Abstract
Fundo
A indução quimioterapia é uma opção terapêutica comum para pacientes com cabeça locorregionalmente-avançado e cancro do pescoço (CCP), mas ainda não está claro quais pacientes serão beneficiados. Neste estudo, procurou biomarcadores prever a resposta de pacientes com HNC locorregionalmente-avançado à quimioterapia de indução, avaliando o padrão de proteínas de reparo do DNA expressão.
Métodos
A expressão de um painel de DNA proteínas -Reparação em parafina espécimes fixados em formalina de uma coorte de 37 pacientes HNC submetidos a quimioterapia de indução à base de platina antes chemoradiation definitiva foram analisados utilizando imuno-histoquímica quantitativa.
resultados
Nós descobrimos que XPF (um parceiro de ligação ERCC1) e fosfo-MAPKAP quinase 2 (pMK2) são novos biomarcadores para pacientes com CECP submetidos a quimioterapia de indução à base de platina. baixa expressão XPF em pacientes com CECP está associado à melhor resposta à indução quimioradioterapia, enquanto que a expressão alta XPF correlaciona-se com uma resposta pior (p = 0,02). Além disso, a baixa expressão pMK2 correlacionou-se significativamente com a sobrevida global após a indução além de quimioradioterapia (p = 0,01), sugerindo que pMK2 podem dizer respeito à quimioradioterapia.
Conclusões
Foram identificados XPF e pMK2 como novos biomarcadores de reparação do ADN para pacientes HNC locorregionalmente-avançado submetidos à quimioterapia de indução à base de platina antes chemoradiation definitiva. Nosso estudo fornece insights para o uso de biomarcadores de reparo do DNA nas estratégias de diagnóstico personalizados. Uma validação adicional em uma coorte maior é indicado
Citation:. Seiwert TY, Wang X, Heitmann J, Villegas-Bergazzi V, Sprott K, Finn S, et al. (2014) DNA Repair Biomarkers XPF e Phospho-MAPKAP Quinase 2 Correlacionar com o resultado clínico em avançado de cabeça e pescoço do cancro. PLoS ONE 9 (7): e102112. doi: 10.1371 /journal.pone.0102112
editor: Apar Kishor Ganti, University of Nebraska Medical Center, Estados Unidos da América
Recebido: 13 Março, 2014; Aceito: 14 de junho de 2014; Publicação: 14 de julho de 2014
Direitos de autor: © 2014 Seiwert et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por uma ASCO Translational Professor navio prêmio (EEV), o Grant Achatz e Nick Kokonas /Alinea Head and Cancer Research Fund Neck (EV, TYS), e um vôo Atender Scientist Award Clínica Medical Research Institute Young (FAMRI, YCSA) ( TYS). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. X Wang, V Villegas-Bergazzi e DT tecelão eram empregados de On-Q -ity. K Sprott, S Finn, E O’Regan, DA Farrow foram consultores para On-Q-dade. Os autores confirmam que isso não altera a adesão a todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de partilha, conforme detalhado no guia para os autores.
Introdução
Cabeça e carcinoma de células escamosas do pescoço (CECP) é a sexta neoplasia maligna mais comum em todo o mundo e é responsável por 45.000 novos casos em os EUA a cada ano [1], [2]. Para fins práticos, câncer de cabeça e pescoço é dividido em três estágios clínicos: cedo, locorregionalmente-avançado e metastático ou recorrente. abordagens de tratamento pode variar dependendo do estágio da doença. A grande maioria dos pacientes (-60%) que apresentam doença locorregionalmente-avançado requerem terapia multimodal agressiva. as taxas de sobrevivência a longo prazo relatadas varia entre 50-70% [3], [4]. Indução ou quimioterapia neoadjuvante é cada vez mais utilizado antes da terapia definitiva local (ou seja, a cirurgia /chemoradiotherapy /radiação) e aprovado pela FDA para esta indicação. quimioterapia de indução está associada com altas taxas de resposta, alívio sintomático e uma redução em falhas metastáticas distantes. Além disso, vários grupos, incluindo o nosso relataram uma clara associação entre a resposta à quimioterapia de indução e melhorou a sobrevida global [5] – [7]. Apesar de um elevado grau de actividade, um recente estudo de fase III falhou em mostrar benefício da adição de quimioterapia de indução a radioquimioterapia numa população não seleccionada paciente [8]. análise de subgrupo sugeriram benefício potencial em certas populações de alto risco, mas na ausência de uma validação de biomarcadores apropriados de hipóteses será difícil e caro.
