Abstract

galectinas são proteínas que se ligam açúcares β-galactósido e fornecer um novo tipo de potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos no câncer. Galectina-1, -3 e -9 tornaram-se o foco de diferentes grupos de pesquisa, mas a sua expressão e função no cancro do colo do útero ainda é incerto. O objetivo deste estudo foi determinar o fenótipo da galectina-1, -3 e -9 células e a associação com parâmetros clínico-patológicos em câncer cervical expressar. expressão da galectina foi marcado em células tumorais, epitélio tumor infiltrando células imunes e células estromais em câncer cervical escamosa (n = 160). Correlações com parâmetros clínico-patológicos e sobrevida foram estudados de acordo com as recomendações comentário. Nós adicionalmente investigado se as galectinas foram expressos por células tumorais, fibroblastos, macrófagos e células T. A galectina-1 e -9 foram ambas expressas pelas células tumorais em 11% das amostras, enquanto que 84%, expresso de galectina-3. Forte expressão da galectina-1 pelas células tumorais foi um preditor independente de pior sobrevida (hazard ratio: 8,02, p = 0,001) e correlacionada com o aumento da invasão tumoral (p = 0,032) e receber radioterapia pós-operatória (p = 0,020). Fraca e positiva de células tumorais expressão de galectina-3 foram correlacionados com o aumento e diminuição da invasão tumoral, respectivamente (p = 0,012). expressão de células de tumor da galectina-9 mostrou uma tendência de melhora da sobrevida (p = 0,087). O tipo predominante imune celular que expressa a galectina-1, -3 e -9 foram CD163

+ macrófagos. A galectina-1 e -3 foram expressas por uma população pequena de células T. A galectina-1 foi expresso principalmente por fibroblastos do estroma tumoral. Para concluir, enquanto que a expressão de células de tumor de galectina-9 parece representar uma resposta benéfica, galectina-1 expressão pode ser utilizado como um marcador para um tratamento mais agressivo anti-cancro

citação:. Punt S, Thijssen VL , Vrolijk J, de Kroon CD, Gorter a, Jordanova ES (2015) galectina-1, -3 e -9 Expressão e relevância clínica em escamosas câncer cervical. PLoS ONE 10 (6): e0129119. doi: 10.1371 /journal.pone.0129119

Editor do Academic: Pierre Busson, Gustave Roussy, França |

Recebido: 06 de fevereiro de 2015; Aceito: 04 de maio de 2015; Publicação: 12 de junho de 2015

Direitos de autor: © 2015 Punt et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. a Sociedade do Câncer Holandês (https://www.kwf.nl) SP apoiado financeiramente (conceder UL2010-4801) e VLT (concessão VU2009-4358) . Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer cervical é causado por infecção de alto risco papilomavírus humano (HPV) [1]. A taxa de mortalidade diminuiu em 80% nos 20

th século, principalmente pela introdução do rastreio para a prevenção e detecção precoce do câncer de colo do útero [2]. Apesar deste progresso, o cancro do colo do útero ainda é a segunda principal causa de morte por câncer em mulheres jovens em todo o mundo. Mais pesquisas são, assim, obrigados a escolher biomarcadores prognósticos e alvos terapêuticos. Potenciais novos alvos são galectinas, proteínas que se ligam glicanos contendo-galactósido beta através de um ou mais domínio de reconhecimento de hidratos de carbono (CRD) [3]. Nos últimos anos tornou-se evidente que as galectinas desempenhar um papel importante na progressão do tumor através da regulação da homeostase celular imune [4], a metástase do tumor [5], e angiogénese tumoral [6].

