Abstract

Aim

carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) é uma das malignidade fatais mais comuns do trato digestivo. Seu prognóstico é ruim, principalmente devido à falta de marcadores confiáveis ​​para a detecção precoce e previsão de prognóstico. Aqui pretendemos identificar as moléculas envolvidas na carcinogénese CICAc e aqueles como potenciais marcadores de prognóstico e como novos alvos terapêuticos moleculares.

Métodos

Eu executei perfil de expressão gênica em todo o genoma análise de 10 primário ESCCs e os seus tecidos normais adjacentes por microarrays de cDNA representando 47.000 transcrições e variantes. genes candidatos foram então validado pela semi quantitativa transcrição reversa-PCR (RT-PCR), microarrays de tecido (TMA) e imuno-histoquímica coloração (IHC).

Resultados

Usando uma linha de corte arbitrário de sinal proporção de ≥1.5 ou ≤-1,5 log, observou-se 549 genes up-regulamentados e 766 genes regulados negativamente em ESCCs em comparação com os tecidos do esôfago normais. As funções de 302 genes expressos diferencialmente foram associados com o metabolismo celular, a adesão celular e resposta imune. Vários genes candidatos desregulamentado incluindo quatro overexpressed (CTTN, DMRT2, Mcm10 e SCYA26) e dois underexpressed (HMGCS2 e SORBS2) foram posteriormente verificada, que pode ser servido como biomarcadores para ESCC. Além disso, observou superexpressão de cortactina (CTTN) em 126/198 (63,6%) dos casos de ESCC e foi significativamente associada com metástases em linfonodos (P = 0,000), estágio patológico (P = 0,000) e baixa sobrevida (P 0,001) CICAc dos pacientes. Além disso, uma correlação significativa entre CTTN superexpressão e menor taxa de sobrevivência específica da doença foi encontrada em diferentes subgrupos de ESCC paciente estratificada por o estágio patológico (P 0,05).

Conclusão

Nossos dados fornecem informações valiosas para o estabelecimento de moléculas como candidatos a alvos prognósticos e /ou como terapêuticos

Citation:. Lu P, Qiao J, Ele W, Wang J, Jia Y, Sun Y, et al. (2014) Gene Expression Perfil Análise Genome-Wide Identificar CTTN como um potencial prognóstico marcador no cancro esofágico. PLoS ONE 9 (2): e88918. doi: 10.1371 /journal.pone.0088918

editor: Ju-Seog Lee, da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos da América

Recebido: 22 de Agosto de 2013; Aceito: 16 de janeiro de 2014; Publicação: 14 de fevereiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Lu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações do National Science Foundation Natural da China (81150010, 81272227 e 81372583). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) é o tipo predominante de câncer de esôfago (CE) internacionalmente, sendo responsável por mais de 90% de todos os casos da CE [1]. CICAc é uma das formas mais comuns de cancro e está associada com um prognóstico pobre [2]. Apesar dos avanços nas técnicas de diagnóstico e terapias multimodais, CICAc continua a ser um cancro mortal com uma taxa de sobrevida em 5 anos com média de 15% em muitos países [3]. O mau prognóstico é o resultado do carácter biológico agressivo do tumor, a falta de técnicas de diagnóstico fiáveis ​​para a detecção na fase inicial e na ausência de tratamento eficaz individualizado [4]. Diminuindo a taxa de mortalidade exigiria diagnóstico precoce e tratamento para os pacientes. No entanto, os biomarcadores actuais que são utilizados para identificar pacientes CICAc numa fase precoce e seleccionar modalidades de tratamento para pacientes individuais ainda falta sensibilidade e especificidade suficientes [5]. Até agora, a técnica molecular tem sido considerado como um método ideal para o diagnóstico precoce e a predição de prognóstico em CICAc. Assim, é de grande valor clínico para procurar novos indicadores terapêuticas de diagnóstico e previsão de prognóstico com base no mecanismo molecular subjacente a carcinogênese esofágica.

