Abstract
O proto-oncogene
PIK3CA
tem sido bem estudada por suas mutações ativadoras e ampliações genómicas mas não polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) no cancro da tiróide. Nós investigamos SNP rs17849071 (minor alelo G e alelo grande T) em
PIK3CA
em tumores da tiróide em 503 indivíduos por PCR e sequenciamento de uma região do intron 9 transportar este SNP. Este SNP foi encontrada em ambos os tecidos normais e de tumor da tiróide, bem como em diferentes gerações de uma família estudada, confirmando que ele seja um evento genética da linha germinativa em pacientes com tumores da tiróide. Em comparação com indivíduos normais, uma prevalência significativamente menor do genótipo heterozigoto G /T no rs17849071 foi encontrada em pacientes com carcinoma folicular (FTC). Especificamente, rs17849071G /T foi encontrado em 15% (18/117) indivíduos normais vs. 1,3% (1/77) dos pacientes FTC, com odds ratio de 0,07 (IC 95% 0,01-0,55; P = 0,001). Isto representa uma redução de risco de 93% para FTC com este SNP. Em contraste, nenhuma diferença foi observada com neoplasias benignas da tiróide em que a prevalência de rs17849071G /T foi de 13,1% (17/130), com odds ratio de 0,83 (IC 95% 0,40-1,69; P = 0,72). Houve uma tendência de menores prevalências de rs17849071G T e odds ratio /em outros tipos de câncer de tireóide sem significância estatística. Encontramos também uma relação inversa interessante de rs17849071G /T com
PIK3CA
amplificação. Com número de cópias ≥4 definido como ganho de cópia, 2,9% (1/34) rs17849071G /T vs. 19,0% (67/352) rs17849071T /casos T exibida
PIK3CA
amplificação (P = 0,01). Por outro lado, 1,5% (1/68) dos casos com
PIK3CA
amplificação vs. 10,4% (33/318) dos casos sem
PIK3CA
amplificação abrigava rs17849071G /T (P = 0,01). Isso fornece uma explicação para a relação recíproca de rs17849071G /T com a FTC, uma vez que
PIK3CA
amplificação é um importante mecanismo oncogênico em carcinoma da tiróide, especialmente FTC. Assim, o presente estudo revela um fenômeno interessante que rs17849071G /T é protetor contra o FTC, possivelmente através da prevenção
PIK3CA
amplificações
Citation:. Xing JC, Tufano RP, Murugan AK, Liu D, Wand L, Ladenson PW, et ai. (2012) Single Nucleotide Polymorphism rs17849071 G /T no
Gene PIK3CA
é inversamente associado com folicular cancro de tiróide e
PIK3CA
amplificação. PLoS ONE 7 (11): e49192. doi: 10.1371 /journal.pone.0049192
editor: Jingwu Xie, da Escola de Medicina da Universidade de Indiana, Estados Unidos da América
Recebido: 07 de setembro de 2012; Aceito: 04 de outubro de 2012; Publicação: 21 de novembro de 2012
Direitos de autor: © 2012 Xing et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado pelos Institutos Nacionais de Saúde concessão R01CA134225. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer de tireóide é o tumor maligno mais comum do sistema endócrino, com 56,460 novos casos e 1.780 mortes relacionadas estimados para 2012 e uma incidência ainda crescendo rapidamente nos Estados Unidos [1]. O câncer de tireóide pode ser histologicamente classificados em câncer de tireóide papilar (PTC), carcinoma folicular da tiróide (FTC), cancro da tiróide anaplásico (ATC), e cancro medular da tiróide (MTC), que representam cerca de 80%, 15%, 2%, e 3% de todas as neoplasias da tiróide, respectivamente [2], [1]. PTC, FTC e ATC derivam de células da tireóide epiteliais foliculares enquanto MTC deriva de células C parafoliculares. Derivada de células da tireóide epiteliais foliculares também são as neoplasias benignas da tiróide muito mais comuns, incluindo adenomas da tiróide e hiperplasia. Um incomum FTC-like, mas histologicamente e cancro da tiróide geneticamente distintos, o câncer de células Hurthle tireóide (HTC), também é derivada de células da tireóide foliculares-epitelial. FTC e PTC são geralmente diferenciadas cancro da tiróide. ATC é uma forma indiferenciada e agressivo de cancro da tiróide [2].