Os tipos mais estudadas para galectina agora são galectina-1, -3 e -9. A galectina-1 é composto por um CRD homodimerizing que homodimerizes e é expresso na maior parte dos órgãos e por macrófagos, células T e [4] B. A galectina-1 aumenta o crescimento celular e a motilidade e a liga as células à matriz extracelular (ECM), bem como a outras células [7]. No microambiente tumoral, galectina-1 induz a angiogénese [4,8] e pode facilitar a metástase através da ligação de células tumorais para células endoteliais. Funcionando como um ligando do receptor de células T fraco, a apoptose é induzida em células T activadas [4,7]. A galectina-3 é um galectina quimérica contendo um CRD e um domínio não-CRD N-terminal. A galectina-3 é expresso pelas células macrófagos, fibroblastos, células T activadas, eosinófilos, epiteliais e tumorais, induzir sinalização anti-apoptótica [4]. Expressão está associada com um fenótipo regulação e ECM adesão diferenciada [9]. Tal como a galectina-1, galectina-3 também tem sido associada ao aumento da angiogénese [10] e metástase [11]. Extracelular de galectina-3 pode ligar-se células T, neutrófilos e macrófagos [9]. Em células T, a expressão de galectina-3 foi mostrado para promover a sobrevivência, quando expressa intracelularmente, mas para induzir a apoptose quando presente extracelularmente [12]. A galectina-9 contém dois CRD ligados por um péptido de ligação de comprimento variável. A galectina-9 pode ser expresso por células epiteliais, bem como células imunitárias, incluindo células T e de neutrófilos [13]. Os actos de proteína como um quimioatractor de eosinófilos enquanto que a expressão intracelular tem sido relatado para induzir a apoptose em células T activadas, potencialmente via T imunoglobulina célula mucina-3 (TIM-3), que conduz à inibição de auxiliar T 1 (Th1) e células Th17 e estimulação de células T reguladoras (Tregs) [14,15]. A galectina-9 de expressão também tem sido relatada em células endoteliais, mas o papel desta proteína na angiogénese parece ser limitado [16].

O envolvimento das galectinas em diferentes processos de progressão tumoral é suportada por relatórios que alteraram galectina expressão tem valor de diagnóstico ou prognóstico em diferentes tipos de câncer, incluindo ovário, próstata, mama, cabeça e pescoço e câncer de pulmão não-pequenas células [17-26]. Em pacientes com câncer cervical escamosas que receberam a terapia de radiação, um estudo recente relatou que a expressão da galectina-1 pelo tumor foi um preditor independente de recorrência local e pobres sobrevivência [27]. A expressão de galectina-1 no estroma de cancro cervical também tem sido correlacionada com o grau mais elevado histopatológico [28] e nó de linfa metástase [29]. Informações sobre a galectina-3 e galectina-9 expressão no cancro do colo do útero é limitado. Lee et al descreveram uma relação inversa entre a galectina-3 [30] e do grau do tumor, enquanto que a galectina-9 expressão tem sido mostrado para ser positivamente correlacionada com o grau de diferenciação tumoral no cancro cervical escamoso [31].

Para obter melhor visão no papel de galectinas no cancro do colo do útero, o objetivo deste estudo foi determinar se a expressão da galectina-1, -3 e -9 está associada com a sobrevivência em uma coorte escamoso cervical cancer (n = 160). A expressão dos diferentes tipos de galectinas por células tumorais e por epitélio e células do estroma do tumor infiltrating foram marcados. Nós também investigou quais estromais células associados ao câncer (CAS) (fibroblastos, macrófagos e células T) expressa nestes galectinas.

Materiais e Métodos

Material Paciente

formalina-fixo , (FFPE) amostras de cancro do colo do útero escamosas embebidos em parafina obtido de todos os pacientes submetidos a tratamento cirúrgico primário para o cancro do colo do útero entre 1985 e 2005, com material suficiente disponível para análise como descrito anteriormente [32], foram recuperados dos arquivos do Departamento de Patologia , Leiden University Medical Center (n = 160). Nenhum dos pacientes havia recebido terapia antineoplásica pré-operatório. livre de doença e tempo de sobrevida específica da doença foram definidos como o período de tempo em meses a partir da data da cirurgia até a data de recaída e mortalidade por câncer do colo do útero, respectivamente. Os pacientes que morreram de outras causas foram censurados na análise de sobrevivência. Paciente e tumorais características estão listadas na Tabela S1. As amostras dos pacientes foram tratados de acordo com as diretrizes éticas médicos descritos no Código de Conduta para uso secundário adequada do tecido humano da Federação Holandesa de Biomédicas Sociedades Científicas. Os pacientes recebem informações sobre o uso secundário do tecido da amostra para uso em diagnóstico e pode opor ativamente para uso secundário. De acordo com as orientações, todo o material humano utilizado neste estudo foi anónimos. Por causa da anonimização, pesquisa retrospectiva não requer aprovação ética do Conselho de Revisão Institucional e consentimento individual não é necessária.