Para compreender a base molecular e selecionar candidatos para o desenvolvimento de novos anti-tumoral fármacos e marcadores tumorais, é necessário analisar as alterações globais de expressão do gene entre os tecidos de tumor CICAc e tecidos não tumorais. Para este efeito, a tecnologia de micromatriz de ADNc, uma ferramenta poderosa para os estudos de expressão de genes em larga escala, que com base na hibridação, foi utilizado para analisar as alterações na expressão de milhares de genes simultaneamente [6]. Vários estudos investigaram os microarrays perfis de expressão de genes em tecidos e linhas celulares CICAc [7], [8]. No entanto, informações úteis provenientes desses estudos foi limitado.

Com o objetivo de identificar os mais novos genes relacionados ao câncer de esôfago que poderiam ser potenciais alvos moleculares para o diagnóstico, tratamento e /ou prevenção da ESCC, comparamos gene perfis de expressão entre os tecidos tumorais e normais epitélios combinado a partir de 10 amostras usando o Affymetrix CICAc U133 genoma humano mais 2,0 GeneChip consistindo de 47.000 transcrições. O presente estudo identificou uma série de genes expressos diferencialmente, incluindo as relacionadas com a adesão celular, o metabolismo celular e resposta imune. Notavelmente, uma proteína de ligação a actina filamento e um alvo quinase, cortactina (CTTN ou EMS1), verificou-se ser um dos genes sobre-expressos em CICAc mais significativos. Aqui, nós relatamos que a superexpressão de CTTN tem valor prognóstico independente e também pode ser servido como um alvo terapêutico para ESCC.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

amostras de tecido CICAc utilizada neste estudo foram aprovados pelos Comitês de revisão ética de pesquisas envolvendo seres humanos da Universidade de Zhengzhou. Escrito consentimentos informados para o trabalho humano original que produziu as amostras de tecido foram obtidos.

Amostras CICAc clínicos

tecidos CICAc primários e tecidos normais adjacentes esofágicas epiteliais (tomadas 5 cm de distância da borda do tumor) foram coletadas no momento da ressecção cirúrgica no Hospital de Linzhou Pessoas (Henan, China). Todos os tecidos tumorais foram histologicamente confirmados como ESCC. Os pacientes eram todos não previamente tratados (isto é, sem radioterapia ou quimioterapia). O consentimento informado foi obtido de todos os pacientes. Os espécimes após a ressecção cirúrgica foram armazenadas a -80 ° C imediatamente até que o tempo de extracção de ARN. As dez amostras tumorais seleccionadas para a análise de cDNA microarray foram derivados de tecidos de tumores dissecados que compreendia mais de 80% de células tumorais sem necrose. Emparelhados mucosas normais adjacentes foram usados ​​como referência. Um total de 231 ESCCs fixados em formalina e embebidos em parafina e as suas amostras de tecido correspondentes normais esofágicas epiteliais também foram gentilmente cedidas pelo Hospital das Linzhou Pessoas. As informações clínicas foram obtidas dos registros médicos.

Linhas Celulares

Cinco linhas celulares CICAc japoneses (KYSE140, KYSE410, KYSE180, KYSE30 e KYSE510) foram obtidos a partir DSMZ (Braunschweig, Alemanha), o Alemão Centro de Recursos para material Biológico [9]. Chinese linha de células CICAc HKESC1, CE18 e EC109 foram gentilmente cedidas pelo Professor Srivastava (Departamento de Patologia da Universidade de Hong Kong, Hong Kong, China) [10]. Todas estas linhas celulares foram cultivadas CICAc em meio RPMI 1640 com suplemento de 10% de soro fetal de bovino. As células foram incubadas a 37 ° C numa câmara humidif içada contendo 5% de CO

2.

