Abstract

Purpose

Este estudo foi realizado para explorar os efeitos de polimorfismos genéticos (CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 3 C4326G e CYP2E1 * 5 G-1293C) e fatores ambientais (fumar e beber) na susceptibilidade ao câncer de laringe, em um grupo de estudo Han chinês.

Métodos

Este estudo de caso-controle incluiu 552 pacientes chineses Han diagnosticadas com câncer de laringe e 666 indivíduos saudáveis ​​de controlo de da mesma etnia, idade similar, e género. polimorfismos genéticos foram examinadas usando multi-PCR e Matrix Assisted Laser dessorção de ionização – Time of Flight (MALDI-TOF MS) metodologia. A associação desses fatores genéticos e ambientais com a susceptibilidade ao câncer de laringe foi avaliada utilizando uma abordagem estatística.

Resultados

As frequências de todos os três polimorfismos no grupo de pacientes foram significativamente diferentes das do coorte controle. Em comparação com o grupo de controlo, portadores de alelos variantes de CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C mostrou um risco maior de desenvolver câncer de laringe (para CYP1B1 * 2 355T, ajustado OR = 2,657, P 0,001; para CYP2E1 * 5 -1293C, ajustado OR = 1.938, P 0,001), enquanto portadores do alelo mutação CYP1B1 * 3 4326G apresentaram um risco menor (OR ajustado = 0,562, P 0,001). Foram observados efeitos conjunta destes polimorfismos. Quando comparado com o haplótipo G

355C

4326G

-1293, haplótipos T

355C

4326G

-1293 (OR ajustado = 1.809, P 0,001), G

355C

4326C

-1293 (OR ajustado = 1.644, P = 0,044), e T

355C

4326C

-1293 (OR ajustado = 3.104, P 0,001) foram associados com um risco significativamente maior de câncer de laringe. Os OR ajustados para não-fumantes, não-bebedores, fumantes e bebedores com o GT /genótipo TT no CYP1B1 * 2 G355T foram 2.190 (P = 0,006), 2.008 (P = 0,001), 5,875 (P 0,001), e 4.518 (P 0,001), respectivamente

Conclusões

CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C estão associados com um risco aumentado de câncer de laringe, enquanto CYP1B1 * 3 4326G está associado. com um risco diminuído. Estes polimorfismos mostrou efeitos conjuntos sobre o risco de câncer de laringe. Fumar e beber mostraram efeitos de colaboração com dois alelos de alto risco (CYP1B1 * 2 355T e CYP1B1 * 3 4326G) para promover o risco de câncer de laringe

Citation:. Jin J, Lin F, Liao S, Bao Q, Ni L (2014) Efeitos de SNPs (CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 3 C4326G e CYP2E1 * 5 G-1293C), fumar e beber na susceptibilidade ao câncer de laringe entre chineses han. PLoS ONE 9 (10): e106580. doi: 10.1371 /journal.pone.0106580

editor: Qing-Yi Wei, Cancer Institute, Duke, Estados Unidos da América

Recebido: 27 Janeiro, 2014; Aceito: 07 de agosto de 2014; Publicação: 09 de outubro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Jin et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho é apoiado pela Ciência e Tecnologia Fundação da cidade de Wenzhou, província de Zhejiang, China (H20090025, URL: https://www.wzkj.gov.cn) e da Ciência e Tecnologia Fundação de Serviços de Saúde da Província de Zhejiang, China (2012ZB106, URL: https://zgj.zjtcm.net). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de laringe, o maligna do cancro do pescoço mais comum, é também um tumor maligno comum na China [1]; No entanto, a etiologia do cancro da laringe permanece obscura. Enquanto a maioria dos pacientes com câncer de laringe tem uma longa história de fumo e álcool pressuposto [2], apenas uma pequena porcentagem de tais indivíduos eventualmente desenvolver câncer de laringe. Isto sugere que a composição genética de um indivíduo desempenha um papel importante a sua susceptibilidade ao câncer de laringe [3], e suporta a noção corrente de que a suscetibilidade ao câncer de laringe é associado com interações entre genes e meio ambiente. Portanto, o uso de abordagens de genética molecular e análise de associação genética para identificar genes potencialmente relacionadas com o câncer de laringe deve ajudar a revelar a etiologia da doença.