colorações de imunofluorescência

coloração de imunofluorescência Triplo foi realizada em 4 mm de espessura FFPE de todas as amostras. Após recuperação de antigénio utilizando um tampão de Tris-EDTA (Tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 9,0), anticorpo policlonal de coelho anti-galectina-1 (1: 1000, ab25138, RRID: AB 2.136.615, muito GR127498-2, Abcam, Cambridge, Reino Unido) , anticorpo monoclonal de rato anti-galectina-3 (1:50, clone M3 /38, RRID: AB 1.134.237, muito B160878, BioLegend, Londres, Reino Unido) e de cabra policlonal anti-galectina-9 (1: 200, AF2045, RRID: AB 2137232, muito KNI0112011, R D Systems, Abingdon, UK) diluído em 1% w /v de albumina de soro bovino (BSA) em salino tamponado com fosfato (PBS) foram incubadas à temperatura ambiente durante a noite. Alexa Fluor rotulado de burro anti-coelho-A647 (A31573, RRID: AB 10.561.706, lote 1069817), de burro anti-rato-A488 (A21208, RRID: AB 10.562.718, lote 1081955) e de burro anti-cabra-A546 (A11056, RRID: AB 10584485, lote 997810; todos policlonal, 1: 200, Invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, EUA) foram incubadas à temperatura ambiente durante uma hora. As lâminas foram montadas com Mowiol meio de montagem [33].

colorações de imunofluorescência duplas foram realizadas em três amostras com média acima e três amostras com abaixo expressão estromal média de galectina-1, -3 e -9. Rabbit anti-galectina-1 e de rato anti-galectina-3 foram combinados com IgG1 de ratinho anti-CD163 (1: 400, clone 10d6, RRID: AB 563510, lote 6002913, Leica Microsystems, Newcastle, Reino Unido) e IgG1 de rato anti-CD3 (1:25, clone F7.2.38, Dako, Glostrup, Dinamarca), seguido por Alexa Fluor marcado cabra anti-coelho-A488 (A11008, RRID: AB 10.563.748, lote 828814) ou de cabra-anti-rato-A488 (A11006, RRID: AB 10561520, lote 421559) e cabra anti-IgG1 de ratinho-A546 (A21123, RRID: AB 10.562.376, lote 872637) ou cabra anti-IgG1 de ratinho-A647 (A21240, RRID: AB 10.565.021, lote 1248996). De cabra anti-galectina-9 também foi combinado com IgG1 de ratinho anti-CD163 e anti-CD3 e seguido de burro anti-cabra-A488 (A11055, RRID: AB 10564074, lote 55308A) e de burro anti-IgG de ratinho-A647 ( A31571, RRID: AB 10.584.497, lote 1069838, todos policlonal, 1: 200, Invitrogen). As lâminas foram montadas com meio de montagem Vectashield contendo DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, EUA). colo normal e tecido vulva foram utilizados como controle positivo. A omissão de um ou mais dos anticorpos primários ou substituindo-os por anticorpos da mesma classe de isotipo com uma especificidade desconhecida foram usadas como controlos negativos.