Extração de RNA, a amplificação e Rotulagem

As amostras de tecido foram moídos em pó em azoto líquido, e reagente TRIzol foi adicionado, assim que a vaporização de azoto concluiu. O ARN total foi isolado, subsequentemente, de acordo com as instruções do fabricante. A concentração de RNA foi medida usando um espectrofotómetro NanoDrop (ND-1000; Labtech International, França) e a pureza foi avaliada pela A260 /A280 e razões A230 /A260. Um Bioanalyzer Agilent (modelo 2100; Agilent Technologies, Santa Clara, CA) foi usado para avaliar a qualidade do ARN, após isolamento e, subsequentemente, após a marcação de biotina e fragmentação. Para isso, 100 ng de ARN de cada amostra foi amplificada para se obter ARNc e foi marcado utilizando Affymetrix GeneChip ensaios eucariótica rotulagem ciclo 2 para análise de expressão (Affymetrix; 900494) de acordo com as instruções do fabricante no https://www.affymetrix.com/products /reagents/specific/cdna2.affx.

Microarray hibridação

Affymetrix HG U133 mais 2,0 microarrays de oligonucleótidos foram pré-hibridados em solução de hibridação contendo 1 mol /L de NaCl, 20 mmol /L de EDTA, 100 mmol /L de 2- (N-morfolino) etanossulfónico, e Tween 20 a 0,01% durante 10 minutos a 45 ° C e 60 revoluções por minuto. A solução de pré-hibridação foi então removido e substituído com 200 mL de solução de hibridação contendo 0,05 mg /mL de fragmentos de cRNA, e as matrizes foram hibridizados durante 16 horas a 45 ° C e 60 revoluções por minuto. Arrays foram posteriormente lavadas (Affymetrix modelo de estação fluídica 400), e foi digitalizado e visualizado usando um scanner Gene Array (Hewlett-Packard).

Análise Microarray

A qualidade do tumor normal ou agrupados as amostras foram verificados pela heatmap com agrupamento (Figura S1). Affymetrix U133 genoma humano mais 2,0 GeneChip (Affymetrix), cobrindo 47.000 transcritos e variantes, foi utilizado para identificar os genes expressos diferencialmente entre os tecidos de tumor e tecidos normais CICAc. Microarray reacção foi feita de acordo com as instruções do fabricante. Probe definir intensidades foram calculadas usando o MAS (v5.0, Affymetrix) software Microarray Analysis Suite e normalizado contra 100 genes de limpeza a uma intensidade média de 2.000 em arquivos de máscara de U133 mais 2,0 antes de uma nova análise estatística. valores de expressão normalizados foram então comparados entre amostras CICAc e seus tecidos normais emparelhadas. diferenças fold-change foram calculados para identificar-regulada e genes regulados negativamente. Os transcritos com mais do que uma diferença de 1,5 vezes no nível de expressão foram definidas como expresso diferencialmente. Especificamente concebido ferramentas on-line, incluindo Fatigo [11], Gene Ontology [12] fornecido pelo Consórcio GO, e banco de dados NetAffx Analysis Center [13], foram usados ​​para classificar os papéis funcionais dos genes diferencialmente expressos identificados. dados de cDNA microarray foram submetidos a Gene Expression Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) sob o número de acesso GSE33810.

Semiquantitativa transcrição reversa-PCR (RT- PCR)

para examinar a confiabilidade dos dados de microarrays, a análise de RT-PCR foi usado para confirmar os dados da análise de microarray para os quatro genes selecionados up-regulamentados (CTTN, DMRT2, Mcm10 e SCYA26) e dois down- genes regulados (HMGCS2 e SORBS2) como descrito anteriormente [14]. Um total de 2 ug de ARNm alíquota de cada amostra foram transcritas inversa para ADNc em cadeia simples utilizando uma vantagem para RT PCR kit (Clontech) e o cDNA foi sujeito a PCR durante 30 ciclos de amplificação. experiências de RT-PCR foram efectuadas com os seguintes conjuntos de iniciadores específicos para as sintetizados seis genes seleccionados ou com iniciadores específicos para o GAPDH como um controlo interno: cortactina (CTTN ou EMS1 -FR): 5′-TGAGTGTGT GTTCTTCCCCAAG-3 ‘, cortactina (CTTN ou EMS1) -RR: 5’-CACGTGACCTTCTGGA AAGACA-3′;DMRT-Fr:5′-GCGTGGTGTCCTGCCTGAAG-3′,DMRT-Rr:5′-GCCCCTTCTTGTCCTCGGTG-3′;MCM10-Fr:5′-GCAAAAATCCCCTGTAGAGA-3′, MCM10-Rr:5′-CCCCACAATTTGACCTCTAG-3′;SCYA26-Fr:5′-CACCTTGGAACTGCCACACG-3′,SCYA26-Rr:5′-TGGGTACAGACTTTCTTGCC-3′;HMGCS2-Fr:5′-CTGGGATGGTCGTTATGCCA-3′,HMGCS2-Rr:5′-TCGTCAAGGGTGAAGGGTCG-3′;SORBS2-Fr:5′-ACGTAGAGAAACTCACACCT-3′,SORBS2-Rr:5′-TCCTATCACTAGAATAGCTG-3′;GAPDH-Fr:5′-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3′,GAPDH-Rr:5′-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3′.

