Sumário

relacionadas com o antigénio Fos 2 (FRA-2 /FOSL2) pertence à família do factor de transcrição AP-1. Embora FOSL2 tem sido mostrado para ser envolvido em diversos processos fisiológicos e patológicos, muito pouco se sabe sobre as vias de sinalização que regulam a expressão FOSL2 e os mecanismos de função FOSL2. Aqui, mostramos que a expressão é regulada por FOSL2 TGF-β1 e que FOSL2 é necessária para a migração induzida por TGF-β1. Nós demonstramos que FOSL2 interage com Smad3

in vitro

e

in vivo

e, assim, up-regula respostas de sinalização TGF-induzida-p1. Mecanisticamente, FOSL2 promove P300 ligação para Smad3 e a acetilação de Smad3 por P300. Além disso, mostramos que a expressão de FOSL2 se correlaciona com a expressão Smad3 activado em câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC clínica amostras). Em resumo, o presente estudo indica que FOSL2 facilita a migração induzida por TGF-β1 pela interação com Smad3 em NSCLC e sugere FOSL2 como um potencial alvo terapêutico para NSCLC

Citation:. Wang J, Sun D, ​​Wang Y, Ren F, Pang S, Wang D, et al. (2014) FOSL2 Positivamente Regula sinalização TGF-β1 em Non-Small Cell Lung Cancer. PLoS ONE 9 (11): e112150. doi: 10.1371 /journal.pone.0112150

editor: Jeremy J W. Chen, do Instituto de Ciências Biomédicas, Taiwan

Recebido: 04 de junho de 2014; Aceito: 13 de outubro de 2014; Publicação: 06 de novembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Wang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento: Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China (81172818; 81172215).. O financiador não teve nenhum papel no desenho do estudo, recolha e análise de dados, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

A via de TGF-β controla diversos processos biológicos, incluindo a proliferação celular, diferenciação, apoptose, e a migração [1]. Após a activação de heteromérico tipo II e complexos do receptor da cinase de serina-treonina tipo I na ligação do ligando a TGF-β, a sinalização intracelular é iniciada pela fosforilação de proteínas do receptor de Smad activados (R-SMADs) [2]. Como factores de transcrição da via de TGF-β, fosforilados Smad2 /3 forma um complexo com Smad4 e, em seguida, transloca-se para o núcleo para regular a transcrição de genes alvo via de TGF-p [3]. As respostas celulares a sinalização de TGF-β são ainda influenciada pela interacção de proteínas Smad com cofactores (coativadores ou co-repressores) para modular a actividade de transcrição [4].

antigénio relacionado-Fos

2 (FRA-2 /FOSL2) pertence para o AP-1 do factor de transcrição da família, que inclui as várias isoformas de Fos e Jun [5]. As várias proteínas FOS desempenham papéis importantes no desenvolvimento distinto, fisiológicos e processos patológicos [6], mas esses papéis individuais e os mecanismos envolvidos ainda não são claros. FOSL2 exerce uma função específica no desenvolvimento ósseo [7] e parece ter papéis fisiológicos e patológicos seletivos em diversos processos, incluindo a regulamentação photoperiodic [8], o cancro [9], e fibrose [10]. Vários estudos anteriores indicaram que FOSL2 desempenha um papel chave na regulação da via de TGF-β. Por exemplo, FOSL2 é sobre-expresso em esclerose sistémica (ES) e actua como um novo mediador a jusante da citocina fibrótica TGF-β [11]. Em fibroblastos cardíacos, FOSL2 como um regulador da transcrição podem induzir a expressão de TGF-β [10]. Além disso, é necessário para FOSL2 4 (LOXL4) expressões oxidase-like lisil induzida por TGF-β na regulação da matriz extracelular (ECM) e a síntese de remodelação [12]. No entanto, desconhece-se se FOSL2 regula via de TGF-β na carcinogênese.

O presente estudo foi iniciado para examinar o papel do FOSL2 na migração induzida por TGF-β. A expressão de FOSL2 foi aumentada após o tratamento com TGF-β e foi necessária para a migração induzida por TGF-β1. FOSL2 também foi mostrado para vincular a Smad3 para modular as respostas a sinalização induzida por TGF-β.