Uma meta-análise também confirmou uma pequena vantagem de sobrevivência com a quimioterapia de indução apesar heterogeneidade das terapias incluídos [9]. Infelizmente, não há atualmente nenhum método validado para prever quais pacientes irão beneficiar desta terapia e ainda não está claro como selecionar pacientes para este potencialmente benéfica, bem como a terapia potencialmente tóxico. Biomarkers pode ajudar a melhorar a seleção dos pacientes no futuro.
proteínas de reparo do DNA desempenham um papel essencial na manutenção da estabilidade do genoma e têm sido implicadas na tumorigênese. Pacientes com síndromes de instabilidade cromossômica, como a anemia de Fanconi (FA), ataxia telangiectasia (AT), defeitos de síndrome ou mostram síndrome de Werner de Bloom em reparo de DNA e um aumento do risco associado e mau prognóstico para o câncer, incluindo câncer de cabeça e pescoço [10] – [17 ]. As células cancerosas apresentam instabilidade genômica e muitas vezes são deficientes em uma das seis principais vias de reparo de DNA a saber: excisão de bases de reparação (BER), reparação de excisão de nucleotídeos (NER), reparo mismatch (MMR), recombinação homóloga (HR), endjoining não homóloga (NHEJ) , e síntese de DNA translesão (TLS). Quimioterapia e agentes mais quimioterápicos danificar o DNA ea falta de reparação adequada induz a morte de células tumorais.
Portanto, é crucial identificar biomarcadores de reparo do DNA que podem predizer quais pacientes beneficiar de quimioterapia de indução na cabeça locorregionalmente-avançado e pescoço .
Os relatórios anteriores sugerem que ERCC1 é um potencial biomarcador para a terapia à base de platina [18] – [20]. A proteína se liga a ERCC1 XPF para formar um heterodímero, que é uma estrutura de endonuclease específica de ADN que estabiliza um outro
In vivo
e é responsável pela ‘5 incisão durante a reparação de excisão de nucleótidos [21]. Níveis de ERCC1 são reduzidos significativamente em células deficientes XPF e vice-versa [22]. Este biomarcador não foi adoptada para CECP em parte devido à controvérsia em torno da especificidade do anticorpo utilizado [23], [24]. Outros estudos descobriram que resistência a quimioterapia à base de platina se correlaciona com os níveis de proteína ou mRNA de ERCC1 e XPF [21], [25], [26].
Neste estudo, nós investigamos um painel de reparo de DNA proteínas em cinco grandes vias de reparação do ADN usando imuno-histoquímica (IHQ) e uma plataforma de patologia digital para avaliar se o padrão de expressão de proteínas de reparação do ADN na fase de biópsia pode prever a resposta do tumor em doentes com carcinoma epidermóide locorregionalmente-avançado submetidos a quimioterapia de indução antes da radioquimioterapia definitivo. O nosso estudo mostra que XPF é altamente variável entre os cancros da cabeça e pescoço, com uma ampla gama dinâmica: Baixos níveis de expressão de XPF correlacionar com uma melhor resposta à indução radioquimioterapia, enquanto altos níveis de expressão XPF estão associados com uma resposta pior. Além disso, pMK2, uma quinase que tem sido relatada a ser crucial para a regulação pós-transcricional da expressão gênica como parte do DNA danos resposta [27], é significativamente associada à sobrevida global após a terapia de indução mais chemoradiation. Nossos resultados indicam que a análise de mudança de vias de reparo de DNA pode ser clinicamente útil na HNC.
Materiais e Métodos
coortes de pacientes
espécimes de biópsia (fixado em formol e parafina amostras de tumores embutidos) de 37 pacientes com estágio IV HNSCC locorregionalmente-avançado tratados na Universidade de Chicago, foram avaliados a partir de secções inteiras. As biópsias de pacientes CECP tinha sido obtido a partir de uma excisão primária ou biópsia antes da terapia. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os doadores ou o parente mais próximo para o uso destas amostras em pesquisa aprovado no âmbito da Universidade de Chicago IRB protocolo de 8980 e 15410A. Todos os pacientes tinham sido tratados com quimioterapia de indução que consiste em dois ciclos de paclitaxel e carboplatina para um total de oito semanas. Nós posteriormente realizada uma avaliação intercalar, seguida por paclitaxel, 5-fluorouracil, hidroxiureia e regimes baseados em radioterapia (FHX) quimioradioterapia base e, finalmente, avaliados para resposta [28], [29]. Foram analisadas as amostras dos pacientes em relação à sua status HPV através da coloração para p16 (Santa Cruz JC-8).