CYP1B1 e CYP2E1 são duas enzimas do citocromo P450 que catalisam a hidroxilação de pro- agentes cancerígenos, como hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAP), aminas aromáticas heterocíclicas (Haas), aminas aromáticas, e N-nitrosaminas [4] – [7]. Estas reacções podem produzir agentes citotóxicos, induzir mutações em proto-oncogenes ou genes supressores de tumores, resultar em danos no ADN, peroxidação lipídica e intensificar a proteína, e em última análise, levar a um aumento do risco para o desenvolvimento de vários cancros [8], [9]. Actualmente, 50 variantes polimórficas foram relatados para afetar a codificação da proteína CYP1B1, e entre estes, quatro polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) (CYP1B1 * 2 C142G, CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 3 C4326G e CYP1B1 * 4 A4390G) resultam em alterações na composição de aminoácidos da enzima e desse modo afectar o metabolismo de carcinogéneos [10], [11]. O SNP CYP1B1 * 3 (Leu

432) tem sido relatada como resultando em uma maior actividade catalítica para a oxidação de benzo [α] pireno de 7,8-dihydoxy-7,8-diidrodiol, em comparação com o Val

432 forma da enzima [12]. Helmig et ai. realizaram um estudo investigando a associação entre interações gene-ambiente e susceptibilidade ao cancro, e relatou que os fumantes apresentam uma frequência elevada de alelo selvagem C no nucleótido 4326 (nt4326) locus da CYP1B1 [13]. Estudos da cabeça humana e cancro de células escamosas do pescoço (CECP) revelou que polimorfismo CYP1B1 * 3 C4326G está associado com a exposição ao tabaco [14]. Singh et al. relatou que, enquanto CYP1B1 * 2 G355T e CYP1B1 * 3 C4326G tanto o aumento da susceptibilidade do indivíduo para CECP, susceptibilidade também foi afetada pelas interações entre genes e fatores ambientais (principalmente de tabaco e exposição ao álcool) [15]. Além disso, uma associação entre estes SPN e outros cancros de células escamosas, também tem sido sugerida. Uma meta-análise realizada por Xu et al. descobriram que mutações homozigóticas de CYP1B1 * 2 G355T e CYP1B1 * 3 C4326G podem ser fatores de baixo risco penetrância para a ocorrência de câncer de pulmão [16], o que é consistente com os resultados relatados por Chen et al. [17]. Além disso, CYP1B1 * 2 G355T e CYP1B1 * 3 C4326G também têm sido relatados para ser associados com a susceptibilidade a cancros relacionados com hormonas tais como o cancro da próstata, cancro da bexiga e carcinoma do endométrio [18] – [20].

Enquanto uma mutação G-1293C na região promotora 5 ‘do CYP2E1 irá alterar a expressão do gene [21], o impacto deste SNP sobre o risco de um indivíduo para o desenvolvimento de câncer de cabeça e pescoço permanece controverso. Gajeka et ai. relataram que CYP2E1 não foi associada a susceptibilidade a cancro da laringe, quer ou carcinoma nasofaríngeo [22], e Cury et al. informou que CYP2E1 não foi associada com a susceptibilidade à cabeça e pescoço [23]. No entanto, foi relatado que a presença do alelo CYP2E1 mutação * 5 pode aumentar o risco para o desenvolvimento de CECP, e um efeito conjunto entre fatores desse polimorfismo genético e de ambiente, tais como o tabagismo eo consumo de álcool também foi notado [24].

Aqui, nós relatamos resultados de um estudo de caso-controle investigar a associação de três SNPs importantes do P450 (CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 3 C4326G e CYP2E1 * 5 G-1293C) e dois grandes fatores ambientais (fumar e beber ) com a susceptibilidade ao câncer de laringe. O objetivo deste estudo foi o de melhorar a ajudar a melhorar o diagnóstico precoce, e, finalmente, reduzir a incidência de câncer de laringe em uma população de alto risco na China.