Tissue Microarrays (TMA) e imuno-histoquímica (IHQ)

Tissue microarrays (TMA), foram construídas com 231 pares de amostras primárias tumorais CICAc e combinados epitélio esofágico normal, tal como descrito anteriormente [15], [16]. Os espécimes CICAc variou de Ι grau estágio patológico para o grau III de pacientes na faixa etária de 40-80 anos. método do complexo biotina-estreptavidina-peroxidase padrão foi utilizada para a coloração IHC. Resumidamente, secções de TMA foram desparafinizadas, reidratadas e bloqueada pelo soro de cabra normal a 10% à temperatura ambiente durante 30 minutos. As secções foram então incubadas com anticorpo anti-cortactina (CTTN) (Abcam, Cambridge, Reino Unido) a uma diluição de 1:300 durante a noite a 4 ° C. Depois de lavada com TBS, as lâminas foram então incubadas com imunoglobulina de cabra biotinilada anti-coelho a uma concentração de 1:100 durante 30 min a 37 ° C. Três investigadores independentes avaliaram semiquantitativamente CTTN positividade sem conhecimento prévio dos dados clinicopatológicas. A expressão positiva da CTTN em tecidos normais e malignas CICAc foi principalmente um padrão citoplasma. Uma vez que a intensidade de coloração CTTN dentro de cada núcleo de tecido foi principalmente homogénea, a intensidade da coloração CTTN foi semiquantitativamente avaliada utilizando os seguintes critérios: positivo forte (marcado como 2+), de coloração castanho escuro em 50% de escamoso esofágico normal ou maligno células obscurecendo completamente citoplasma; fracamente positivo (1+), qualquer menor grau de coloração marrom apreciável no citoplasma da célula; ausente (marcado como 0), nenhuma mancha apreciável em células escamosas do esôfago normais ou malignas. Classificamos forte expressão positiva como CTTN superexpressão (+), expressão positiva e ausente fraco como CTTN não superexpressão (-). Os casos foram aceites como sendo fortemente positiva somente se os revisores definido de forma independente como tal.

Análise Estatística

A análise estatística foi feita com o padrão SPSS versão 13.0 (SPSS Inc). A associação entre a expressão CTTN em tecidos tumorais e características clínico-patológicas, tais como idade, sexo, diferenciação celular do tumor, linfonodos metástases e estágio patológico foi analisada utilizando o teste do qui-quadrado. sobrevivência (DSS) curvas de doenças específicas foram calculados a partir da data do diagnóstico até a data de morte relacionada com CICAc ou a última data de follow-up. As curvas de sobrevida foram avaliados pelo método de Kaplan-Meier e as diferenças de tempos de sobrevivência foram comparadas pelo teste de log-rank. riscos relativos de morte relacionada ao câncer associado com status de expressão CTTN e variáveis ​​clínico-patológicas, incluindo idade, sexo, diferenciação de células tumorais e linfonodos metástases foram estimados por análises univariadas. A análise multivariada de Cox foi realizada em todas as variáveis ​​que foram detectados a ser significativo no nível de univariada. As diferenças foram consideradas significativas quando o valor de P foi inferior a 0,05.