A análise microscópica

Imagens das galectinas coloração tripla foram digitalizadas com um Pannoramic Midi automatizado scanner de slides e analisados ​​utilizando Pannoramic Viewer (3DHISTECH, Budapeste, Hungria). Um tempo de exposição fixa foi determinado por lâmina para cada um dos três marcadores fluorescentes. Brilho e contraste foram ajustados para cada lâmina, com base em células não tumorais com uma intensidade de coloração conhecidos. Pelo menos três, mas geralmente quatro ou cinco imagens aleatórias foram tomadas com uma ampliação de 200x, a amostragem de uma área total do tumor de 1,1 a 1,9 milímetros

2 de cada slide, compreendendo tanto o epitélio e estroma tumoral. Expressão de células de tumor foi marcado, sem o conhecimento de parâmetros clínico-patológico, tal como descrito por Ruiter et al [34]. A intensidade foi pontuada como (0) ausente, fraca (1), moderado (2) ou intensa (3). intensidade de coloração moderada e intensa foram consideradas fortes. A percentagem de células positivas foi pontuada como 0% (0), 1-10% (1), 11-25% (2), 26-50% (3), 51-75% (4) e 76-100% (5). A coloração com uma pontuação combinada superior a 2 foi considerado positivo.

Uma vez que as células tumorais não só, mas também CAS células dentro do epitélio e estroma tumor expressa galectina-1, -3 e -9, expressão total no tumor epitélio e estroma foi analisado pelo programa de imagem de software de análise in-house Empilha versão 2.1 (Dr. J. Vrolijk, Ing W. Sloos, do Departamento de Biologia Molecular Cell, Leiden University Medical Center, Leiden, na Holanda;. software não publicado). limiares coloração positiva foi determinada por comparação da imagem limiar com a coloração inicial no Pannoramic Viewer. áreas do estroma foram marcados e marcados separadamente a partir do epitélio. vasos sanguíneos, autofluorescência e áreas de necrose foram removidos manualmente a partir da análise. foram obtidos a área total eo número de pixels positivos individuais, duplos e triplos. Dez amostras aleatórias foram marcados manualmente para a percentagem de células positivas individuais, duplos e triplos no epitélio e estroma tumoral, o que correspondeu com as análises que utilizam pilhas.

A distribuição de células positivas individuais e duplos nas colorações de casal foi marcado em categorias: 5%, 5-50%, 50%, ou praticamente todas as células positivas em pelo menos quatro áreas por lâmina utilizando um LSM700 microscópio confocal de varredura a laser equipado com um LCI Plan-Neofluar 25x /0,8 Imm Korr DIC M27 objetivo (Zeiss, Göttingen, Alemanha). As imagens foram adquiridas usando um C-Apochromat 40x /1,20 W objectivo Korr (Zeiss).

A análise estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando o programa SPSS versão 20.0 (IBM Corp., Armonk, EUA). As correlações (r) entre as pontuações de expressão de galectina por ambas as análises Ruiter e pilhas foram testadas por meio do teste rho de correlação de Spearman. Com base em gráficos de dispersão, correlações com P 0,45 foram considerados positivos e correlações com P 0,67 forte. As correlações entre a expressão de galectina e variáveis ​​clínico-patológicos foram estudadas usando Pearson Chi-quadrado e exato de Fisher. correlações de sobrevivência foram testados utilizando os modelos de riscos proporcionais de Kaplan-Meier e Cox, em que foram considerados estatisticamente significativos valores de p menores que 0,05.

Resultados

Expressão de tipos de galectina 1, 3 e 9 em escamosas cancro do colo do útero

a galectina-1, -3 e -9 foram expressas no citoplasma de diferentes tipos de células (Figura 1). A expressão dos diferentes tipos de galectina por células epiteliais de tumor foi quantificada pela contagem Ruiter. Células tumorais epiteliais na maioria das amostras não expressam galectina-1 (89% de amostras) ou galectina-9 (89% de amostras), ver Fig. 2A Para avaliar todos galectina células expressando, expressão de galectina foi avaliada tanto no epitélio do tumor e do compartimento do estroma usando os internos de análise de imagem Pilhas de programas de software. A galectina-1 foi geralmente presente num número elevado de células do estroma (figura 2B). Variável de expressão de galectina-3 foi observado tanto em células tumorais e células estromais. A expressão de galectina-3 foi encontrada em 84% das amostras. Forte de células tumorais expressão de galectina-3 foi frequentemente presentes quer na fronteira invasiva ou centro dos campos tumorais. Em células tumorais, a expressão da galectina-3 apareceu frequentemente mutuamente exclusivas com expressão de galectina-1 ou -9, uma vez que a sua expressão foi reduzido quando a expressão de um outro tipo de galectina estava presente. Se este fosse o caso, a galectina-3 foi expressa, principalmente, no centro dos campos de tumor, enquanto que a galectina-1 e -9 foram expressos na fronteira invasiva. As células que expressam galectina-9 geralmente não eram abundantes tanto no epitélio do tumor ou as células do estroma. Quando galectina-9 foi expressa por células epiteliais tumorais, foi localizada principalmente nas fronteiras invasivos.

