Sumário

Tem sido considerado que o câncer pancreático (PC) é um tumor maligno com risco de vida. Assim, muita atenção tem sido dada para os fatores, especialmente moléculas relativos, preditivos para o prognóstico de PC. No entanto, a expressão de c-fos em PC foi menos investigados. Além disso, sua associação com variáveis ​​clínico-patológicas e prognóstico permanece desconhecido. No presente estudo, a expressão de c-fos foi detectada por coloração imuno-histoquímica com base em microarrays de tecido de cancro e tecidos adjacentes a partir de 333 pacientes com PC. Os resultados de coloração foram correlacionados com parâmetros clínico-patológicas e sobrevida global. Além disso, também foi avaliada significado prognóstico de c-fos em subconjuntos de PC. Mostrou-se que a baixa expressão de c-fos foi mais frequentemente em câncer do que em tecidos adjacentes do PC (

P Art 0,001). Além disso, a alta expressão de c-fos canceroso foi significativamente associada com local do tumor e estágio T, enquanto invasão peri-neural era de uma relevância significativa limítrofe. Teste log-rank revelou que a alta expressão de c-fos em tecidos de câncer era um marcador significativo da sobrevivência global pobres, acompanhado de algumas variáveis ​​clínico-patológicas convencionais, tais como sexo, grau, invasão peri-neural, estádios T e N. Mais importante ainda, a expressão de c-fos canceroso foi identificado como um prognosticador independente na análise multivariada. Finalmente, a implicação prognóstico da expressão de c-fos foi comprovado em quatro subgrupos de pacientes com PC. Estes dados sugerem que a expressão de c-fos foi de relacionamento com a progressão e prognóstico sombrio de PC

citação:. Guo J-C, Li J., Zhao Y-P, Zhou L, Cui Q-C, Zhou W-X, et al. (2015) A expressão de c-fos foi associado às características clínico-patológicas e prognóstico no câncer de pâncreas. PLoS ONE 10 (3): e0120332. doi: 10.1371 /journal.pone.0120332

Editor do Academic: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, Estados Unidos

Recebido: 17 de outubro de 2014; Aceito: 30 de janeiro de 2015; Publicação: 19 de março de 2015

Direitos de autor: © 2015 Guo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela Research Tecnologia National High and Development Program (Programa 863, 2014AA020609, https://program.most.gov.cn/), China. O financiador não teve nenhum papel no desenho do estudo, recolha e análise de dados, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de pâncreas (PC) é um dos mais neoplasias sólidas com risco de vida, porque este tipo de malignidade carrega a mortalidade quase igual à sua incidência [1]. Foi recentemente sintetizadas que a melhoria no prognóstico de longo prazo de PC, embora a ressecção cirúrgica foi cada vez mais aplicado, não foi alcançado em duas décadas [2]. Portanto, a exploração de marcadores prognósticos de PC tem sido o hotspot de estudo. Até agora, muitos outros clínicos e patológicos, como o status dos linfonodos, invasão neural, os níveis de marcadores tumorais e margem de ressecção, foram identificados [3-8]. Por outro lado, os impactos de moléculas envolvidas na patogênese e progressão tumoral no prognóstico de PC foram gradualmente valorizada e recentemente revisto [9,10]. Naturalmente, mais prognosticadores moleculares necessitam de ser descoberto

Tem sido bem conhecido que c-fos (o homólogo humano do oncogene retroviral v-Fos), um dos principais componentes da proteína activadora (AP). – um complexo, medeia o crescimento do cancro, angiogénese, invasão e metástase, regulando expressões de genes a jusante [11]. A descoberta de que a expressão de c-fos foi significativamente associados com recorrência, metástase e mau prognóstico no câncer de pulmão escamosas, câncer de mama e osteossarcoma desde seu potencial como um proto-oncogene [12-14]. No entanto, outros dados sugeriram que os pacientes com elevada expressão de c-fos realizada sobrevivência favorável em colorrectal, do ovário e cancros gástricos [15-18]. Assim, a expressão de c-fos e os seus efeitos biológicos podem ser de tecido do tipo específico. No PC, bem diferentes taxas positivas de c-fos e suas associações negativas com fenótipos malignas, tais como metástases em linfonodos e multirresistência, foram previamente relatados [19-22]. No entanto, seus significados clínico-patológicas e prognósticos em PC permanecem desconhecidos.

No presente estudo, os autores destinadas a abordar as questões, com base em uma grande coorte chinesa com PC.

Materiais e Métodos

Os pacientes

A coorte do estudo consistiu em 333 pacientes com PC, incluindo 206 machos e 127 fêmeas. As idades variaram 34-85 (mediana: 60) anos. critérios de seleção dos pacientes: (1) adenocarcinoma histologicamente comprovada; (2) as amostras cirurgicamente ressecados disponível; (3) Os dados clínico-patológicas disponível. A Tabela 1 resume as características clinicopatológicas dos pacientes. Foram utilizados os cancerosas e não-cancerosas tecidos embebidos em parafina fixadas em formalina emparelhados para os pacientes. foi obtido o consentimento informado por escrito de todos os pacientes. O projeto (incluindo o seu processo de aprovação) foi aprovado pela Comissão de Pequim Hospital Union Medical College de Ética.