Assuntos de estudos e métodos

Os sujeitos do estudo

o protocolo experimental foi estabelecida, de acordo com as diretrizes éticas da Declaração de Helsinki. Este estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board do Segundo Hospital Filiado e Hospital de Yuying Children of University Medical Wenzhou, e todos os indivíduos de ambos os grupos assinaram um consentimento informado antes da inscrição. O grupo de pacientes neste estudo incluiu 552 indivíduos Han chineses diagnosticados com câncer de laringe entre agosto de 2007 e agosto de 2014, vários hospitais afiliados a Wenzhou Medical College (WMC). Os indivíduos foram elegíveis para inclusão no estudo com base nos seguintes critérios: (1) um diagnóstico de câncer de células escamosas da laringe como uma doença primária com base em um exame histopatológico; (2) a disponibilidade de uma amostra de sangue periférico que foram recolhidos antes da radioquimioterapia e foi devidamente preservados; (3) a disponibilidade de registos clínicos completos; (4) o assunto não estava relacionado com outros pacientes chineses Han. O grupo de controlo incluiu 666 indivíduos saudáveis ​​que haviam sido submetidos a um exame de saúde de rotina durante o mesmo período de tempo no Segundo Hospital afiliado com WMC. Os critérios de selecção utilizados para o grupo de controlo foram os mesmos que os utilizados para o grupo de doentes, com excepção de que os sujeitos de controle foram obrigados a não ter uma história pessoal de cancro, uma história familiar de cancro, ou uma história de exposição a radioactivos ou tóxicos gás ou outros agentes cancerígenos conhecidos. Os grupos de pacientes e controle foram pareados por sexo e idade, e não houve diferença estatisticamente significativa entre as suas características demográficas. Este estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board da Segunda Hospital afiliado com WMC, e todos os indivíduos de ambos os grupos assinaram um consentimento informado antes de inscrição.

projeto Primer

Primers para o Multiplex Polymerase Reacção em cadeia (multi-PCR) foram concebidos pelo sistema de ensaio desenho 3,1 (Sequenom, Inc., San Diego, CA, EUA) e sintetizados por TsingKe Inc, (Pequim, China). As sequências dos iniciadores utilizados neste estudo estão listados na Tabela 1.

ADN genómico extracção

Amostras de sangue periférico foram colhidas em tubos revestidos com EDTA e armazenadas a -70 ° C. O DNA foi extraído a partir de células de sangue utilizando o Kit AxyPrep Sangue DNA genômico Maxiprep (Axygen BioScience, Inc., Union City, CA, EUA)

A amplificação do gene e análise de polimorfismo:.

regiões de DNA contendo SNPs alvejados foram amplificados utilizando multi-PCR com o sistema GeneAmp PCR 9700 (Applied Biosystems, Inc., Carlsbad, CA, EUA). As condições para PCR foram as seguintes: incubação inicial a 95 ° C durante 2 min, seguido de 45 ciclos de 95 ° C durante 30 s e hibridação a 56 ° C durante 30 s e 72 ° C durante 60 s. extensão final foi realizada por incubação a 72 ° C durante 5 min. Os produtos de PCR foram purificados por adição da enzima SAP, o qual foi utilizado como um molde para a amplificação de SNPs por reacções de alongamento de iniciadores com ddNTP. A extensão do iniciador foi realizada utilizando os seguintes passos sequenciais: a incubação inicial a 95 ° C durante 30 s; desnaturação a 95 ° C durante 5 s; cinco ciclos de recozimento a 52 ° C durante 5 s e extensão a 80 ° C durante 5 s; 40 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 5 s, emparelhamento a 52 ° C durante 5 s e extensão a 80 ° C durante 5 s; extensão final a 72 ° C durante 53 min. A genotipagem dos produtos de reacção de extensão foi efectuada utilizando a laser assistida por matriz tempo de dessorção de ionização de voo MS (MLDI-TOF MS) [25].

A análise estatística

O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi usada para determinar se as freqüências genotípicas e alélicas, tanto o paciente e os grupos de controle eram representativas de frequências na população em geral. As avaliações de construção haplótipo e desequilíbrio de ligação foram realizados utilizando Haploview 3,2 software (https://www.broad.mit.edu/mpg/haploview/). Diferenças no genótipo e do alelo frequências foram examinadas usando o qui-quadrado (χ

2) teste. OR ajustadas com base na idade, sexo, tabagismo, e estado de beber foram calculados utilizando regressão logística e regressão logística incondicional analisa. análise de regressão logística incondicional foi usada para acessar os efeitos combinados de SNPs e exposição ao tabaco /álcool [26], [27].