Avaliação Tratamento
avaliação da resposta foi realizada no intervalo entre a quimioterapia de indução e quimioradioterapia consecutivo pela a tomografia computadorizada e /ou exame clínico por um otorrinolaringologista e melhor resposta foi avaliada. Os critérios de resposta foi definida como resposta completa (CR) [14], resposta progressiva (PR) e a doença estável (SD) com base em critérios RECIST [6], [30].
As linhas celulares
Os GM08437 fibroblastos vírus símio 40-transformadas (XPF – /-, Instituto Coriell) e células HeLa foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 10% de soro fetal de vitelo inactivado pelo calor (FCS) numa atmosfera humidificada de 5% incubador de CO2 a 37 ° C.
imuno-histoquímica (IHQ)
as seções inteiras das amostras foram coradas por IHQ utilizando anticorpos contra XPF (SPM228) /ERCC1 (8F1) (Abcam), FANCD2 (Santa Cruz ), PAR, γH2AX (Millipore), MLH1 (AbSerotec) e fosfo-cinase 2 MAPKAP (pMK2) (Cell Signaling Technology). As secções de tecido foram desparafinadas /re-hidratadas utilizando técnicas padrão. recuperação de epítopo induzida pelo calor foi realizado e os tecidos foram corados com os anticorpos durante a noite a 4 ° C. Os anticorpos primários foram omitidos para os controlos negativos. Hematoxilina foi usado como contraste nuclear. Duas vezes intervalos de diluição do anticorpo foram estabelecidas, e as condições de recuperação antigênica foram criados de tal forma que o anticorpo foi em excesso e discriminação entre tecidos de câncer de controlo e entre os níveis de expressão baixos e altos. Renaissance TSATM (Tyramide sinal amplificação) Biotina do sistema (Perkin Elmer) foi utilizado para a detecção de XPF e FANCD2. Super Sensitive TM IHC Detection System (BioGenex) foi utilizado para a detecção de PAR, PARP1, MLH1, pMK2, γH2AX e ERCC1.
IHC Scoring
Os tecidos manchados IHC sobre as lâminas foram digitalizados em uma plataforma patologia digitais (Aperio). Qualidade de padrão de coloração foi patologia revisto. foi determinada intensidade de coloração nuclear, e /ou a localização do marcador em ambos os compartimentos nucleares e citoplasmáticos. Três regiões tumorais de interesse em toda uma secção foram seleccionados por patologistas, a fim de minimizar os efeitos de variação de coloração IHC. diapositivos digitalizados foram então avaliados por patologistas e análise de imagem digital baseado máquina (Aperio). A percentagem (0-100%) das células tumorais com quantidade positiva coloração (Q) e intensidade (I) para cada marcador foram independentemente marcado por dois patologistas treinados (vVb, SF), que foram cegados pela história clínica. A pontuação nuclear foi relatado para XPF, ERCC1, FANCD2, MLH1, PARP1, PAR e γH2AX. Os compartimentos nucleares e citoplasmáticos foram pontuadas separadamente para pMK2. quantidade coloração (Q) foi marcado 0-4: sem coloração nuclear = 0; 1-9% de células com coloração nuclear = 1; 10-39% = 2; 40-69% = 3; e 70-100% = 4. intensidade da coloração (I) foi classificada de 0 a 3, com 0 = negativo, 1+ = fraca, 2+ = intermédia, 3+ = forte. pontuações finais foram obtidos multiplicando as pontuações quantidade e intensidade de coloração (ixq) [31]. análises de imagem baseados em máquinas foram estabelecidos com base em macros modificada do algoritmo nuclear Aperio IHC para marcar a intensidade /quantidade de núcleos de tumores positivos. saídas do marcador em 0, 1+, 2+ e 3+ lixeiras foram combinados em um algoritmo de ponderação para criar uma pontuação intensidade relativa (H-score) 0-300 [32].