Resultados

Identificação de genes diferencialmente expressos entre CICAc tecidos e normais esofágico Epitélio

perfis de expressão gênica adjacentes de tumores agrupados (a partir de 10 ESCCs) e as suas contrapartes normais reunidas foram obtidos por análise de micromatriz Affymetrix usando U133 genoma humano mais 2,0 matrizes cobrindo 47.000 transcritos e variantes. Um total de 25,206 conjuntos de sondas (transcrição) estavam presentes em tecidos CICAc em relação aos seus controlos normais. Descobrimos que 1315 genes mostraram níveis de expressão de forma diferenciada. Entre estes genes, 549 sobre-regulado genes (41,7%, Tabela S1) e 766 genes regulada para baixo (58,3%, Tabela S2) foram detectados em tecidos tumorais em comparação com o perfil do epitélio esofágico normal de expressão, utilizando uma linha de corte arbitrário de razão de log de sinal de ≥1.5 ou ≤-1,5. Os papéis funcionais de 715 destes genes (340 regulado para cima e para baixo 375-regulado) são conhecidos. A função de 302 genes diferencialmente expressos (de 715, 42,24%) em tecidos de tumor foram associadas com o metabolismo celular (148 genes, Tabela S3), adesão celular (90 genes, Tabela S4), e a resposta imune (64 genes, Tabela S5 ).

Validação de genes selecionados usando PCR semiquantitativa (RT-PCR)

Para verificar os dados de microarranjos, os níveis de expressão de 6 genes selecionados aleatoriamente (4 genes up-regulamentados e 2 down- genes regulados) foram analisados ​​por RT-PCR, utilizando as mesmas amostras de ARN que foram utilizadas para a análise de micro-arranjo. Os padrões de expressão de genes seleccionados aleatoriamente 6 em tecidos de tumores detectados por RT-PCR, excepto SORBS2, eram completamente consistentes com aqueles a partir dos resultados de microarray de cDNA (Figura 1A).

(A) semiquantitativa de transcrição reversa-PCR ( RT-PCR) foi aplicado para comparar o status de CTTN, DMRT2, Mcm10, SCYA26, HMGCS2 e SORBS2 expressão entre 8 pares de amostras primárias tumorais CICAc e combinados epitélio esofágico normal. GAPDH foi usada como um controlo interno. (B) representativas da expressão CTNN num par de CICAc (à direita) e tecido normal adjacente (esquerda) detectado por imunocoloração com anticorpo anti-CTNN (castanho). A lâmina foi contrastado com hematoxilina (ampliação original: × superior a 100 e inferior × 200).

Avaliação de CTTN como um marcador de prognóstico para CICAc

Para avaliar a possibilidade do candidato overexpressed genes como biomarcadores para ESCC, realizou-se coloração IHC com anticorpos para CTTN em microarrays de tecido contendo 231 pares de tecidos tumorais CICAc e seus epitélios esofágicas normais adjacentes. resultados IHC informativos foram obtidos de 198 casos CICAc. amostras não informativas incluiu amostras perdidas, inapropriadamente amostras coradas e amostras com muito poucas células; tal não foram utilizados como dados válidos. Observou-se a expressão diferencial de citoplasma CTTN entre os tumores primários e as suas CICAc tecidos normais correspondentes (Figura 1B). A percentagem de CTTN sobre-expressão em tecidos tumorais CICAc informativo foi até 63,6% (126/198), que foi significativamente mais elevado do que em epitélios esofágico normal (26,8%, 53/198,