O tabagismo foi quantificada usando a fórmula do índice de fumar (SI = pack-year = número de cigarros por dia /20 x anos de tabagismo), e os indivíduos foram classificados como leves ou pesadas fumantes com base em valores de SI de ≤ 20 ou 20, respectivamente [28]. Beber foi quantificada através do índice de beber (DI = ml de bebidas por dia x anos de beber), e os indivíduos foram classificados como leves ou pesadas bebedores com base em valores de DI de ≤ 60 ou 60, respectivamente [29].

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS 20.0 software. Um valor de P . 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

características Assunto

As informações demográficas para os sujeitos do estudo em ambos os grupos estão resumidos na Tabela 2. Houve não houve diferenças estatisticamente significativas em relação ao sexo (P = 0,643) ou a idade (média = 63,5 anos no grupo de pacientes vs. 62,3 anos no grupo controle, P = 0,678) dos indivíduos nos dois grupos. No entanto, os machos responderam por 96,7% dos indivíduos inscritos no grupo de pacientes (P 0,001). A maioria dos indivíduos de ambos os grupos relataram uma longa história de tabagismo e /ou beber, mas havia mais fumantes na coorte de paciente do que no grupo controle (86,4% vs. 65,6%, P 0,001). Fumantes pesados ​​apresentaram significativamente (P 0,001) aumento do risco de câncer de laringe (OR = 5,552, IC 95%: 4,069-7,574), enquanto que o risco para os fumantes leves não foi significativa (OR IC = 1.299, 95%: 0.913- 1,848, P = 0,164). O efeito de beber álcool no risco de cancro da laringe foi semelhante ao produzido por fumar (P 0,001), e houve mais bebedores na coorte de paciente do que no grupo de controlo (69,4% vs 49,4%, respectivamente, P 0,001). Além disso, beber pesado foi associado com um risco significativo para o desenvolvimento de câncer de laringe (OR = 4,085, IC 95%: 3,113-5,361, P 0,001) CI, que este risco entre os bebedores de luz não foi significativa (OR = 0,949, 95% :. 0,693-1,298, P = 0,741)

alelo e distribuição dos genótipos

freqüências alélicas e genotípicas para os três SNP loci (CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 3 C4326G e CYP2E1 * 5 G-1293C) estão resumidos na Tabela 3. as distribuições do alelo e genotípicas destes três loci foram consistentes com o equilíbrio de Hardy-Weinberg (χ

2 = 0,270, P = 0,603; χ

2 = 0,045, P = 0,832; χ

2 = 3.127, P = 0,077; respectivamente). As freqüências alélicas para CYP1B1 * 2 355T, CYP1B1 * 3 4326G e CYP2E1 * 5 -1293C foram 35,2, 8,2 e 15,5%, respectivamente, no grupo de pacientes, e 20,2, 13,2 e 8,3%, respectivamente, no grupo de controlo ( P 0,05). As frequências dos genótipos nestes três loci nas duas coortes foram significativamente diferentes (P 0,001, respectivamente), e as frequências do genotipo selvagem no paciente e controle de coortes também foram significativamente diferentes (64,5% vs. 36,6 %, P 0,001; 15,2% vs. 24,8%, P 0,001; 20,3% vs. 15,3%, P . 0.001, respectivamente)

SNPs individuais e risco de câncer de laringe

indivíduos com o GT ou genótipo TT (GT + TT) no CYP1B1 * 2 lócus G355T demonstraram um risco significativamente maior de desenvolver câncer de laringe de indivíduos com o genótipo GG (bruto OR = 3,141, IC 95%: 2,483-3,974, P 0,001), e esta diferença entre grupos de genótipos permaneceu significativa mesmo após o ajuste para diferenças de idade, sexo, tabagismo e hábitos de consumo (OR ajustado CI = 2.657, 95%: 2,078-3,398, p . 0.001)