Immunoblotting
imunotransferência para XPF, ERCC1, e β-actina foi feito usando a metodologia padrão tal como previamente descrito [33] – [37]. Os anticorpos utilizados para imunotransferência foram anti-XPF (SPM228, Abcam), anti-ERCC1 (8F1, Abcam /Santa Cruz), e anti-β-Actina (H-170, Santa Cruz). Nove linhas celulares de cancro da cabeça e pescoço (SCC58, SCC61, SCC35, SCC28, SQ20B, SCC9, HN5, SCC68, SCC25), gentilmente cedidas pelo Dr. Ralph Weichselbaum e Dr. Mark Lingen, foram utilizados.
Estatística análise
pontuação Biomarcador foi correlacionado com dados clínicos para avaliar a correlação com o resultado. Um conjunto de valores de marcador ideal limiar foi determinado por análise univariada para cada marcador que apresentou maior discriminação para separar resposta completa (CR), resposta parcial (PR), grupos de doença estável (SD) para a quimioterapia de indução e sobrevida global. A análise multivariada não era viável devido ao número reduzido da amostra. Univariada de Cox modelos de riscos proporcionais foram construídos para cada um dos marcadores (modelos de marcadores individuais) para examinar suas potenciais poderes de previsão. A análise discriminante e partição também foi realizado para separar ao máximo as amostras de conjuntos de dados em grupos.
saídas estatísticos para p-value (valor preditivo positivo), aparente Error Rate (AER), Receiver Operator Characteristics (ROC) e a área sob curva (AUC). ROC é uma representação gráfica da sensibilidade versus (1-especificidade) para um sistema classificador binária como a sua discriminação de verdadeiros positivos, neste caso, é 1-especificidade (fracção de CR /PR chamado SD /PD) versus sensibilidade ( fração de SD /PD chamado SD /PD). AUC é uma medida de quão bem duas classes de dados separados por um regime de testes. Sensibilidade, especificidade, Preditivo Positivo Poder, Negativo Predictive Energia, Risco Relativo (RR) e Odds Ratio foram computados nos modelos alternativos.
Para avaliar a associação entre os escores de biomarcadores para a sobrevida global paciente, limites para cada biomarcador foram determinados, que se separou os doentes em dois grupos. Esses limites foram selecionados, escolhendo o valor biomarcador que gerou o p-valor mínimo curva de sobrevivência quando os pacientes com escores acima do limite foram comparados com pacientes abaixo do limiar. Limiares que criou um tamanho mínimo de grupo de menos de 10% de todas as amostras não foram considerados fiáveis e excluídos da análise.
As curvas de sobrevida para os grupos de baixo e alto risco foram comparados utilizando modelos de Kaplan-Meier eo p-valor relatado. Além disso, a AER, AUC, curva ROC, a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e risco relativo são relatados.
Resultados
variações significativas de proteínas de reparo do DNA expressão em múltiplos vias de reparo de DNA em câncer de cabeça e pescoço
vias de reparo de DNA são importantes para a resposta celular à quimioterapia e radiação. Oito selecionados proteínas de reparo de DNA em cinco grandes vias de reparo de DNA foram avaliadas por IHC em uma coorte de 37 pacientes; um exemplo de coloração IHC para cada biomarcador é mostrado na Figura 1A. a pontuação dos patologistas e avaliação baseada em máquina de intensidades de coloração IHC em zonas tumorais anotados foram usadas para avaliar diferenças de expressão de proteínas entre as amostras dos doentes. Expressão das proteínas de reparação de ADN varia entre amostras tumorais como mostrado graficamente na distribuição paciente para os marcadores (Figura 1B). Localização subcelular de pMK2 varia entre nuclear única, ou nuclear + localização citoplasmática, dependendo do tumor do paciente. Vários biomarcadores, tais como proteínas e FANCD2 γH2AX tem um padrão distinto no núcleo indicativo da activação do /recombinação homóloga FA (AR) ou de resposta de ADN de danos (DDR) via (Figura 1A) nestes tumores CECP. Biomarcadores em diferentes vias de reparo de DNA, tais como XPF (NER), MLH1 (MMR), PAR (BER), FANCD2 (FA /AR), pMK2 e γH2AX (DDR) foram encontrados para ter diferenças na intensidade de coloração nuclear ou citoplasmática e distribuição entre parabasais (PB) e não-parabasais (PBT) camada células para certos espécimes, sugestivo de uma expressão variável desses biomarcadores de reparação de ADN (Figura 1C). Um exemplo mostrado aqui é o padrão de coloração nuclear de NER biomarcador XPF em dois cancros representativos por IHC. intensidade baixa ou negativa de coloração nuclear XPF indica que via NER está desligado, e alta intensidade de coloração XPF indica que via NER está ligado (Figura 2). Para testar as correlações entre os escores patologista, análise guiada por máquina e imagem, comparamos IHC manchado XPF, que foram analisadas por dois patologistas, que estavam cegos para amostras de tumores, e algoritmo baseado em máquina neste estudo (Figura 2) com o valor de R2 de 0,79.