Imagem representativa coloração tripla em uma amostra de câncer de FFPE escamoso cervical contendo células epiteliais tumorais que expressam galectina-1 (A, azul) , a galectina-3 (B, verde) e galectina-9 (C, vermelho) com uma ampliação de 200x. campos epiteliais tumorais são marcadas por linhas tracejadas. Tipicamente, a galectina-1 foi expresso num elevado número de células do estroma e podem ser fracamente expresso por células epiteliais tumorais. A galectina-3 foi expressa em células do estroma e, muitas vezes, quer em centros de campo epiteliais (como mostrado) ou em pequenos grupos de células epiteliais na fronteira invasiva. A galectina-9 pode também ser expresso por ambos estroma e células epiteliais. Quando a galectina-1 ou -9 foram expressas por células epiteliais, este foi tipicamente observado nas fronteiras dos campos de tumor, enquanto que a galectina-3 foi expressa no centro, como demonstrado nesta figura. Tumor infiltrando células CAS expressam galectina-1, -3 e -9 foram também frequentemente observado dentro dos campos epiteliais tumorais

A fração de amostras em que células tumorais expressos galectina-1, -3 ou. – 9 ou uma combinação é mostrado em A. a fracção de amostras positivas para um ou nenhum dos tipos de galectina estudados é mostrado na primeira coluna percentagens, enquanto que as fracções de amostras de expressar dois ou mais tipos de galectina são mostrados na segunda coluna. Total de galectina-1, -3 e -9 pixels positivos individuais, duplos e triplos no estroma do tumor e tumor epitélio é representado em B. A média e erro padrão da média são exibidos.

Correlação entre galectina-1, -3 e -9 expressão

Todos os galectina expressando células positivas individuais, duplos e triplos no estroma tumor foram significativamente correlacionados com as mesmas células do epitélio do tumor (0,57 P 0,72, p 0,0001, Tabela S2), excepto para as células positivas individuais galectina-3, o único tipo de galectina estudado que foi expressa por células tumorais, na maioria das amostras. Este também foi o único tipo de galectina para os quais notas positivas individuais epiteliais foram fortemente correlacionada com a pontuação Ruiter da expressão de células tumorais (R = 0,743, p 0,0001, S1 Fig). Um único galectina-1 positivo, -3 e -9 não foram significativamente correlacionados uns com os outros. Foram encontradas fortes correlações entre as células de galectina-9 único positivos e /9 células duplamente positivas tanto no epitelial e no compartimento do tumor estromal 3 galectina-(R = 0,706, p 0,0001; R = 0,680, p 0,0001, respectivamente). A galectina-3 de células positivas individuais foram fortemente correlacionada com /3 células duplamente positivas dentro do estroma do tumor (R = 0,693, p 0,0001) a galectina-1. células positivas triplo foram fortemente correlacionada com as células duplamente positivas galectina-09/01 dentro do epitélio do tumor (R = 0,682, p 0,0001). células positivas triplos no estroma foram correlacionados com a galectina-3/9 células positivas duplas (R = 0,704, p 0,0001).

Fenótipo de células galectina expressar

Para estudar se macrófagos e T células expresso de galectina-1, -3 e -9, foi realizada com colorações duplos tipo 2 marcador de macrófagos CD163 ou marcador de células T CD3 (figura 3). células galectina-1 expressando não eram abundantes no epitélio do tumor, mas quando presente a maioria era CD163

+. Uma minoria das células que expressam galectina-1 foi CD3

+. A maioria do estroma galectina-1 expressando células não expressavam CD163 ou CD3 e foram denominados fibroblastos com base na morfologia celular.