Em contraste, indivíduos com o genótipo GG CG ou no CYP1B1 * 3 C4326G lócus demonstraram um risco significativamente menor de desenvolver câncer de laringe em comparação com indivíduos com o genótipo CC (bruto OR = 0,545, 95 % CI: 0,407-0,729, P 0,001). valores ajustados também mostrou significância estatística: (OR ajustado = 0,562, IC 95%: 0,414-,763, P 0,001)

Indivíduos com o GC ou CC genótipo na CYP2E1 * 5 G-1293C lócus também. mostrou um risco significativamente maior de câncer de laringe em comparação com indivíduos com genótipo GG (bruto OR = 1,773, IC 95%: 1,330-2,362, P 0,001), enquanto indivíduos heterozigotos para o genótipo CC mostrou um risco muito maior (bruto OR = 6.240 , IC 95%: 2,876-13,540, P 0,001). Os valores ajustados também mostrou significância estatística: (para GC + CC, ajustado ou CI = 1.938, 95%: 1,426-2,633, P 0,001; para CC, ajustado ou CI = 8.718, 95%: 3,785-20,076, P 0,001)

efeito conjunto de SNPs na susceptibilidade ao câncer de laringe

a distribuição de haplótipos nas duas coortes e resultados das análises estatísticas relevantes estão resumidos na Tabela 4. Seis dos oito haplótipos. possivelmente associada com o cancro da laringe foram identificados nos grupos de pacientes e de controlo. O haplótipo mais comum, G

335C

4326G

-1293, foi encontrado em 56,4% dos pacientes e 67,7% dos indivíduos do grupo controle. Seis haplótipos foram encontrados para ser associado a uma susceptibilidade para cancro da laringe. Por exemplo, a T

355C

4326G

-1293 haplótipo, que contém dois alelos de alto risco (T355 e C4326), mostrou uma forte associação com o câncer de laringe do que os principais haplótipo G

335C

4326G

-1293 (OR ajustado = 1,809, IC 95%: 1,434-2,282, P 0,001). Além disso, a T

355C

4326C

-1293 haplótipo, que contém três alelos de alto risco, mostrou uma associação ainda mais forte (OR ajustado = 3,104, IC 95%: 2,135-4,512, P 0,001) . Assim, o haplótipo G

355g

4326G

-1293, que contém três alelos protetores, mostrou uma associação mais fraca com câncer de laringe do que os principais haplótipo G

335C

4326G

-1293 (OR ajustado = 0,573, IC 95%: 0,391-0,841, P = 0,004).

os genótipos nas três loci foram definidos para os indivíduos no paciente e controlar coortes. Indivíduos com genótipo GT /TT + CC + GG ou GT /TT + CG /GG + CG /CC, que contém dois alelos de risco em dois loci, demonstraram um risco significativamente maior de desenvolver câncer de laringe em comparação com indivíduos com genótipo GG + CG /GG + GG (OR ajustado = 3,331, IC 95%: 2,144-5,176, P 0,001 e ajustado OR IC = 2.418, 95%: 0,999-5,856, P = 0,050, respectivamente). Além disso, os indivíduos com três alelos de risco em todos os três loci (GT /TT + CC + CG /CC) apresentou o maior risco de desenvolver câncer de laringe (OR ajustado CI = 5.297, 95%: 3,123-8,986, P 0,001).