Construção de Tissue Microarray (TMA)

construção de microsséries de tecido foi realizada de acordo com a métodos e normas mesmos com os previamente relatados [23]

imuno coloração

Um anticorpo policlonal anti-humana de coelho para c-fos (SC-52, diluição:. 1: 50, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) e um estojo de imunocoloração de dois passos (EnVision

TM + kit, Dako, Dinamarca) foram usadas para a coloração. O péptido de bloqueio (Santa Cruz) foi adoptado para validação especificidade do anticorpo primário. As lâminas foram coradas de acordo com o método que foi aplicado anteriormente [23]. soro de coelho não imune para a mesma diluição foi adotado como o controle negativo.

Avaliação da coloração Resultados

Dois patologistas independentes que foram cegos aos dados clínico-patológicas e sobrevivência (CCQ e WXZ) avaliou resultados da coloração. A coloração nuclear e /ou citoplasma castanho foi definida como o sinal positivo. De acordo com anteriores sugeriram [24], a proporção de células positivas foi dividida em três tipos (0-10%, grau 1; 10% ≥50, grau 2; 50%, grau 3). Por outro lado, a intensidade da coloração também foi marcado em três grupos (tênues, pontuação 1; moderados, marcou 2; intensiva, marcar 3). O grau final foi obtida através da multiplicação do grau de relação de contagem positivo e intensidade (mostrada na Tabela 1), e separado em baixo (nota final 6). E expressões elevadas (classificação final ≥6)

sequên- up

Siga-up (mediana: 14 meses; intervalo: 2 a 87 meses) foi realizada em 229 pacientes, principalmente por meio de ambulatório, telefone e e-mail. Durante o prazo de acompanhamento, 170 pacientes morreram.

Análise Estatística

O teste de McNemar e análise de correlação de Pearson foram utilizados para comparar a expressão de c-fos entre câncer e tecidos não-cancerosas adjacentes, e para mostrar a correlação entre eles. A associação entre a expressão de c-fos e características clínico-patológicas foi revelado pelo teste do qui-quadrado. método e teste log-rank de Kaplan-Meier foram aplicados para estimar a sobrevida global e suas diferenças. regressão multivariada Cox (Proporcional modelo de risco) análise foi realizada para identificação de fatores prognósticos independentes. Todas as análises foram acabados à estatística SPSS11.5 pacote de software (SPSS Inc, Chicago, IL). A

P

valor inferior a 0,05 foi definido como estatisticamente significativo.

Resultados

A expressão de c-fos e sua associação com características clínico-patológicas em PC

foi mostrado que o sinal positivo localizado principalmente no núcleo da célula, e sendo também visto no citoplasma (Fig. 1). Após o tratamento com o péptido de bloqueio, a conclusão de que o sinal positivo desapareceu (S1 Fig.) Validou a especificidade do anticorpo primário. expressões baixas e altas foram encontradas em tecidos de câncer entre 167 e 166 pacientes com PC e tecidos não-cancerosas adjacentes de 63 e 270 indivíduos. Baixa expressão de c-fos foi mais comum em cancro do que em tecidos adjacentes (

P Art 0,001, teste de McNemar). Houve correlação significativa entre a expressão de c-fos em tecidos de câncer e que, em tecidos adjacentes não-cancerosas (

P Art 0,001, análise de correlação de Pearson). O teste do qui-quadrado mostrou que a alta expressão de c-fos canceroso foi significativamente frequente em não-cabeça e tumores T3, em comparação com a cabeça e os T1-2, respectivamente (Tabela 2,

P

= 0,013 e 0,017). Além disso, a expressão de c-fos em tecidos de câncer foi de relação marginalmente significativa com a invasão perineural (Tabela 2,

P

= 0,069). Expressão de c-fos em tecidos adjacentes não estava relacionado com parâmetros clinicopatológicas incluído (dados não mostrados).

(a) Expressão alta em tecido de cancro (ampliação original x 200). (B) a expressão alta no tecido não-câncer adjacente (aumento original x 200).

significado prognóstico de c-fos na coorte inteira do PC

A análise univariada em toda a coorte de PC mostrou que a elevada expressão de c-fos canceroso previu encurtado sobrevivência global (

P

= 0,020; a Fig. 2 e Tabela 3), em adição ao sexo, grau histológico, perineural, T e N estágios (

P Art 0,05; Tabela 3). regressão multivariada Cox expressão de c-fos definido como um dos indicadores prognósticos independentes para a sobrevida global de PC (

P

= 0,022; Tabela 3).

Influências de c- Expressão fos na sobrevida global em subconjuntos de PC

Uma vez que o presente estudo avaliou oito variáveis ​​clínico-patológicas, os pacientes foram divididos em dezesseis subconjuntos. A análise univariada definida expressão de c-fos canceroso como um preditor significativo para a sobrevida global em quatro queridos, ou seja, pacientes do sexo masculino, tumores ≤4cm, tumores N0 e aqueles sem invasão perineural (

P Art 0,05; Fig. 3) . A análise de regressão Cox estabelecido que a expressão de c-fos em tecidos de câncer foi de implicação prognóstico independente nos machos, tumores N0 e aqueles sem invasão perineural (

P Art 0,05; Tabela 4).