Materiais e Métodos

Declaração de Ética

As informações do paciente e as amostras foram obtidas com informado por escrito consentimento. Cada paciente neste estudo deram seu consentimento informado para publicar estes detalhes do caso. A pesquisa foi aprovada pelo comitê de ética do Hospital de Câncer de Harbin Medical University.

linhas celulares, cultura de células, e transfecção

O pulmão linha de células de adenocarcinoma humano A549 e linha de células de rim embrionário humano 293T foram adquirido a partir de American Type Culture Collection (ATCC) e mantida em DMEM suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS) (Invitrogen) contendo 100 unidades /ml de penicilina e 100 unidades /ml de estreptomicina (Sigma) a 37 ° C com 5% de CO

2. Para a indução de EMT, as células A549 foram cultivadas em 10% de FBS durante 24 horas e depois manteve-se durante 72 horas em meio isento de soro na presença de 2 ng /ml de TGF-β1 (R D Systems). As células A549 foram transfectadas utilizando X-tremeGENE (Roche Applied Science), e células HEK293T foram transfectadas utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante. Um pequeno ARN interferente (siRNA) segmentação FOSL2 humana foi transfectada em células durante 24 horas, utilizando Lipofectamina RNAiMAX Reagent (Invitrogen).

Os plasmídeos e os anticorpos

marcada com myc Smad3, FOSL2 marcado com FLAG, e p300 HA-tag foram construídos por subclonagem padrão. Full-length Smad3 foi subclonado em grelha com o vector pGEX4T-1 para obter proteínas de fusão GST. O plasmídeo repórter 3TP-Lux foi obtido a partir de Dr Joan Massague de Sloan-Kettering Institute, Nova Iorque, Nova Iorque. Os anticorpos foram adquiridos como se segue: anti-FOSL2, anti-FLAG, anti-myc, anti-HA e anti-GAPDH da Sigma; anti-p300, anti-Smad3, e anti-GST a partir de Santa Cruz; anti-acetilado-lisina a partir de Cell Signaling Technology; anti-p-Smad3 de Abcam; Alexa Fluor 488 burro IgG anti-rato e Alexa Fluor IgG anti-coelho de burro 546 da Invitrogen. siRNAs para FOSL2 e o controlo negativo foram obtidos a partir de Dharmacon.

Imunoprecipitação e Western Blotting Análise

Ao fim de 24 horas após a transfecção, os lisados ​​de células foram recolhidas utilizando tampão de lise (Tris 50 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, EDTA 5 mM, NaF 50 mM e 0,1% de NP-40) e incubados com proteína a ou G Sefarose grânulos e os anticorpos apropriados durante 2 h a 4 ° C. Após lavagens extensivas, as proteínas imunoprecipitadas foram fervidas em tampão de amostra de proteína, durante 5 min e, em seguida, separados por SDS-PAGE, transferidas para membranas de PVDF (Millipore), e detectados por análise de transferência de Western.

GST Pull-down Ensaio

GST e as proteínas de fusão GST-Smad3 foram expressos em células BL21 e purificada de acordo com as instruções do fabricante (GE Healthcare vida Science). marcado com FLAG FOSL2 construções foram expressas em células HEK 293T. Os lisados ​​de proteína de célula completa foram colhidas após 48 horas, utilizando tampão de lise celular, pré-aclarados com glutationa Sepharose, e depois incubadas com GST de controlo durante 2 horas a 4 ° C ou GST-Smad3. As contas foram lavadas cinco vezes com tampão de ligação a GST, eluída em 40 ul de 2 x tampão de amostra de SDS, e então detectado por imunotransf erência.

Transcrição Reporter Assay

As células foram tratadas com ou sem 2 ng /ml de TGF-β1 em 20 horas após a transfecção. As células foram então colhidas e analisadas com o sistema Luciferase Reporter Assay duplo (Promega). Todos os ensaios foram realizados em triplicado e todos os valores foram normalizados para eficicia de transfeco contra

Renilla

actividades de luciferase.

em tempo real de RT-PCR (qRT-PCR)

total os ARN foram obtidos utilizando o reagente TRIzol (Invitrogen). A transcrição reversa do RNA foi realizada usando o sistema IMPROM-II de transcrição reversa (Promega) de acordo com as instruções do fabricante. Transcriptase reversa quantitativa (qRT) -PCR foi realizada utilizando um ABI Prism 7500 Sequence Detector Sistema (Applied Biosystems) com os iniciadores específicos do gene de p21 e PAI-1.

