entre os níveis PDGFRB urinário e tamanho do tumor (P = 0,03) e idade (P = 0,019) (Tabela 4). No entanto, não houve associações significativas entre PDGFRB urinária e sexo, estágio patológico, ou grau (Tabela 4). A relação entre PDGFRB urinária e o risco de recorrência do câncer de mama foi ainda calculado. O resultado mostrou que a correlação entre os níveis PDGFRB urinário e o risco de recorrência do câncer de mama foi estatisticamente significativa (Tabela 5, o fator de coeficiente foi -1,274, P 0,001). O tamanho do tumor (coeficiente, -1,193, P = 0,009) e número do tumor (coeficiente, -0,986, P = 0,022) foram também associadas com um risco aumentado de recorrência NMIBC (Tabela 5). No entanto, outras observações clínicas, tais como idade, sexo, estágio patológico, e grau não foram significativamente associados com o risco de recorrência NMIBC (Tabela 5).

Foram construídas curvas ROC para a clínica fatores e PDGFRB. A área sob a curva (AUC) da curva ROC para sozinho PDGFRB foi 0,826 (Cl 95%, 0,768-0,884) (Figura 3B). A AUC da idade, tamanho do tumor e número de tumores combinada foi 0,636 (Cl 95%, 0,552-0,721) (Figura 3C). Inclusão de PDGFRB neste modelo aumentou a AUC para 0,862 (95% CI, 0,809-0,914) (Figura 3D). Utilizando um limite de 324,12 ng /mg, a sensibilidade foi de 70,6%, enquanto que a especificidade foi de 81,2%. Quando PDGFRB, idade, tamanho do tumor e número de tumores foram combinados, a sensibilidade aumentada para 82,7%, e a especificidade aumentada para 88,5%.

Discussão

O proteoma urinária pode reflectir o sistema urinário microambiente, que pode desempenhar um papel muito importante no desenvolvimento do tumor sistema urinário e progressão. O rastreio na urina de biomarcadores não invasivos de cancro da bexiga é promissor. Aqui, construímos uma rede PPI associada a cancro composta de proteínas urinárias 15 de alta abundância utilizando abordagem de informática para analisar o proteoma urinária de uma população saudável (11). Curiosamente, uma das 15 proteínas, 9 (CTNNA3, COL4A6, KLK3, APC, APC2, FGFR2, PDGFRB, EGF, e COL4A2) foram identificados como sendo proteínas de alta abundância no proteoma urinária, mas estes não foram detectados ou identificados como sendo proteínas de baixa abundância no proteoma do plasma [17]. Isto indica que estas proteínas foram majoritariamente derivado da secreção de células do sistema urinário em vez de a partir de plasma e pode reflectir o microambiente característica do sistema urinário, o que por sua vez poderia fornecer informações importantes sobre o prognóstico de um tumor do sistema urinário. Entre os 9 proteínas, EGF, FGFR2, KLK3 e PDGFRB foram associados com cancro do sistema urinário de acordo com a análise de caminho KEGG. Com efeito, o EGF /EGFR [18], FGFR2 [4], [19], KLK3 [20] – [23], e PDGFRB [14] foram relatados para desempenhar papéis importantes no desenvolvimento de cancro do sistema urinário e progressão. É bem sabido que a via EGF /EGFR desempenha um papel crítico no desenvolvimento do cancro da bexiga, progressão e recorrência. Embora EGFR urinária poderia servir como um candidato biomarcador prognóstico promissores para o cancro da bexiga, que foi identificado como uma proteína urinária baixa abundância (um péptido único e 10 espectros) e, na prática, foi difícil de medir por ELISA (dados não mostrados). Semelhante ao EGFR, FGFR2 e PDGFRB poderia ter a capacidade de se ligar de EGF (Tabela 3, base de dados STRING) e transduzir as PI3K e MAPK vias de sinal [24], [25]. Além disso, em vez de FGFR2 PDGFRB pode formar um heterodímero com o EGFR em células de cancro da bexiga, e isto poderia induzir a resistência à terapia anti-EGFR de cancro da bexiga [14]. Juntos, é razoável supor que PDGFRB é um receptor importante para o câncer de bexiga progressão biológica, e deve servir como um potencial biomarcador para o diagnóstico e /ou prognóstico NMIBC.