A. As seções inteiras FFPE de amostras de doentes com 37 CECP foram coradas por IHQ utilizando os anticorpos contra biomarcadores de reparo do DNA (XPF, ERCC1, FANCD2, MLH1, pMK2, PAR, PARP1) de acordo com o protocolo descrito no
Materiais e Métodos
. O tecido manchado no slide foi digitalizado em uma plataforma patologia digitais (Aperio) e as imagens foram visualizadas digitalmente, ampliação 10X. Como observado, a localização subcelular de pMK2 é em qualquer nuclear (N), ou nuclear (N) + citoplasmática (C), os padrões de coloração de pMK2 nestes tecidos de cancro é mostrado como indicado, ampliação de 20X. focos nuclear em células do cancro do pescoço foram mostrados para γH2AX e FANCD2 no painel inferior, como indicado, ampliação 40X. B. Exemplos de variáveis expressão de biomarcadores na cabeça e pescoço amostras de tecido de câncer corados com XPF, FANCD2, MLH1 são mostrados. A distribuição dos pacientes de pontuação XPF, FANCD2, MLH1 são plotados. C. As diferenças na intensidade e distribuição de XPF (NER), MLH1 (MMR), PAR (BER), FANCD2 (FA /AR), pMK2 e γH2AX (DDR) em parabasais (pb) e nonparabasal coloração (não-pb) células da camada de espécimes de um paciente HNSCC representante foram mostrados como indicado.
as comparações são feitas entre as estratégias de pontuação alternativos para imuno-histoquímica com o XPF para cada paciente com câncer de cabeça e pescoço. Máquina de pontuação assistida por XPF foi determinada com base na percentagem de núcleos com 1+ (fraca), 2+ (médio), 3+ (alta pontuação patologista) foram de intensidade Intensidade (I). as curvas de correlação como mostrado são computados para similaridade com um valor de R de 0,79.
expressão XPF altamente variável no câncer de cabeça e pescoço
Em nosso estudo, nós determinamos especificidade do XPF (SPM228) e anticorpos ERCC1 (8F1) por IHC utilizando fixados em formalina, embebidos em parafina blocos de HeLa (controlo positivo) e os sedimentos celulares deficientes XPF. Outros anticorpos XPF ERCC1 e foram avaliados (dados não mostrados /proprietária). SPM228 foi escolhido devido ao elevado grau de especificidade, e 8F1 escolhido, como é o anticorpo ERCC1 mais amplamente utilizado. O nosso resultado mostrou que a coloração nuclear específico de um anticorpo monoclonal contra XPF (SPM228) foi detectada em células HeLa mas não em células deficientes XPF, em contraste, a coloração nuclear pelo anticorpo ERCC1 8F1 foi encontrada em ambas as células deficientes HeLa e XPF, indicando que este anticorpo SPM228 é XPF específico e adequado para a detecção de XPF por IHC e ERCC1 8F1 reconhece proteínas nucleares não-específicas adicionais e é incapaz de detectar especificamente ERCC1 em espécimes (Figura 3A).
a. blocos FFPE de HeLa e GM08437 (célula deficiente XPF) peletes foram utilizados como controlos negativos e positivos, XPF (SPM228) e ERCC1 (8F1) anticorpos foram então aplicadas às secções por imuno-histoquímica de acordo com o método de IHQ para tumor, e padrões de coloração nuclear de XPF e ERCC1 foram mostrados. linhas celulares de cancro de cabeça e pescoço B. Nove foram analisados por immunoblotting para a expressão de XPF. proteínas de degradação XPF e XPF foram detectados por um anticorpo monoclonal anti-XPF (SPM228) com linhas de células 5 e 6 mostrando baixa expressão. p-actina (Santa Cruz) foi utilizado como um controlo de carga de proteína. Os nomes das linhas de células são listados
Nós avaliamos a expressão XPF em ambos, p16 (+) e p16. (-) Das amostras e não detectou diferença significativa (178 contra 165, NS).