interações gene-ambiente e o risco de câncer de laringe

os efeitos conjuntos das três SNPs e fatores ambientais são apresentados na Tabela 5. Nossa análise mostrou que 58,5% dos pacientes expostos ao tabaco tabagismo teve o GT ou genótipo TT no locus CYP1B1 * 2 G355T, e 38,3% tinham o genótipo GG naquele lugar. Entre os pacientes que consumiram álcool, 47,6% tinham o GT ou genótipo TT e 21,7% tinham o genótipo GG. Não-fumantes com o GT ou TT genótipo apresentaram um risco maior de desenvolver câncer de laringe que os não-fumantes com o genótipo GG (OR ajustado CI = 2.190, 95%: 1,257-3,816, P = 006). Os valores correspondentes para os não-bebedores foram OR IC = 2.008, 95%: 1,361-2,963, e P = 0,001, e para os fumantes, os valores foram OR IC = 5,875, 95%: 3,950-8,739, e P 0,001. Este ou o valor, o que reflecte o efeito conjunto de ter o GT ou genótipo TT e também ser um fumante, é maior do que o valor obtido multiplicando o valor ou por ter o genótipo sozinho com o valor ou por ser um fumante sozinho (5,875 2.190 × 2.098 = 4.595). Entre os bebedores, os valores correspondentes foram OR IC = 4.518, 95%: 3,181-6,415, P 0,001. Esta OU valor também foi maior do que o valor obtido multiplicando o valor ou por ter o genótipo sozinho com o valor ou por ser um fumante sozinho (4,518 2.008 × 1.414 = 2.839). O OR valores para os fumantes pesados ​​e bebedores pesados ​​com o genótipo GT + TT foram 9,995 (P 0,001) e 8,668 (P 0,001), respectivamente. Similar efeitos conjuntos do tabagismo pesado ou beber pesado juntamente com fatores genéticos também foram indicados (9,995 2.190 × 3.515 = 7.700 e 8.668 2.008 × 2.312 = 4.642, respectivamente). Estes dados demonstram que a presença de um SNP no locus CYP1B1 * 2 G355T, quando acoplado com fumar ou beber, produz um efeito conjunto sobre a susceptibilidade de um indivíduo para o câncer de laringe. Além disso, a presença do alelo 335T, quando acoplado com fumar ou beber, de forma colaborativa aumenta o risco de cancro da laringe. Nossos resultados mostram que o efeito conjunto de dois fatores de risco é mais forte do que o efeito aditivo simples de dois fatores individuais.

Da mesma forma, tanto fumar e beber mostrou um efeito de colaboração para aumentar o risco de câncer de laringe em pacientes com a 4326C alelo selvagem no CYP1B1 * 3 C4326G lócus. Por exemplo, indivíduos com o genótipo CG + GG neste locus apresentados com um menor risco de câncer de laringe do que a daqueles com o genótipo CC e experimentar as mesmas exposições ambientais, como tabagismo (OR = 1.542 vs. OR = 2.959, P 0,05). Nós não observamos o mesmo efeito de colaboração entre o SNP na CYP2E1 * 5 lócus G-1293C e fumar ou beber.

Os resultados do prognóstico multivariada para os efeitos das interações de fatores de risco sobre o risco de câncer de laringe são apresentados na Tabela 6. os fatores ambientais (tabagismo e etilismo) e fatores genéticos (CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C) são ambos associados com a susceptibilidade de um indivíduo de desenvolver câncer de laringe (valor P para todas estas avaliações foram 0,001). O CYP1B1 alelo mutante * 2 4326G mostra um efeito protetor contra o desenvolvimento de câncer de laringe (P 0,001). Os fatores e fumo mostra /beber efeitos conjuntos de risco genéticos na ocorrência de câncer de laringe.

Discussão

O nosso estudo da população Han chinesa de caso-controle revelou que três SNPs em CYP1B1 * 2 G355T, CYP1B1 * 2 C4326G e CYP2E1 * 5 G-1293C estão associados com a susceptibilidade do indivíduo para o câncer de laringe. No grupo de pacientes, as frequências de alelos CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C foram maiores do que os do grupo de controlo, bem como a frequência do alelo CYP1B1 * 3 4326G no grupo de pacientes foi menor do que no grupo controle. Além disso, todas estas diferenças foram estatisticamente significativas. Estes resultados sugerem fortemente que os alelos CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C aumentar o risco de câncer de laringe, enquanto alelo CYP1B1 * 3 4326G pode reduzir o risco.