A urina é derivado do plasma que é ultrafiltrado pelo rim para eliminar os resíduos. Ao contrário de proteína de soro, a concentração de proteína urinária varia com diluição da urina. Além disso, a proteína urinária a partir do mesmo indivíduo varia em momentos diferentes, devido ao efeito de exercício, dieta, estilo de vida e outros factores [10], [26] – [28]. Neste estudo, a variação da diluição da urina foi eliminado através de uma normalização de proteína total, e a variação ao longo do tempo foi suficientemente controlada pela utilização de amostras de urina da manhã reunidas a partir de um paciente individual mais de 3 dias antes e 3 dias após a cirurgia primária (as amostras foram recolhidas uma vez por dia). Sabe-se que a proteína urinária difere por sexo e idade [26]. Observou PDGFRB urinária de ser significativamente associada com a idade, em vez de género neste estudo (Tabela 4). Além disso, PDGFRB urinária foi significativamente associados positivamente com o tamanho do tumor (Tabela 4). Em 183 pacientes NMIBC, o nível de PDGFRB urinária foi aumentada em pacientes com um tamanho de tumor grande ( 3 cm; 329,6 ± 22,10 ng /ml, n = 46) em comparação com aqueles com um tamanho pequeno tumor (≤3 cm; 290,4 ± 11,08 ng /ml, n = 139) (Figura S3 no ficheiro S1, P = 0,0907). Isto sugere que os níveis de PDGFRB urinária aumenta com o tamanho do tumor. Além disso, não houve diferença significativa entre os pacientes NMIBC-cirurgia pré e pós (Figura 2, P = 0,0607), o que indica que PDGFRB urinária não poderia servir como um biomarcador de diagnóstico precoce eficaz para NMIBC. Num estudo de acompanhamento adicional, observou-se que os níveis de PDGFRB urinária em indivíduos com recaída foram significativamente mais elevados do que aqueles sem recorrência (Fig 3A), e estes foram também correlacionada com o risco de recorrência do cancro de 3 anos. A AUC correspondente foi de 0,826 (Figura 3B; 95% CI, 0,768-0,884). Além disso, juntamente com características clínicas, tais como a idade, tamanho do tumor e número de tumores, a AUC aumentada para 0,862 (Figura 3D; IC de 95%, 0,809-0,914), o que sugere que PDGFRB urinária é um factor de risco para NMIBC recorrência e poderia servir como potencial biomarcador não invasivo para prever a recorrência de NMIBC.

Conclusão

Em resumo, pela primeira vez, mostrou que PDGFRB urinária poderia servir como um biomarcador não invasivo para a previsão de NMIBC recorrência. Validação por vários centros clínicos é necessário para posterior aplicação em ambientes clínicos.

Informações de Apoio

arquivo S1.

Contém Apoio Figuras. Figura S1 Exemplo de rede. Figura S2 Validação de recaída. Figura S3 Determinação de PDGFRB urinária. Figura S1. A rede de PPI foi analisada pelo software Cytoscape com o plug-in ClueGO + Cluepedia. Os termos KEGG enriquecidos foram mostrados. Figura S2. Validação de expressão PDGFRB na urina e em tecidos tumorais de pacientes NMIBC com recaídas e livre de recidiva. A expressão de PDGFRB na urina de pacientes com recaída NMIBC e livre de recidiva foi analisada por Western Blotting (A). A expressão de PDGFRB em tecido de tumor de pacientes com recaída NMIBC (B) e livre de recaída (C) foi analisada por IHC. Um total de 50 tecidos de câncer de 27 de recaída e 23 pacientes livres de recidiva foram avaliadas por imunohistoquímica. Não houve diferenças significativas de expressão PDGFR em tecidos de câncer entre os grupos recaíram e livre de recidiva. O representante 6 amostras de pacientes com recidiva e livre de recidiva foram mostrou em 3A e 3B, respectivamente. Figura S3. Determinação das concentrações PDGFRB urinário em pacientes NMIBC com um tamanho grande e pequeno tumor por ELISA. Em 183 pacientes NMIBC, o nível de PDGFRB urinária foi aumentada em pacientes com um tamanho de tumor grande ( 3 centímetros) em comparação com aqueles com um tamanho pequeno tumor (≤3 cm) (P = 0,0906)

doi: 10.1371. /journal.pone.0096671.s001

(PDF)

S2 Arquivo.

Suplementar dados

doi:. 10.1371 /journal.pone.0096671.s002

(XLS)