P

0,001, teste de Wilcoxon, Figura 1B e Tabela 1). Dos 198 casos informativos analisados, foi detectada a correlação entre o estado de expressão CTTN e características clínico-patológicas de ESCCs. Os resultados mostraram que CTTN superexpressão foi significativamente associada com metástases em linfonodos (P = 0,000) e estágio patológico (P = 0,000). Nenhuma diferença significativa foi detectada em idade (P = 1,000), sexo (P = 0,883) e diferenciação de células tumorais (P = 0,619, Tabela 2). Kaplan-Meier análise de sobrevivência mostrou que pacientes com CTTN (+) tumores (n = 126) têm taxa de sobrevivência significativamente pior do que aqueles com CTTN (-) tumores (n = 72) (P 0,001, log-rank: 19,517, Figura 2A ). Enquanto isso, a análise de sobrevivência de Kaplan-Meier também mostrou que os pacientes com estágio avançado patológica (IIB + III; n = 85) têm uma taxa significativamente pior sobrevivência do que aqueles com estágio patológico precoce (I + II; n = 113) (P = 0,000, log -rank: 19,390, Figura 2B). Além disso, examinamos o valor prognóstico da expressão CTTN em pacientes CICAc com diferentes estágios patológicos. Pacientes com CTTN superexpressão teve significativamente menor taxa de sobrevivência específica da doença do que aqueles sem CTTN sobreexpressão em ambos I + IIA subgrupo (n = 113, p = 0,001, Figura 3A) e IIB + III subgrupo (n = 85, p = 0,027, Fig 3B), indicando que CTTN poderia ser um marcador de prognóstico valioso para CICAc. Além disso, a análise univariada foi utilizada para avaliar associações entre prognóstico e vários fatores, incluindo idade, sexo, diferenciação celular do tumor, linfonodos metástases e estado CTTN de tumores CICAc. O resultado mostrou que metástases em linfonodos (P = 0,000), a diferenciação de células tumorais (P = 0,001) e superexpressão de CTTN em tumores (P = 0,000) foram fatores prognósticos negativos significativos para os pacientes CICAc (Tabela 3). Entre esses parâmetros, multivariada usando o modelo de riscos proporcionais de Cox revelou que a superexpressão de CTTN em tumores CICAc (P = 0,001), LN metástase (P = 0,003) e diferenciação de células tumorais (P = 0,000) foram fatores prognósticos independentes para ESCC, respectivamente (Tabela 3). Coletivamente, os nossos resultados mostram que a sobre-expressão de CTTN em tumores CICAc prevê independentemente um mau prognóstico para pacientes com ESCC.

(A) Gráficos de Kaplan-Meier para a taxa de sobrevivência Disease-specific (DSS) de pacientes com CICAc ( n = 126, linha verde) ou sem (n = 72, linha azul) CTNN superexpressão. (B) Gráficos de Kaplan-Meier para a taxa DSS dos pacientes CICAc com o estágio patológico I + II (n = 113, linha azul) ou IIB + III (n = 85, linha verde).

Discussão

carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) é um câncer muito agressivo, sendo a quarta principal causa de morte por câncer na China [17]. Devido à falta de técnicas de diagnósticos confiáveis ​​e sintomas específicos para a detecção fase inicial, a maioria dos pacientes têm localmente avançado de câncer disseminado no momento do diagnóstico, quando eles engolem com dificuldade ou se sentir desconfortável. Vários marcadores tumorais, tais como o antigénio carcinoembrionário (CEA), antigénio de carcinoma de células escamosas (SCC) e citoqueratina 19-fragmento (Cyfra 21-1), são utilizados no diagnóstico clínico, bem como no acompanhamento do paciente. O EGFR é expresso em 33,3% dos carcinomas de células escamosas esofágicas (ESCCs), Lapatinib pode ter um efeito terapêutico significativo contra CICAc-expressando EGFR por inibição do crescimento de células e aumentar CICAc Herceptin- e ADCC mediada Cetuximab [18]. Na verdade, nós não descobrimos qualquer marcador tumoral útil para a detecção de ESCC na fase precoce e terapias moleculares orientadas eficazes. Uma melhor compreensão do mecanismo molecular envolvido na ocorrência e desenvolvimento de ESCC pode levar a um tratamento mais eficaz para os pacientes CICAc e encontrar marcadores eficazes para a detecção precoce e uma melhor seleção de modalidades de tratamento adjuvante para pacientes CICAc apropriadas. . Determing diferenças na expressão genética entre os tumores e tecidos normais CICAc é essencial para entender melhor esse mecanismo molecular