Imunofluorescência

células A549 eram cultivadas numa placa de 6 poços e tratadas com TGF-β1 (2 ng /ml). As células foram então fixadas com 4% de paraformaldeído, permeabilizadas com 0,1% de Triton X-100, e incubados com anticorpos primários contra FOSL2 ou Smad3 durante 1 h a 37 ° C. As células foram então incubadas com Alexa Fluor 488 ou Alexa Fluor 546 anticorpos durante 30 min a 37 ° C. As imagens fluorescentes foram capturadas usando um microscópio de varredura a laser confocal.

Imunohistoquímica

As amostras de tecido foram embebidos em parafina. As secções foram deparaffinised em xileno e re-hidratadas em um gradiente de etanol. Após a recuperação de antigénios, as secções foram tratadas com 3% H

2O

2 durante 10 min, seguido de albumina de soro bovino a 5% (BSA) durante 30 min. As secções foram então incubadas com anticorpos primários. A visualização da ligação do anticorpo foi realizada utilizando coloração DAB. Os núcleos foram corados com hematoxilina. Os resultados de positividade foram avaliadas independentemente por dois patologistas.

Os pacientes

espécimes cancro do pulmão (n = 57) foram coletadas de pacientes com NSCLC em Hospital do Câncer Harbin Medical University, de 2009 a 2012. Os tecidos foram armazenadas a -80 ° C até à sua utilização. Todas as amostras eram de pacientes que não haviam sido submetidos a radioterapia pré-operatória ou quimioterapia. O estadiamento patológico dos 57 tumores foi realizada de acordo com o tumor-nódulo-metástase (TNM) sistema de estadiamento.

Cell Migration Assay

ensaios de migração foram realizadas com filtros de 8 mícrons (BD Biosciences ). Cada poço foi carregado com ~ 1 × 10

5 células. Após incubação durante 16 h, as células que passam através do filtro para os poços inferiores foram fixados em formalina e coradas com violeta de cristal. As células em 10 campos selecionados aleatoriamente (200 ×) de cada poço foram contados.

Análises Estatísticas

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS17.0. Outras análises estatísticas foram realizadas utilizando um teste t de Student. A análise de sobrevivência de Kaplan-Meier para avaliar o tempo de sobrevida global foi realizada pelo teste de log-rank. Os dados são apresentados como a média ± SD de 3 ensaios independentes. A diferença estatisticamente significativa foi considerada quando

P

. 0,05

Resultados

FOSL2 é necessário para TGF-induzida-β1 migração

Para começar a explorar a possibilidade de que a expressão é regulada por FOSL2 TGF-β1, que trataram células A549 com TGF-β1 ao longo de um curso de tempo que mede 24 h a 72 h, e realizada uma análise de western blot. Os resultados mostraram que os níveis FOSL2 aumentou substancialmente em resposta ao tratamento com TGF-β1 nesta linha celular (Figura 1A). Os níveis de expressão FOSL2 máximos às 72 horas foram de aproximadamente 4 vezes maior que o nivel basal de controlo (Figura 1A). Em seguida, testámos se FOSL2 participa na migração de TGF-induzido-β1. Para explorar esta possibilidade, derrubado FOSL2 expressão em células A549, e uma análise de Western blot indicou que os níveis de FOSL2 foram significativamente diminuída em comparação com as células de controlo (Figura 1B). Em seguida, examinou-se o efeito regulador de FOSL2 na capacidade migratória das células A549, utilizando um ensaio de migração Transwell. tratamento de TGF-β1 promoveu significativamente a migração de células A549, enquanto que derrubar FOSL2 aboliu a migração celular na presença de TGF-β1 (Figura 1C). Além disso, também examinámos as alterações morfológicas das células A549 depois de exposição a TGF-β1. Na ausência de TGF-β1, as células mantiveram uma morfologia epitelial de paralelepípedos e o crescimento de padrão clássico, mas as células adoptou uma morfologia mais do tipo fibroblastos e reduzido o seu contacto célula-célula, após a estimulação de TGF-β1; No entanto, este efeito foi inibido por FOSL2 depleção (Figura 1D).

células A549 (A) foram incubadas com TGF-β1 (2 ng /mL) durante os tempos indicados, e as células foram recolhidas por? Western blot? análise. GAPDH foi usada como um controlo de carga. níveis (B) FOSL2 foram examinados por transferência Western em FOSL2-siRNA e células sicontrol A549. GAPDH foi também determinada como um controlo de carga. (C) A migração celular foi medida utilizando ensaios Transwell em sicontrol e células A549 siFOSL2 com ou sem TGF-β1 tratamento (2 ng /ml). As células que migram para a superfície inferior dos filtros Transwell foram fotografados (topo) e contadas (parte inferior). (D) e siControl siFOSL2 células A549 foram incubadas com ou sem 2 ng /ml de TGF-β1 durante 72 h. microscopia de contraste de fase mostra as alterações morfológicas celulares.