alterações genéticas oncogênicos são a força motriz para o desenvolvimento e progressão de tumores da tiróide e têm sido extensivamente estudada nos últimos anos. Exemplos clássicos incluem
BRAF
mutação no PTC e ATC [3], [4],
Ras
,
PIK3CA
(que codifica a subunidade catalítica PIK3CA-o p110α de fosfatidilinositol 3- quinase ou PI3K), e
PTEN
mutações em neoplasias da tiróide benigna, FTC e ATC [5] – [8], e
RET
mutação no MTC [9]. Nós já tinha encontrado amplificações genéticas comuns do
gene PIK3CA
em carcinoma da tiróide [10], o que foi confirmado em vários estudos posteriores [11] – [15]. O ganho cópia genômica de
gene PIK3CA
é funcionalmente importante, pois está associada à expressão robusta da proteína PIK3CA em carcinoma da tiróide [11]. PIK3CA é um componente chave da via PI3K /Akt via de sinalização que desempenha um papel importante no crescimento e proliferação celular e a tumorigénese [15] – [17] (Fresno et ai, 2004; Jiang BH e Liu LZ, 2009). PI3K catalisa a fosforilação do grupo 3′-OH do anel inositol em fosfolípidos de inositol, levando à produção de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato [PI (3,4,5) P3] e PI (3,4) P2. Através da interacção com estas últimas moléculas na membrana plasmática da célula, a Ser /Thr quinase Akt é translocado para a membrana de plasma onde se torna fosforilada e activada pela quinase dependente de fosfoinositido. Activado Akt transduz a sinalização ainda por fosforilação vários substratos de proteína a jusante, o que acaba alteram a expressão de genes. Mutações ativadoras e ampliações genómicas do
gene PIK3CA
foram encontrados também em muitos outros cancros humanos [18] – [20]. Portanto, através mutações ativadoras ou amplificação genómica, o
gene PIK3CA
desempenha um papel oncogênico importante na tumorigênese humana. Curiosamente, entre os tumores da tiróide diferenciado,
PIK3CA
copiar ganho ocorre mais comumente em FTC [10] – [12], de acordo com o fato de que a activação aberrante da via PI3K /Akt desempenha um papel particularmente importante na tumorigênese da FTC entre estes tumores [7], [8].
Alguns polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) em vários exons do
gene PIK3CA
também foram encontrados, embora a sua importância funcional no cancro humano não é clara [21], [10]. No presente estudo, investigou-se a relação de um SNP, rs17849071 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?rs=rs17849071), no
gene PIK3CA
com vários tipos de tumores da tiróide. Em contraste com todas as alterações genéticas oncogénicas mais comuns que estão associadas com alto risco de cancro, este SNP foi associada com um risco significativamente reduzido de desenvolvimento de FTC e
PIK3CA
amplificação, adicionando uma dimensão inovadora para as matrizes genéticos na tiróide tumorigênese.
Materiais e Métodos
tecidos humanos e isolamento de ADN
tecidos tumorais tiróide humana ou sangue foram obtidas após a aprovação do conselho de revisão institucional (IRB) da Johns Faculdade de Medicina e de ADN genómico Hopkins University foi isolado como anteriormente descrito [10], [11], [15]. Necessárias autorizações paciente informado por escrito foram obtidas conforme aprovado pelo nosso IRB. Resumidamente, para o isolamento de ADN a partir de tecidos embebidos em parafina, as amostras foram primeiro tratados durante 8 h à temperatura ambiente com xileno, seguido de dois-1 h tratamentos adicionais com xileno. digestão do tecido foi realizada com 1% SDS e 0,5 mg /ml de proteinase K (Invitrogen, Carlsbad, CA) a 48 ° C durante 48 h. Para facilitar a digestão, um meio-intervalo adição de uma alíquota de cravação de 20% de proteinase K foi adicionada duas vezes por dia. O DNA foi subsequentemente isolado por procedimentos de extracção com fenol-clorofórmio e precipitação com etanol padrão. Para isolar células brancas do sangue (WBC), cinco ml de sangue foi misturada com 40 ml de tampão de Tris 20 mM (pH 7,0) contendo 5 mM de MCl
2. Após a lise das células vermelhas do sangue (RBC), a mistura foi centrifugada para sedimentar o WBC e o procedimento foi repetido uma vez para remover completamente RBC e hemoglobina. O sedimento branco WBC foi então sujeitos a SDS-proteinase K e digestão do DNA isolado foi completada tal como indicado acima.