Análise de perfis de expressão por meio de cDNA microarray é agora amplamente utilizados em várias células de câncer [19] – [21] . Uma nova característica do presente estudo é que usamos um microarray contendo um número muito grande de sondas para determinar a expressão diferencial de genes entre os tecidos CICAc e combinados epitélio esofágico normal matriz expressão. O resultado mostrou que 1315 genes foram expressas diferencialmente no CICAc. Entre estes genes, 549 foram up-regulada e 766 foram regulados negativamente. Dos 715 genes expressos diferencialmente com função conhecida, 42,24% foram associados com o metabolismo celular, a adesão celular e a resposta imunitária. Em concordância com relatórios anteriores, identificamos genes, como fascina (SNL), EGFR e ECRG4, eram conhecidos por serem expressão diferencial em tecidos CICAc e epitélio esofágico normal de correspondência [18], [22] – [24]. Além disso, também descobrimos vários genes relacionados com CICAc que não tenham sido previamente reportados. Alguns dos genes expressos diferencialmente podem ser úteis como marcadores de diagnóstico, prognóstico ou marcadores novos alvos terapêuticos. Neste estudo, foram selecionados um CTTN gene regulado para cima e examinou sua (cortactina) status de expressão que codifica a proteína por análise de tissue microarray. Cortactina tem sido descrita como uma proteína de andaimes associados-actina, que se liga e activa a proteína relacionada com a actina 2/3 complexo, e emergiu como um elemento central de ligação com as vias de sinalização citoesqueleto reestruturação [25], [26]. A remodelação do citoesqueleto de actina tem efeitos sobre a migração celular, motilidade, e adesão, bem como na invasão tumoral e metástase [27]. A sobre-expressão de cortactina está associada com o aumento da capacidade de invasão de células de carcinoma hepatocelular [28].

cortactina é sobre-expresso em muitos tipos de cancros humanos, incluindo a cabeça e pescoço e carcinomas escamosos colorectal, gástrico, hepatocelular, da mama e do ovário [ ,,,0],26], [29]. Relatórios anteriores demonstraram que uma correlação significativa entre CTTN superexpressão e mau prognóstico em osteosarcoma [30]. Neste estudo, avaliou-se o estado de cortactina expressão por meio de análise de alto rendimento de TMA. Nosso estudo tem mostrado o valor potencial de CTTN na previsão de sobrevida do paciente em subgrupos com estágio patológico inicial ou avançado, sugerindo que a superexpressão de CTTN pode ser usado como um fator independente para previsão de prognóstico da ESCC. No entanto, precisa de mais trabalho a ser realizado para avaliar melhor o gene CTTN para aplicações clínicas para CICAc pacientes.

Em resumo, a nossa análise cDNA microarray detectado perfis de expressão gênica diferencial entre tecidos CICAc e epitélio esofágico normal, e, assim, fornecidos valiosa informações para um estudo mais aprofundado da base molecular subjacente à tumorigênese de câncer de esôfago. Uma melhor compreensão dos perfis de ESCC de expressão de genes pode levar a uma gestão mais eficaz da ESCC por indicadores prognósticos precisos e terapia personalizada eficaz.

Informações de Apoio

Figura S1.

doi: 10.1371 /journal.pone.0088918.s001

(TIF)

Tabela S1. genes

Up-regualted (≥1.5 vezes) em dez casos de carcinoma epidermóide de esôfago

doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s002

(DOC)

Tabela S2.

genes (≥1.5 vezes) regulada para baixo em dez casos de carcinoma epidermóide de esôfago

doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s003

(DOC)

Tabela S3. : Lista de 148 genes associados com o metabolismo celular

doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s004

(DOC)

Tabela S4. : Lista de 90 genes associados com a adesão celular

doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s005

(DOC)

Tabela S5. : Lista de 64 genes associados à resposta imune

doi:. 10.1371 /journal.pone.0088918.s006

(DOC)