em seguida, mediram o nível de expressão XPF em lisados de nove linhas de células de carcinoma epidermóide por immunoblot. Duas bandas de XPF a 110 kD e 75 kD foram encontrados de forma consistente, com a banda de 75 kDa que reconhece XPF comprimento completo e a outra banda que representava um produto de clivagem de XPF (desagregação XPF) (Figura 3B). Nós também descobrimos que os níveis de expressão de XPF variar drasticamente entre as nove linhas de células de carcinoma epidermóide (Figura 3B). A ampla faixa dinâmica de expressão XPF na coorte em nosso estudo também é mostrado em uma trama distribuição dos pacientes (Figura 1B). Tomados em conjunto, os nossos resultados demonstram que os níveis de expressão XPF detectados pelo anticorpo SPM228 variar significativamente em linhas de cabeça e de células do pescoço e as amostras dos pacientes, e que a SPM228 anticorpo monoclonal pode ser utilizado para detectar especificamente a expressão XPF por Western blot e IHC.
XPF está associada com a resposta à quimioterapia de indução para pacientes com câncer de cabeça e pescoço
Oito biomarcadores de reparo do DNA manchado em 37 amostras de pacientes por IHC foram analisados quanto à sua capacidade para prever a resposta à quimioterapia de indução. Dos 37 pacientes HNC tratados com quimioterapia de indução no estudo, resposta completa (CR) [14] foi observada em 11 pacientes (29,7%), 19 pacientes (51,4%) obtiveram uma resposta parcial (PR), e sete pacientes (18,9 %) tinham uma doença estável (SD). Verificou-se que os baixos níveis de expressão XPF HNC em pacientes foram significativamente associado com uma melhor resposta à quimioterapia de indução (p = 0,02) (Figura 4). Além disso, todos os sete pacientes que tiveram SD tinham altos níveis de expressão XPF (Figura 3, Tabela 1). Em contraste, ERCC1 detectada pelo anticorpo utilizado (clone 8F1) no nosso conjunto coorte não se correlacionou com a resposta, e outros marcadores tal como PARP1, PAR, MLH1, pMK2, γH2AX, FANCD2, também não se correlacionaram de (Tabela 1). Nossos resultados sugerem que XPF é o biomarcador NER preferido para prever a resposta à quimioterapia de indução em pacientes com CECP.
O gráfico mostra que a análise univariada das pontuações XPF biomarcadores relativos à discriminação entre os subgrupos de Resposta. A medição do resultado primário foi a resposta à quimioterapia de indução.
pMK2 se correlaciona com a sobrevida global à quimioradioterapia
Em seguida, avaliamos associação dos biomarcadores de reparo do DNA para a sobrevida global para este coorte de pacientes. pMK2 não se correlacionou com a resposta à quimioterapia de indução (Tabela 1), mas é fortemente correlacionada com a sobrevivência geral: baixa expressão pMK2 foi associado a melhor sobrevida global (p = 0,01) (Figura 5); pMK2 diferenciados um subgrupo com melhora da sobrevida potencialmente relacionados à quimioradioterapia, sugerindo que pMK2 podem dizer respeito à quimioradioterapia. Em contraste, foi encontrado XPF não se correlacionar com a sobrevivência global (p = 0,08). Durante vários outros marcadores de reparação do ADN, tais como PARP1, PAR, MLH1, γH2AX, ERCC1, FANCD2, a mesma análise não atingiu significância estatística (Tabela 2). é necessário um estudo mais aprofundado de pMK2.
A sobrevida global estimada pelo melhor resposta à quimioterapia de indução usando curvas de sobrevida de Kaplan-Meier com base na intensidade de coloração nuclear e quantificação de pMK2 determinada pela pontuação dos patologistas como NQ (Quantidade Nuclear).