Análise de rs17849071 G /T no gene PIK3CA por directa sequenciação de DNA
SNP rs17849071 105 é a
th nucleótidos do intrão 9 de o
PIK3CA gene (contado a jusante a partir do início do intrão), com o alelo principal sendo T e do alelo secundário sendo G. Uma região do
gene PIK3CA
contendo rs17849071 no intron 9 foi amplificado utilizando iniciadores GATTGGTTCTTTCCTGTCTCTG (avançar) e CCACAAATATCAATTTACAACCATTG (reverso) [18] (Samuels et al, 2004). Para aumentar a especificidade, o ADN genómico foi amplificado usando um protocolo de PCR passo-se do seguinte modo: depois de uma 3-min inicial de desnaturação a 95 ° C, o PCR foi executado com cada temperatura durante 40 segundos a 6 “step-down” passos para 2 ciclos cada. A temperatura de desnaturação era 95 ° C e a temperatura de extensão foi de 72 ° C, durante cada um dos passos “step-down”, com a temperatura de recozimento de 66 ° C, 64 ° C, 62 ° C, 60 ° C, 58 ° C, e 56 ° C, respectivamente. O PCR foi executado finalmente a 95 ° C, 54 ° C, e 72 ° C durante 40 seg cada, durante 30 ciclos, seguido por um passo de alongamento final a 72 ° C durante 5 min. Num volume final de 25 ul, a mistura de reacção de PCR continha 60-80 ng de ADN genómico, de Tris 67 mM (pH 8,8), MgCl 6,7 mM
2, sulfato de amónio 16,6 mM, 10 mM de 2-mercaptoetanol, 5% de DMSO , 1,5 mM de cada dATP, dCTP, dTTP e dGTP, 1,67 pM cada iniciadores (directo e inverso) e 0,5 unidades de ADN polimerase Taq platina (Invitrogen, Carlsbad, CA). A qualidade dos produtos de PCR foi confirmado por electroforese num gel de agarose a 1,5%, o que mostrou consistentemente uma banda única específico do produto de PCR. Os produtos de PCR foram submetidos a uma reacção de PCR com os reagentes de sequenciação Big Dye (Applied Biosystems, Foster City, CA) e o iniciador de sequenciação TTGCTTTTTCTGTAAATCATCTGTG, utilizando as seguintes definições: 95 ° C durante 30 seg x 1 ciclo; 95 ° C durante 15 seg, 50 ° C durante 15 seg, e 60 ° C durante 4 min, 35 ciclos x. A análise de sequenciação de ADN foi realizada para a identificação de SNP num ABI Prism 3700 DNA Analyzer (Applied Biosystems).
PCR quantitativo em tempo real para a análise de número de cópias do
PIK3CA gene
Detecção de
PIK3CA
número de cópias foi realizada utilizando PCR em tempo real quantitativo e um protocolo descrito anteriormente [10]. Resumidamente, a PE Applied Biosystem ABI 7900 detector sequência TaqMan (Foster City, CA) foi utilizado com primers e sondas específicas destinadas com o software da Applied Biosystems para amplificar tanto a
PIK3CA
e controle
β-actina
genes. A sonda utilizada para o
gene PIK3CA
foi 5′-6-carboxif luoresceina-tetrametilrodamina-CACTGCACTGTTAATAACTCTCAGCAGGCAAA-3 ‘, e os iniciadores foram 5′-AAATGAAAGCTCACTCTGGATTCC-3′ (directo) e 5’-TGTGCAATTCCTATGCAATCG-3 ‘ (reverso). Para o
β-
gene da actina, a sonda foi 5′-6-carboxif luoresceina-tetrametilrodamina-ATGCCCTCCCCCATGCCATCC-3 ‘, e os iniciadores foram 5′-TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3′ (directo) e 5’-TCGGTGAGGATCTTCATGAGGTA- 3 ‘(reverso). As amostras foram corridas em triplicado. Os iniciadores e sondas para a p-actina foram corridos em paralelo para padronizar o ADN de entrada. Para estabelecer as curvas padrão que usamos diluições em série de DNA extraído de células de glóbulos brancos normais com 0,01-20 ng DNA.