FOSL2 interage com Smad3

Porque Smad2 /3 proteínas são as efetoras transcrição da sinalização TGF-β1, examinamos se a inibição da migração induzida por TGF-β1 pela depleção FOSL2 era mediada pela interacção com estas Smads. Para testar se existe uma interacção entre FOSL2 e Smad3 in vivo, utilizou-se lisados ​​celulares a partir de células 293T transfectadas com os plasmídeos de expressão para marcada com Flag FOSL2 e marcada com myc Smad3 e descobriram que FOSL2 pode ser co-precipitada com Smad3 (Figura 2A) , ao passo que não foi observada uma interacção entre FOSL2 e Smad2 (dados não mostrados). Em seguida, determinar se endógena FOSL2 e Smad3 também interagir. Tal como mostrado na Figura 2B, FOSL2 endógena associada com Smad3 em células A549, e a interacção foi notavelmente aparente na presença de TGF-β1. Além disso, FOSL2 colocalised com Smad3 na presença de TGF-β1 (Figura 2C). Para determinar se FOSL2 interage directamente com Smad3, realizamos ensaios de GST pull-down. quantidades equivalentes de GST-Smad3 ou proteína GST sozinho foram incubadas com FOSL2 Bandeira-marcados. FOSL2 directamente interagiu com Smad3, mas não a interacção de Smad3 foi evidente com a protea GST (Figura 2D).

(A) FOSL2 interage com Smad3 in vivo. FLAG-FOSL2 e Myc-Smad3 foram co-transfectados em células HEK293T. Os lisados ​​celulares foram colhidas, e o IP foi realizada com um anticorpo anti-Myc. FOSL2 e Smad3 foram detectados a partir dos imunoprecipitados por transferência de Western com os anticorpos indicados. (B) A associação entre FOSL2 endógena e Smad3 em células A549 com TGF-β1 tratamento (2 ng /ml). A imunoprecipitação foi realizada utilizando um anticorpo anti-IgG ou anti-anticorpo Smad3. (C) colocalisation subcelular de FOSL2 e Smad3 em células A549 na presença de TGF-β1 (2 ng /ml). Os núcleos foram corados com DAPI. (D) quantidades equivalentes de GST-Smad3 ou GST sozinho foram incubadas com lisados ​​celulares de células 293T HEK com superexpressão da Bandeira-FOSL2; 10% da entrada foi executado no gel como um controlo. A GST-Smad3 foi detectado por coloração de géis com Azul de Coomassie.

FOSL2 modula as respostas de sinalização de TGF-p1-induzida

A seguir investigou o efeito da expressão de TGF-FOSL2 β1- respostas de transcrição dependentes utilizando o repórter 3TP-lux. A co-expressão de FOSL2 gradualmente resultou numa sobre-regulação de actividade repórter induzido por Smad3 (Figura 3A). Por outro lado, a actividade repórter foi diminuída em células A549 transf ectadas com FOSL2 siRNA (siFOSL2) em relação às células de controlo transfectadas com ARNsi mexidos (Figura 3B), confirmando que regula a actividade endógena FOSL2 Smad3.

(A) HEK 293T as células foram transfectadas com o repórter p3TP-Lux plasmídeo abrigando Smad3 na ausência e na presença de FOSL2, como indicado. As células foram colhidas às 36 h após a transfecção e ensaiados quanto à actividade de luciferase. Os dados são as médias ± S.D. (B) células A549 foram transfectadas com siFOSL2 e controle mexidos siRNA. Após 24 h, as células foram transfectadas com p3TP-Lux e Smad3, como indicado. A actividade de luciferase foi ensaiada após mais 24 h. Os dados são médias ± S.D. células (C) A549 transfectadas com siFOSL2 e controlo scrambled siRNA foram estimuladas com 2 ng /ml de TGF-β1 durante 4 h. Total de ARNm foram analisados ​​por qRT-PCR utilizando iniciadores específicos para p21 e PAI-1. Os dados são médias ± S.D. células (D) A549 transfectadas com siFOSL2 e controlo scrambled siRNA foram estimuladas com 2 ng /ml de TGF-β1 durante 4 h e, em seguida, colhidas para produzir lisados ​​celulares. Os níveis de expressão das proteínas indicadas foram analisados ​​por transferência de Western com os anticorpos adequados, como indicado.