Discussão
a quimioterapia induz DNA-danos nas células tumorais. Portanto, a capacidade de reparar tais danos usando vias de reparação de DNA específicos são susceptíveis de previsão de sensibilidade às drogas /resistência e resultado do tratamento. Assim, diagnóstico biomarcadores de reparo de DNA têm potencial para alterar significativamente estratégias de diagnóstico e afetar tomada de decisão terapêutica e plano de tratamento para pacientes com câncer de cabeça e pescoço. Em nosso estudo, foram avaliados oito biomarcadores de reparo de DNA em cinco diferentes vias de reparo de DNA por imuno-histoquímica em cabeça locorregionalmente-avançado e pescoço. Variações significativas em várias vias de reparação de ADN foram observadas em tumores CECP sugerindo que as decisões clínicos pode ser influenciada por um perfil de reparação do ADN biomarcador (Figuras 1, 2). Entre todos os biomarcadores de reparo do DNA que analisamos, XPF era a única melhor marcador para prever a resposta à quimioterapia de indução por meio de análise univariada; baixos níveis de expressão de XPF em pacientes com câncer de cabeça e pescoço foram associados com uma melhor resposta à quimioterapia de indução. Altos níveis de expressão XPF em pacientes de cabeça e pescoço correlacionados com pior resposta à quimioterapia baseada em platina consistente com relatórios anteriores [38]. Em contraste ERCC1 (8F1), detectado pelo anticorpo (8F1 clone) vulgarmente utilizado, em conjunto nosso coorte não se correlacionou com a resposta, o que pode estar relacionada com a sua especificidade mais pobre (Figuras 3 e 4, Tabela 1). ERCC1 (8F1) o desempenho não foi adequada em nosso estudo e que a hipótese de que a especificidade diminuiu pode ser compensada por maiores tamanhos de amostra, como visto em outros estudos [18] – [20]. Além disso, é possível que o ERCC1 8F1 mede algo diferente de ERCC1, que se correlaciona com a sobrevivência.
enquanto a resposta do paciente à quimioterapia de indução é um preditor de potencial bom resultado global como relatado por diversos grupos [4], [5 ], [39] – [41], a sobrevida global permanece clinicamente mais significativo. pMK2 foi encontrada uma correlação significativa (p = 0,01) com a sobrevida global. Desde pMK2 não parece se relacionar com indução de resposta pode ser um potencial marcador de sucesso do tratamento para chemoradiation concorrente (Figura 5, Tabela 2) consistente com os dados pré-clínicos [42].
Dada a heterogeneidade da cabeça e pescoço câncer, ea rede intrincadamente ligada de seis principais vias de reparo de DNA, não é razoável prever que o teste de diagnóstico significativo pode contar com um único marcador, específica. Como o nosso estudo sugere, marcadores de indução e chemoradiation provavelmente diferente. Além disso, a compensação de reparação do ADN na ausência de uma via de reparação por outra via sugere a possibilidade de que múltiplos marcadores podem ser necessárias para avaliar a capacidade de resposta de forma óptima. Tal reparação assinatura resposta DNA terão de ser avaliados pelo nosso grupo, utilizando uma coorte maior e pode permitir uma melhor avaliação dos HNC heterogeneidade e complexidade das redes de reparo do DNA.
Em conclusão, nosso estudo fornece um método estabelecido para medir biomarcadores de reparo de DNA e outros biomarcadores usando imuno-histoquímica quantitativa para identificar e avaliar as alterações funcionais para o reparo do DNA e danos vias de sinalização como uma valiosa ferramenta para diagnósticos personalizados. Nossos resultados indicam utilidade de XPF como um biomarcador para prever quais pacientes se beneficiam de que tratamentos com quimioterapia de indução. Especificamente XPF provou ser superior para ERCC1 teste (8F1). XPF também podem ter valor para prever o tratamento de sucesso global, o que potencialmente se relaciona com o seu papel na predição de resposta de indução [25]. Além disso, nossos resultados sugerem que pMK2 é um marcador potencial para chemoradiation, uma vez que não se correlacionou com a resposta de indução, mas se correlacionou fortemente com a sobrevida global. Além disso validação destes marcadores em uma coorte maior de pacientes com câncer de cabeça e pescoço avançados é imperativa e nossas observações são em grande parte neste momento de formação de hipótese, mas são consistentes com outra literatura [38]. Em última análise, vários marcadores podem ser necessárias para avaliar de forma otimizada amostras tumorais, e fornecer o máximo de informação para o tratamento de médicos.
Reconhecimentos
hospedeiros de bordo Medical Research Institute (FAMRI) YCSA (TYS), Cancer Research Fundação YIA (TYS), concessão de translação professor ASCO (EEV). Nós gostaríamos de agradecer ao Dr. Brian E. Ward por seu apoio contínuo.