Imagens representativas de colorações duplos de galectina-1 e CD163 (A), ou CD3 (B), galectin- 3 e CD163 (C), ou CD3 (D) e galectina-9 e CD163 (e) ou de CD3 (F) são mostrados. Imagens que contêm ambas as colorações e DAPI são mostrados na coluna da direita. As setas indicam exemplos de células positivas duplas.

Quase todas as células não epiteliais que expressam galectina-3 foram CD163

macrófagos +. O inverso não era verdade, como observamos também um grande número de CD163

+ células que não expressam galectina-3. A população menor de galectina-3 células que expressam foi CD3

+.

A maioria da galectina-9 células que expressam foi CD163

+ e quase todas CD163

+ macrófagos foram galectina-9

+. Nós não observamos CD3

+ células galectina-9 expressando.

Embora as correlações entre as galectinas e angiogênese têm sido descritos, não observamos uma coloração clara navio ou de uma morfologia semelhante em comparação com uma coloração para CD105 (S2 Fig). Uma vez que também não encontrou uma correlação com o número de CD105

+ embarcações (dados não mostrados), a galectina-1, -3 e -9 não foram abundantemente expresso por células endoteliais nesta coorte estudo.

Correlação entre a expressão de galectina e os parâmetros clínico-patológicos

pacientes com câncer cervical escamosas em estágio TNM I (n = 110), II (n = 44), III (n = 4) e IV (n = 2) foram incluídos neste estudo. A idade média foi de 45 anos (variação 22-87) e vinte pacientes morreram da doença em três anos. forte expressão da galectina-1 pelas células tumorais foi significativamente correlacionada com a sobrevivência pobre livre de doença (p = 0,0004) e específica da doença (p 0,0001, Fig 4A). A taxa de risco para a sobrevivência específica da doença em caso de expressão tumoral forte galectina-1 foi de 8,9 (IC 95%: 2,961-26,717, Tabela 1). de células de tumor de expressão de galectina-1 foi também correlacionada com o aumento da profundidade de invasão tumoral (p = 0,032, Tabela 2). Provavelmente relacionado com isso, os pacientes com tumores que expressam galectina-1 com mais frequência receberam radioterapia pós-operatória (p = 0,020). A radioterapia foi administrada a 16 dos 18 pacientes com qualquer expressão de galectina-1 e para todos os seis pacientes com forte expressão de galectina-1.

curva de sobrevivência de Kaplan-Meier para a forte em comparação com ausência de fraca expressão da galectina -1 pelas células tumorais é mostrado na A. a análise de sobrevida comparando pacientes com presentes contra expressão tumoral ausente da galectina-9 é mostrado na B.

expressão tumor de galectin- 9 mostrou uma tendência de melhora da sobrevida (p = 0,087, Fig 4B). Curiosamente, embora fraca expressão da galectina-3 de tumor foi correlacionada com o aumento da profundidade de invasão, expressão positiva foi correlacionada com a diminuição da invasão tumoral (p = 0,012, Tabela 2). Tanto a galectina-3 e galectina-9 expressão foram significativamente correlacionada com a presença de tipos de HPV 16 ou 18. O tamanho do tumor e a presença de vaso-invasão ou metástase de nódulo linfático não foram significativamente diferentes entre amostras com ou sem expressão de galectina-1, -3 ou -9 tanto no epitélio ou estroma tumoral.

a análise multivariada de sobrevida específica da doença foi realizada para tumor galectina-1 intensidade corrigindo para o estágio FIGO, metástases em linfonodos e vaso-invasão (Tabela 1 ). fase FIGO foi utilizado porque este o tamanho do tumor e coberto profundidade infiltração e era conhecido por um maior número de pacientes do que as variáveis ​​separados. Linfonodo metástases e vaso-invasão são dois outros parâmetros conhecidos para influenciar o cancro do colo do útero prognóstico do paciente. Galectina-1 intensidade tumor independentemente correlacionada com a sobrevivência pobre, com um hazard ratio de 8,0. Quando estágio FIGO e estado metástases em linfonodos foram substituídos por estágio TNM, a correlação permaneceu estatisticamente significativa (hazard ratio: 6,84, 95% CI: 2,013-23,256, p = 0,002). Tumor galectina-1 intensidade também foi um preditor independente de pobre sobrevida livre de doença (razão de risco: 3,41; IC 95%: 1,296-8,972, p = 0,013). Os dados estavam disponíveis para 155 pacientes, incluindo 41 recaídas e 30 mortes.