Análise Estatística
A razão de chances e 95% intervalos de confiança foram calculados usando o padrão estatístico método e utilizado para mostrar a associação risco de o rs17849071 heterozigótica G /T com vários tipos de tumores da tiróide em comparação com grupo de controlo normal. Ele reflete a probabilidade de ocorrência de rs17849071 G /T em um tipo de tumor da tireóide em comparação com o controlo normal. Os valores de P para a comparação com o grupo de controlo normal foram calculados utilizando dois lados teste exato de Fisher.
Resultados
O rs17849071 G /T ou T105G transversion Mudança no Intron 9 do gene PIK3CA É um linha germinal evento genético
a grande maioria dos genótipos que contêm menor alelo G no rs17849071 do
gene PIK3CA
eram heterozigotos rs17849071G /T, conforme ilustrado na Figura 1A e 1B. Em um total de 503 indivíduos, apenas 7 casos de homozigose rs17849071G /G foram encontrados, com 1 em um neoplasma da tiróide benigna, 1 em HCT, e 5 em ATC. Nosso esforço inicial era para ver se 17849071G, representando uma forma de conversão transversal T, foi realmente um evento genético da linha germinativa em pacientes com tumores da tiróide, mas não uma alteração somática. Num subgrupo de 12 casos com rs17849071G encontrados nos tumores da tiróide primárias, este SNP também foi encontrado em todos os seus tecidos normais correspondentes da tiróide. Da mesma forma, em um subconjunto de 27 casos sem rs17849071G encontrados nos tumores primários, este SNP não foi encontrada em qualquer um dos seus tecidos normais correspondentes da tiróide. Em quatro casos, cujos tumores da tiróide primária foram positivos para o SNP rs17849071G, as amostras WBC combinados disponíveis também foram positivos para este SNP. Em uma família de seis membros, um rs17849071G heterozigotos /T foi encontrado em vários deles envolvendo duas gerações (símbolos a cheio na Figura 1C). Esses dados, além de mostrar a elevada frequência de rs17849071G /T no grupo de controlo normal (Tabela 1), estabeleceu que esta SNP foi um evento genética da linha germinal em pacientes com tumor da tireóide.
apresentada na figura 1A é o homozigoto genótipo do alelo grande T em rs1784907, representando a 105
th de nucleotídeos de intron 9 da
PIK3CA
gene (contando a partir do primeiro nucleotídeo do intron downstream). A Figura 1B mostra o genótipo heterozigoto de menor alelo G e alelo grande T a rs17849071. Mostrado na Figura 1C é uma família em que vários membros, envolvendo duas gerações, abrigar o genótipo heterozigoto rs17849071G /T (símbolos a cheio).
baixa ocorrência do genótipo heterozigoto G /T em rs17849071 em folicular de tiróide
Como mostrado na Tabela 1, que resume a ocorrência do genótipo heterozigoto G /T no rs17849071, este genótipo foi um evento genético freqüente no grupo de controlo normal, ocorrendo em 18/117 (15% ) indivíduos normais. Analisou-se a relação entre este SNP com vários tipos de tumores da tiróide. frequências comparáveis de rs17849071G /T foram vistos na maioria dos tipos de tireóide tumores de 9% (10/115) PTC, 13% (17/130) neoplasias benignas, 8% (3/38) ATC, 8% (1/13) HTC, e 15% (2/13) MTC (Tabela 1). A ocorrência de rs17849071G /T nestes tumores da tiróide foi semelhante à da população normal. Em flagrante contraste, no entanto, apenas 1% (1/77) FTC nutria rs17849071G /t, representando uma prevalência muito menor do que na população normal, com uma proporção impar de 0,07 (95% CI: 0,01-0,55; p = 0,001) . Estes dados demonstram uma exclusão mútua interessante entre rs17849071G /T e FTC, sugerindo um efeito protetor da rs17849071G /T contra a FTC. Especificamente, houve uma redução de 93% na probabilidade de desenvolvimento da FTC quando o genótipo heterozigoto G /T no rs17849071 no intron 9 da
existe gene PIK3CA
. Este SNP não afetou significativamente a ocorrência de outros tipos de tumor da tireóide.