CYP1B1 * 2 G355T localiza no segundo exão de o gene CYP1B1 e provoca uma alteração de aminoácido Ala119Ser na enzima codificada. A mutação CYP1B1 * 2 C355T foi relatado para aumentar o risco de cancros da cabeça e pescoço [15], e Jawarowska et ai. informou que o CYP1B1 * 2 355T alelo aumenta a susceptibilidade de um indivíduo para o câncer de laringe [30]. Além disso, um estudo sobre carcinoma de células escamosas do trato respiratório encontrou uma alta frequência do CYP1B1 * 2 alelo 355T em pacientes com câncer de pulmão, sugerindo que a presença desse alelo aumentou o risco de desenvolver câncer de pulmão [31]. Finalmente, o CYP1B1 * 2 355T alelo também foi relatado para ser associado com um aumento da susceptibilidade a outros tipos de câncer, como de mama e cancro do endométrio [32]. Em nosso estudo, descobrimos que entre os indivíduos com uma história de exposições ambientais semelhantes, esses indivíduos portadores do CYP1B1 * 2 355T alelo (genótipo GT + TT) apresentaram um risco significativamente aumentado de câncer de laringe em comparação com indivíduos com o gene de tipo selvagem (GG ) (Tabela 5). Assim, os dados de nosso estudo e outros estudos têm mostrado consistentemente que o CYP1B1 * 2 alelo G355T está ligada à suscetibilidade ao câncer. alelo de mutação (CYP1B1 * 2 355T) também podem aumentar o risco de cancro da laringe, possivelmente devido ao aumento da actividade catalítica para 17β-estradiol 4-hidroxilação contribuído pelo que a mutação [12]. No entanto, o mecanismo subjacente ao efeito desse alelo em promover o risco de câncer ainda não está claro e requer uma investigação mais aprofundada.

CYP1B1 * 3 C4326G localiza no terceiro exão do gene e provoca uma alteração de aminoácidos Leu432Val na enzima codificada . Enquanto o CYP1B1 * 3 mutação C4326G foi relatado para aumentar a susceptibilidade de um indivíduo para cancros da cabeça e pescoço [8], [33], de Tai et ai. relataram que esta mutação não foi associada com a susceptibilidade a um ou outro carcinoma de células escamosas da hipofaringe ou cancro da laringe [28]. No entanto, outro estudo encontrou uma menor frequência de alelo mutação CYP1B1 4326G em pacientes com cancro do cólon, o que indica que este alelo pode reduzir o risco de cancro do cólon e até mesmo exercer um efeito protetor [34]. É inteiramente possível que as discrepâncias encontradas entre estes resultados sobre o efeito do alelo mutação CYP1B1 4326G no risco de câncer pode derivar de diferentes etnias, números de assunto, e SNPs adicionais incluídos nos estudos.

Em nosso estudo, mutação alelo CYP1B1 4326G foi associada a uma diminuição do risco de câncer de laringe (Tabela 3). Um possível mecanismo subjacente a este efeito protector pode ser que a conformação alterada enzima produzida pela substituição de aminoácidos pode levar a uma diminuição da capacidade enzimática ou diminuída para activar agentes cancerígenos.

CYP2E1 * 5 G-1293C, também conhecido como o Rsa I /Pst I de polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP), localiza-se na extremidade 5 ‘UTR (região não traduzida) do gene CYP2E1. A alteração de nucleótido G-1293C cria um local de reconhecimento para a enzima de restrição Pst I, e interrompe um local de reconhecimento Rsal, alterando assim a expressão do gene [21], [35]. Uma meta-análise incluindo 12562 casos foi realizada para examinar a associação entre o CYP2E1 Rsa I /Pst I RFLP e susceptibilidade à cabeça e cânceres cervicais [36]. Os resultados do estudo mostraram que o para os indivíduos com um alelo mutação (CYP2E1 * 5 -1293C) e que têm um câncer de cabeça e pescoço ou foi 1,11 em comparação com indivíduos com o tipo selvagem homozigoto CYP2E1 * 5 -1293G alelo. Este resultado indica que o CYP2E1 * 5 alelo -1293C está associada com um risco aumentado de câncer de cabeça e pescoço. Outra meta-análise de estudos de caso-controle sobre a associação entre polimorfismos CYP2E1 e cabeça e risco de câncer de pescoço mostrou que os indivíduos, especialmente os asiáticos, homozigotos para CYP2E1 * 5 -1293C tiveram um risco aumentado para o desenvolvimento de câncer de cabeça e pescoço [37]. Nosso estudo de caso-controle mostrou que a * 5 alelo -1293C CYP2E1 está associada com um risco aumentado para câncer de laringe, e é, portanto, um fator genético para a susceptibilidade ao câncer de laringe (Tabela 3).

