Abstract

Fundo

Anterior gradiente homólogo 2 (AGR2) é uma proteína funcional com papéis críticos em uma variada gama de sistemas biológicos, incluindo o desenvolvimento do tecido vertebrado, respostas inflamatórias lesão tecidual, e progressão do câncer. Os estudos clínicos demonstraram que a proteína AGR2 é sobre-expresso em uma ampla gama de cancros humanos, incluindo os carcinomas do esófago, pâncreas, mama, próstata, e pulmão, tornando a proteína como um biomarcador potencial do cancro. No entanto, as funções bioquímicas gerais de AGR2 em células humanas permanecem indefinidos, e os mecanismos de sinalização que conduzem AGR2 para inibir p53 ainda não estão claramente ilustrado. Portanto, é de grande interesse para o desenvolvimento de sondas moleculares que reconhecem especificamente a AGR2 para a detecção e para a elucidação do mecanismo molecular associado a AGR2.

Metodologia /principais conclusões

Através de um grânulo com base em e fluir tecnologia SELEX citometria monitorados, nós identificamos um grupo de aptâmeros de DNA que podem se ligar especificamente a AGR2 com

K

d

valores no intervalo nanomolar após 14 rodadas de seleções. Aptâmero C14B foi escolhida para estudar ainda mais, devido à sua elevada afinidade de ligação e especificidade. O C14B1 optimizada e encurtada tem características especiais ricos em G, e a região rico em G do presente motivo de ligação foi ainda caracterizada para revelar uma intramolecular paralelo G-quadruplex por espectroscopia de CD e espectroscopia de UV. As nossas experiências confirmou que a estabilidade da estrutura G-quadruplex era fortemente dependente da natureza dos iões monovalentes e a formação de estrutura G-quadruplex também era importante para a capacidade de ligação de C14B1 para o alvo. Além disso, criamos uma espécie de sonda alostérico molécula de beacon (AMB) para a detecção seletiva e sensível da AGR2.

Conclusão /Significado

novas sondas de aptâmeros Neste trabalho, temos desenvolvido para específica o reconhecimento de AGR2. Estudo estrutural identificaram que o motivo de ligação de aptâmero é uma estrutura G-quadruplex paralelo intramolecular e a sua estrutura e afinidade de ligação são fortemente dependentes da natureza do ião monovalente. Além disso, com a nossa concepção de AGR2-AMB, AGR2 poderia ser sensível e seletiva detectado. Esta sonda aptâmero tem um grande potencial para servir como uma ferramenta útil para o diagnóstico precoce e prognóstico do cancro e para a investigação fundamental para elucidar as funções bioquímicas do AGR2

Citation:. Wu J, Wang C, Li X, Song Y , Wang W, Li C, et ai. (2012) Identificação, caracterização e aplicação de uma proteína G-Quadruplex Estruturado DNA Aptamer contra o cancro Biomarcador Anterior Gradiente homólogo 2. PLoS ONE 7 (9): e46393. doi: 10.1371 /journal.pone.0046393

editor: Pierre Busson, Instituto de Cancerologia Gustave Roussy, França