Em seguida, avaliou o efeito do knockdown FOSL2 sobre a expressão endógena de TGF-β1 /Smad3 genes alvo. Nas células A549, o tratamento de TGF-β1 induziu a expressão rápida de p21 e ARNm de PAI-1, e knockdown de FOSL2 atenuou significativamente estes efeitos (Figura 3C). Consistentemente p21, induzido por TGF-β1 e PAI-1 expressão ao nível da proteína foi inibida em células A549 seguintes FOSL2 depleção (Figura 3D).

FOSL2 promove P300 ligação para Smad3 e a acetilação de Smad3 por P300

é bem sabido que o CBP /p300 coopera com o complexo de Smad para regular o TGF-β transcrição do gene alvo, que estabiliza a actividade de transcrição do Smad complexo e, portanto, aumenta a duração de sinalização de TGF-β. Para explorar ainda mais o mecanismo de regulação da FOSL2 na sinalização TGF-β, examinamos se FOSL2 afeta a formação TGF-induzida-β1 do complexo /p300 Smad3. A interacção entre Smad3 e P300 foi induzido pela estimulação de TGF-β1, e esta interacção foi profundamente aumentou a expressão ectópica de FOSL2 (Figura 4A). Em contraste, a interacção Smad3 e p300 foi atenuada por o knockdown de FOSL2 (Figura 4B). Porque Smad3 acetilação por p300 regula positivamente a sua actividade de transcrição, que, assim, examinar se FOSL2 está envolvido neste processo. Para testar esta possibilidade, células 293T foram transfectadas com Myc-Smad3 sozinho ou em conjunto com p300 ou FOSL2. Tal como mostrado na Figura 4C, p300 induzida a acetilação de Smad3, e FOSL2 superexpressão melhorou significativamente este acetilação. Além disso, o esgotamento FOSL2 endógena suprimiu a acetilação da Smad3 por p300 em células A549 (Figura 4D).

(A) células HEK293T foram co-transfectadas com plasmídeos de expressão para HA-p300 e FLAG-FOSL2, juntamente com Myc-Smad3 , tal como indicado, com ou sem TGF-β1 com tratamento (2 ng /ml). p300 Smad3-ligado foi imunoprecipitado com um anticorpo anti-Myc e detectadas através de Western blotting com um anticorpo anti-HA. (B) As células A549 foram transfectadas com siFOSL2. Após 24 h, as células foram tratadas, tal como indicado, com o tratamento de TGF-β1 (2 ng /ml). (C) As células HEK293T foram transfectadas transientemente com os plasmídeos indicados. As células foram incubadas na presença de TSA (5 uM) durante 20 h. Os lisados ​​celulares foram imunoprecipitados (IP) com um anticorpo anti-myc, e acetilado Smad3 (Ac-Smad3) foi detectada por transferência Western com um anticorpo anti-lisina acetilada. (D) As células A549 foram transitoriamente transfectadas com os plasmídeos indicados. As experiências foram realizadas tal como descrito na Fig. 4C.

Correlação de FOSL2 e expressão Smad3 activado em tumores NSCLC

Para investigar mais a relação clínica entre FOSL2 e sinalização TGF-β1, a expressão de FOSL2 e p-Smad3 em 57 amostras de NSCLC foram examinados por métodos imuno-histoquímicos, e as correlações das proteínas foram avaliadas. Dentre 57 casos, 35 foram estágio patológico I, e 22 estavam em pStage III. Dos 35 casos em pStage I, 31 (88,6%) mostraram uma menor expressão das proteínas FOSL2 e p-Smad3; no entanto, 18 dos 22 casos (81,8%) em pStage III apresentaram maior expressão de ambas as proteínas (Figura 5A). Além disso, a expressão FOSL2 foi positivamente correlacionada com a coloração de P-Smad3 (P 0,001) (Figura 5B). As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier mostraram que os pacientes com maior expressão foram FOSL2 numa notavelmente maior risco de uma morte mais rápida do que aqueles com menor expressão FOSL2 (P = 0,0059) (Figura 5C). Portanto, estes resultados indicam que a expressão FOSL2 no tecido do cancro do pulmão se correlaciona com a recidiva pós-operatória e sobrevida de pacientes com câncer de pulmão.