analisa o nosso haplótipo mostrou que G

355C

4326G

-1293 foi o haplótipo mais comum encontrado em ambos os grupos de pacientes e controle (Tabela 4), e também confirmou que ambos os alelos de mutação, CYP1B1 * 2 355T e CYP2E1 * 5 -1293C , são factores genéticos de risco para o desenvolvimento de câncer de laringe, enquanto o CYP1B1 alelo mutação * 3 4326G é um fator genético de proteção. Estes achados sugerem que o tipo selvagem alelo CYP1B1 * 3 4326C pode ser um fator genético de risco para o câncer de laringe. O haplótipo T

355C

4326C

-1293, que inclui todos os três alelos de alto risco, foi associado com um risco significativamente maior de câncer de laringe em comparação com outros haplótipos e outros genótipos single-loco, o que sugere o papel a interação gene-gene no desenvolvimento do câncer de laringe. Haplótipo G

355g

4326G

-1293 foi associado com um risco de câncer de laringe menor do haplótipo G

355C

4326G

-1293, que é consistente com o efeito protetor do CYP1B1 * 3 4326G alelo, e também sugeriu um efeito genético aditivo entre estes alelos. Nossas análises destes haplótipos e genótipos mostrou que o risco de câncer de laringe aumentou com o aumento do número de alelos de alto risco, e diminuiu quando mais alelos protetores estavam presentes. Estas análises não só confirmou o efeito de risco de cada alelo indivíduo como visto por análises único alelo, mas também sugeriu um efeito aditivo conjunta de todos os três alelos.

Os estudos epidemiológicos têm mostrado que fatores ambientais, especialmente o tabagismo eo consumo de álcool , desempenham um papel importante no desenvolvimento do câncer. Os pró-carcinogéneos tais como HAP, HAA, aminas aromáticas, N-nitrosamina, e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos nitrados derivados de tabaco e acetaldeído produzido pelo metabolismo do álcool pode ser activado e ser metabolizada para formar carcinogéneos por várias enzimas do citocromo P450 [38], [39 ]. Os resultados do estudo mostraram que o tabagismo eo consumo de álcool, tabagismo, especialmente pesado e alto consumo de álcool, estão associados com um risco significativamente maior de desenvolver câncer de laringe (Tabela 5). Análises para o efeito conjunto das três SNPs mais fumar /beber no risco de câncer de laringe revelou que fumantes com dois dos alelos de alto risco acima referidos (alelo mutação CYP1B1 * 2 355T e selvagem tipo alelo CYP1B1 * 3 4326C) estavam em um significativamente risco aumentado de desenvolver cancro da laringe (Tabela 5). Além disso, este risco é muito maior do que a conferida por qualquer risco fator sozinho, sugerindo que, quando combinada com a exposição do tabaco, os dois alelos tinha um efeito sinergético para aumentar o risco de cancro da laringe. CYP1B1 é uma enzima metabólica indutível responsável pela activação de pró-carcinogéneos múltiplas, e tradução CYP1B1 é regulada por receptor de hidrocarboneto de arilo (AHR), AhR translocador nuclear (ARNT), e o factor de transcrição Sp1 [32]. Assim, o maior risco para o câncer de laringe encontrada em fumantes ou bebedores que transportam alelos CYP1B1 * 2 355T e CYP1B1 * 3 4326C pode resultar do fato de que a exposição ao tabaco ou álcool não só leva a altos níveis celulares de pró-cancerígenos derivados do tabaco e o metabolismo do álcool, mas também resulta do aumento da expressão e actividade de P-450 enzimas metabólicas que são modulados através de vários mecanismos de feedback positivo. Produtos químicos, tais como etanol, agentes aromáticos, e derivados de nitrosaminas do tabaco e o metabolismo do álcool são também substratos e indutores para CYP2E1 [40]; no entanto, apenas um número limitado de estudos têm sido realizados examinar as cruzadas interações entre fatores genéticos e fumar ou beber. Nossos dados mostraram que os efeitos conjuntos de CYP2E1 * 5 G-1293C e fumar ou beber no risco de câncer de laringe não são significativamente diferentes dos efeitos de fatores genéticos ou ambientais individuais (Tabela 5). Além disso, os nossos resultados não mostraram efeito de colaboração entre CYP2E1 * 5 G-1293C e fumar /beber, o que é consistente com os resultados de uma meta-análise relatada por Tang et al.