Discussão

O presente estudo investigou as correlações entre a expressão da galectina-1, -3 e -9 e sobrevivência em uma escamosas coorte cancro cervical (n = 160) seguindo as recomendações observação do estudos marcadoras tumorais prognósticos [35]. A galectina expressão por células tumorais e o epitélio e células do estroma do tumor infiltrating foram marcados utilizando dois sistemas de pontuação complementares. Nós também investigou quais estromais células associados ao câncer (CAS) (fibroblastos, macrófagos e células T) expressa nestes galectinas

Uma vez que a expressão de células de tumor da galectina-1 e -9 foi geralmente baixa ou ausente, a galectina-1. e -9 em tumor campos epiteliais foram predominantemente expresso por epitélio tumor infiltrando células do sistema imunológico. Isso também explica a ausência de uma forte correlação entre a expressão total e a pontuação Ruiter para galectina-1 e -9, enquanto epitelial galectina-3 positividade single foi fortemente correlacionada com a pontuação Ruiter para galectina-3. As correlações também indicam que os dois métodos de pontuação foram utilizados não só mas também complementar validado uns aos outros.

A galectina-1, -3 e -9 era esperado que fossem expressos por macrófagos, células T, células epiteliais e fibroblastos [4,13]. A maioria galectina-1 células que expressam infiltrando no epitélio tumor foram macrófagos, predominantemente CD163

+ tipo 2 macrófagos. Uma população menor consistiu de galectina-1 expressando células T, embora mais 1 galectina-células T negativas estavam em estreito contacto com as células positivas galectina-1. Isto corresponde com a função proposta de galectina-1 na indução de apoptose de células T, resultando em imunossupressão [4,7]. A quantidade de expressão da galectina-3 por células CAS foi altamente variável entre os pacientes, mas este tipo de galectina foi quase sempre expressa por CD163

+ tipo 2 macrófagos. Isto corresponde a um

in vitro

estudo mostrando que a galectina-3 é mais freqüentemente expressa em tipo 2 do que o tipo 1 macrófagos e também a uma maior extensão do que a galectina-1 [36]. A galectina-3 foi, assim, predominantemente expresso por macrófagos do tipo 2, sugerindo que o tumor células que expressam galectina-3 pode ser associado com um tumor promover microambiente infiltrante. Isto corresponde com as suas funções relatados na promoção da sobrevivência celular [4] e a angiogénese [10]. Uma vez que a galectina-1 foi quase sempre expressas pelo tumor infiltrado de células imunitárias e a galectina-3 entre as células não tumorais por CD163

+ macrófagos, é esperado que os galectina-1/3 células duplamente positivas para ser epitélio infiltrado no tumor de CD163

+ macrófagos. O contacto entre as células que expressam galectina-3 e as células T foi mais evidente do que a galectina-1, que por sua vez pode induzir a apoptose da célula T [12]. Um estudo realizado pela Hirashima et al. descreveu que a galectina-9 é expressa por células T e de neutrófilos [13]. Em contraste, nós demonstramos que este galectina é predominantemente expresso por macrófagos no cancro do colo do útero. Além disso, quase todos CD163

+ macrófagos foram galectina-9

+ e não observamos células T galectina-9 expressando. A função da galectina-9 em macrófagos associados a tumores requer uma investigação mais aprofundada.