(A) Análise imuno-histoquímica de FOSL2 e p-Smad3 em 57 amostras de NSCLC. (B) a expressão FOSL2 está positivamente correlacionada com a expressão de p-Smad3 em amostras de NSCLC. de pontuação semi-quantitativo foi realizado (teste de correlação de Pearson; r = 0,858, p 0,001). Note-se que alguns dos pontos nos gráficos representam mais do que um espécime (algumas dezenas sobrepostos). As curvas de sobrevivência (C) de Kaplan-Meier para os pacientes com NSCLC FOSL2 expressão maior ou menor. A diferença na sobrevida pós-operatória entre pacientes com NSCLC com FOSL2 maior expressão e com FOSL2 menor expressão foi muito significativa (

P

= 0,0059 pelo teste de log-rank).

Discussão

Nossos resultados demonstram que FOSL2 up-regulação é necessária para a migração induzida por TGF-β1. A inibição da expressão FOSL2 impediu a migração induzida por TGF-β1-e as alterações morfológicas associadas. vias de sinalização Colectivamente, estes resultados sugerem que FOSL2 é um componente importante de uma rede reguladora a migração induzida por TGF-β1.

Smad3 é um transdutor de sinal chave em TGF-β1 induzidas por [13]. Num esforço para melhor elucidar a relação entre FOSL2 e Smad3, identificamos FOSL2 como um co-factor para Smad3. Como FOSL2 funções em células não foi caracterizado até à data [14]. Nós primeira validado as interações físicas de FOSL2 com Smad3. No núcleo, oligómeros Smad recrutar os co-activadores transcricionais p300 /CBP [15] – [17], que são proteínas estruturalmente relacionadas com actividade de histona acetiltransferase (HAT). A acetilação é uma modificação pós-tradução de proteínas, com histonas sendo o exemplo mais conhecido [18]. Smad3 é um alvo directo dos co-activadores transcricionais p300 /CBP, e este acetilação é estimulada por TGF-β [19]. No entanto, não é claro se existem outras proteínas que facilitam este processo. Neste relatório, demonstramos que FOSL2 promove P300 ligação a Smad3 e Smad3 acetilação por P300, sugerindo que FOSL2 desempenha um papel positivo na regulação da sinalização TGF-β.

A metástase é um processo altamente complexo que envolve a fuga de células tumorais a partir do tumor primário em massa, migração e invasão através de membranas basais e de tecidos conjuntivos, a entrada na vasculares ou do sistema linfático, a sobrevivência na circulação, a extravasão em locais diferentes órgãos (incluindo fixação às células endoteliais e diapaedesis através do endotélio), e a proliferação de modo a formar uma metástase distante [20] – [22]. Resultados anteriores demonstraram que a sobre-expressão FOSL2 leva a um aumento do potencial invasivo de células de cancro da mama, mas o mecanismo não foi elucidado, até agora, [23]. Dado que TGF-β1 pode utilizar vários programas para promover metástases do cancro através dos seus efeitos sobre o microambiente do tumor, as propriedades invasivas melhorados, e a inibição da função das células imunes, os nossos resultados também revelam que FOSL2 pode aumentar o potencial invasivo através da via de TGF-β. Além disso, os nossos resultados clínicos de uma correlação entre a expressão FOSL2 e Smad3 activados em tumores NSCLC confirmar esta conclusão. Estes resultados destacam a contribuição de FOSL2 de não-pequenas células do pulmão tumorigénese e levantam a possibilidade de inibir FOSL2 na terapia NSCLC.

Em resumo, nós fornecemos a primeira evidência de que FOSL2 facilita a migração TGF-induzida-β1 em NSCLC células por interacção com Smad3 e, portanto, promove P300 ligação a Smad3 e Smad3 acetilação por P300, eventos que podem contribuir para o desenvolvimento das NSCLC e sugerir FOSL2 como um potencial alvo terapêutico em NSCLC.

Reconhecimentos

Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China (81172818; 81172215).