( A) pacientes do sexo masculino (

P

= 0,006). (B) Os tumores ≤4cm (

P

= 0,026). (C) Os tumores sem peri-neural invasão (

P

= 0,039). (D) tumores N0 (

P

= 0,008). N, linfonodo.

Discussão

Como um membro importante da família fos de fatores de transcrição, c-fos foi demonstrado para ser um regulador chave da proliferação, diferenciação , angiogénese, invasão e metástase de câncer, através de mecanismos relacionados com o AP-1 [11]. No entanto, é interessante notar que c-fos desempenha diferentes, até mesmo papéis opostos em diferentes tipos de câncer. Nos cancros da mama e da bexiga, assim como células de glioma [25-28], c-fos parece ter propriedades pró-oncogénicas, ao contrário do cancro do ovário [29]. Embora em um mesmo tipo de malignidade, PC, os resultados relativos a expressão e fenótipos de c-fos continuam a ser inconsistente. Utilizando imunohistoquímica para alguns indivíduos, Lee et al. [19] verificaram que o c-fos foi altamente expressa em tecidos de PC, mas apenas fraca expressão foi observada em um pequeno número de pacientes envolvidos em outro estudo [20]. Além disso, as descobertas de que c-fos foi regulada para baixo em PC com linfonodo metástases e o aumento de c-fos induzida por expressão da resistência a múltiplos fármacos 1 (MDR1) em células PC indicar as funções complexas da molécula no PC [21,22]. Outras investigações que mostraram que o c-fos contribui para a mobilidade celular [30] e as funções como um dos alvos de alguns genes supressores de tumor [31,32], suportar o seu potencial oncogénico em PC. No presente inquérito, a expressão de c-fos foi detectado pela primeira vez há mais de 300 pacientes com PC. É inesperado que a baixa expressão de c-fos é mais frequente em câncer do que em tecidos não-cancerosas adjacentes (teste de McNemar). Em seguida, as associações positivas /potencialmente positivas entre a expressão de c-fos e de alta fase posterior T, bem como presença de invasão perineural foram mostradas. Os resultados indicam que o c-fos podem desempenhar papéis cruciais tanto na iniciação e progressão do PC. trabalho anterior constatou que c-fos induzida tumorigénese mediada por inflamação [33]. Além disso, pancreatite crónica (CP) foi bem conhecido como um factor etiológico significativo de PC [34]. Portanto, se c-fos desempenha um papel importante no processo da CP o PC pode ser do interesse. Foi sugerido que o K-ras, um gene mutado crucial tanto PB e PC, activado Raf /MEK /extracelular quinase regulada por sinal (ERK) via através de uma cascata complexa [34], enquanto que a ERK, uma espécie de proteína activada por mitogénio quinase (MAPK), foi envolvido na activação de c-fos [35]. Assim, a alta expressão de c-fos em tecidos adjacentes não-cancerosas no estudo pode fornecer uma pista preliminar de seus impactos sobre a conversão de inflamação para a malignidade no pâncreas. Por outro lado, a expressão de c-fos canceroso revelou ser significativamente e marginalmente significativamente associado com o estágio T e perineural, indicando que este factor de transcrição pode ser um promotor de progressão PC. Tomados em conjunto, os nossos dados suportada que c-fos serve como um proto-oncogene, no decurso da transformação maligna para a progressão no PC, com uma diferente anterior mostrando a sub-regulação de c-fos em PC com linfonodo metástase [21]. No futuro, explorações detalhadas de fenótipos e mecanismos relativos vale a pena ser feito.

Foi demonstrado que c-fos foi ligada ao prognóstico ruim ou boa em muitos tipos de cancro [12-18]. No entanto, o seu impacto sobre os resultados de PC não tenha sido elucidado. Aqui, nós relatamos que a alta expressão de c-fos em tecidos de câncer foi associado à sobrevida global insatisfatório em ambas as análises univariada e multivariada, apresentando seu poder como um forte preditor de prognóstico sombrio no PC. Os resultados que c-fos foi de significância prognóstica independente, em alguns subconjuntos de PC reforçar o seu papel prognóstico. Estes resultados, apoiados pela relação positiva entre a expressão de c-fos e fenótipos malignas do PC estabelecido no presente estudo, são consistentes com aqueles derivados de cancros osteosarcoma, pulmão e mama [12-14]. Sem dúvida, esses resultados da análise de sobrevivência indicam também a função de c-fos como um proto-oncogene.

Em conclusão, nossos dados demonstram que a expressão de c-fos está relacionada com a progressão e prognóstico sombrio de PC. Assim, esta proteína pode ser um fabricante molecular novela de PC.

Informações de Apoio

S1 Fig. validação especificidade do anticorpo primário contra o c-fos em cancro do pâncreas.

(A) com bloqueio de péptido (ampliação original x 200). (B) sem bloquear peptídeo (aumento original x 200)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0120332.s001

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