A galectina-1 foi descrita a ser raramente expressa por células tumorais [19,27,28], o que foi confirmado pelo estudo atual. Pacientes com forte célula tumoral galectina-1 expressão tinha aumentado invasão tumoral e recebeu tratamento de radioterapia pós-operatória com mais frequência. Tumor galectina-1 expressão foi um preditor independente de sobrevida específica da doença pobres. Isto sugere que a expressão de galectina-1 está associada com o crescimento de tumores mais agressivos. Isto corresponde a um estudo realizado por Huang et al., Que relatou uma correlação entre a expressão tumoral da galectina-1 e baixa sobrevida em pacientes com câncer cervical tratados com a terapia de radiação curativa-intenção [27]. Na verdade, o aumento da galectina-1 expressão é geralmente associado com mau prognóstico em diferentes tipos de tumores [17,18,26,27]. A galectina-1 podem aumentar a progressão do tumor e invasividade [37]. O presente estudo, realizado em uma coorte consecutiva de pacientes de cancro cervical escamosas, mostra que o tumor a galectina-1 é um marcador para a sobrevivência pobre.

Os resultados inconsistentes foram descritas para galectina-3, que tem sido associado com bom prognóstico [17,38], bem como mau prognóstico em diferentes tipos de tumores [24,39]. Em neoplasias do colo do útero, a galectina-3 foi mostrado estar inversamente correlacionada com a progressão [30]. Os nossos resultados sugerem que a forte expressão da galectina-3 está correlacionada com o crescimento do tumor menos, enquanto fraco de galectina-3 pode ser correlacionado com o aumento do crescimento do tumor. Tumor expressão da galectina-3 pode ser necessário para um fenótipo diferenciado e ECM adesão [9]. A função da galectina-3 na promoção da sobrevivência celular [4] e potencialmente induzir resistência quimio-[40] e apoptose da célula T [12] pode explicar a correlação entre a expressão e de prognóstico reservado. Porque as funções e correlações com parâmetros clínico-patológicos e sobrevivência da galectina-3 são tão diversas, que vai ser um desafio para usar esse tipo de galectina como um marcador de prognóstico ou de diagnóstico em câncer cervical.

A expressão de galectin- 9 por células tumorais tem sido geralmente correlacionado com bons marcadores de prognóstico em diferentes tipos de tumores [17,22,23,26,41]. O papel dos diferentes tipos de galectinas parece ser o tipo de tumor dependente embora [41], e a galectina-9 foi correlacionada com a sobrevivência pobre em carcinoma de células renais de células claras [42]. No cancro do colo do útero, uma correlação com alto grau de diferenciação tem sido descrito para galectina-9 expressão [31], de acordo com a tendência de melhora prognóstico descrito em nosso estudo. Tumor galectina-9 expressão pode estar relacionado com a infecção pelo HPV, como diferentes vírus, incluindo o citomegalovírus humano, HIV e virus da gripe têm sido mostrados para induzir a expressão de galectina-9 [43-45]. Descobrimos que a expressão da galectina-3 e galectina-9 foram ambas significativamente correlacionada com a expressão de HPV16 ou HPV18, apoiando esta hipótese.

Para concluir, tumor de galectina-1 expressão pode ser utilizado como um marcador para um anti mais agressivo tratamento -Câncer. A galectina-1 e -3 eram mais susceptíveis de co-expressas por epitélio tumoral tipo infiltrante 2 macrófagos. Tumor de galectina-3 pode ter uma dupla função, como fraca expressão foi correlacionada com o aumento da invasão tumoral, enquanto que a expressão positiva foi correlacionada com a diminuição da invasão. expressão tumoral da galectina-9 mostrou uma tendência de melhora da sobrevida, o que pode estar relacionado a expressão induzida vírus. Como o bloqueio de galectina-1 de expressão que já foi demonstrado que inibem a angiogénese tumoral [8] e induzem células T de rejeição de tumor dependente em ratinhos [46], os nossos dados suportam mais estudos do potencial terapêutico de direccionamento a galectina-1 em tumores positivos.

Informações de Apoio

S1 Fig. Epitelial Pilhas contra pontuações Ruiter

doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s001

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S2 Fig. Galectina e dos vasos coloração

doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s002

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S1 Table. Paciente e do tumor características

doi:. 10.1371 /journal.pone.0129119.s003

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S2 Table. Correlações entre expressões galectina

doi: 10.1371. /Journal.pone.0129119.s004

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