Inverse Associação de rs17849071G /T com a amplificação de PIK3CA na tiróide Tumores
Para explorar um possível mecanismo para o efeito protetor de rs17849071G /T contra o FTC, examinamos sua relação com diversas alterações genéticas em tumores da tiróide. Encontramos uma relação inversa interessante do rs17849071G heterozigotos /T com o ganho de amplificação /cópia genómica do
gene PIK3CA
. Especificamente, com o número de cópias ≥4 definido como ganho de cópia, 2,9% (1/34) rs17849071G /T vs. 19,0% (67/352) rs17849071T /casos T exibida
PIK3CA
amplificação (P = 0,01). Por outro lado, 1,5% (1/68) dos casos com
PIK3CA
amplificação vs. 10,4% (33/318) dos casos sem
PIK3CA
amplificação abrigava rs17849071G heterozigotos /T (P = 0,01). A relação inversa entre rs17849071G /T e
PIK3CA
amplificação é mais claramente mostrado na Figura 2. Esta exclusividade do
PIK3CA
amplificação por rs17849071G heterozigotos /T pode explicar como isso SNP pode proteger contra o FTC desde
PIK3CA
amplificação desempenha um papel proeminente na FTC [7], [11], [12]. Não havia nenhuma relação específica encontrada para rs17849071G /T com outras alterações genéticas, como as mutações em
Ras
,
BRAF
,
PTEN
genes e no
PIK3CA
próprio gene (dados não mostrados).
a Figura 2A mostra que nos indivíduos com genótipo heterozigótico GT em alguns casos rs17849071very foram positivas para
PIK3CA
amplificação e, correspondentemente, uma grande quantidade dos casos foram negativos para
PIK3CA
amplificação, enquanto que, por outro lado, um grande número de indivíduos com genótipo homozigoto TT abrigava
PIK3CA
amplificação. A comparação da diferença entre
PIK3CA
sujeitos a amplificação positivos e negativos do grupo GT com a do grupo TT demonstrou uma elevada significância (P = 0,01). Por outro lado, a Figura 2B mostra que, nos indivíduos com
PIK3CA
amplificação muito poucos casos abrigava heterozigotos GT genótipo na rs17849071 e, correspondentemente, um grande número de casos abrigavam TT homozigoto, enquanto que, por outro lado, um grande número de indivíduos sem
PIK3CA
amplificação abrigava GT heterozigoto. Comparação da diferença entre os sujeitos GT e TT do
PIK3CA
grupo de amplificação positivo com o da
PIK3CA
grupo amplificação negativos apresentaram um significado elevado (P = 0,01).
Discussão
estudos genéticos precedentes sobre a
gene PIK3CA
em carcinoma da tiróide têm sido quase sempre focado em alterações genéticas oncogênicos somáticos, tais como mutações ativadoras e amplificação genómica. Pouco se sabe sobre o papel do polimorfismo do
gene PIK3CA
no desenvolvimento de câncer de tireóide. O presente trabalho em rs17849071G /T representa um novo estudo genético sobre tumores da tiróide. A descoberta surpreendente foi a extremamente baixa ocorrência de genótipo heterozigoto G /T no rs17849071 no intron 9 da
gene PIK3CA
preferencialmente em FTC, associada a uma diminuição significativa proporção impar (93% de redução) para o desenvolvimento da FTC . Apenas 1,3% (1/77) dos casos de FTC vs. 15% (18/117) indivíduos normais (p = 0,001) e da média de 10,3% (52/503) de todos os indivíduos (p = 0,005) abrigava a rs17849071G /T , sugerindo que a presença de rs17849071G /T num indivíduo seria grandemente proteger contra o desenvolvimento de FTC.
Polimorfismo, particularmente SNP, é comum e é responsável por cerca de 90% de variações de sequência do genoma humano [22]. Embora a maioria dos SNPs parecem ser funcionalmente silencioso, muitos estão associados com um risco aumentado para o desenvolvimento de certas doenças ou características da doença. Alguns SNP na área de codificação de um gene pode afectar a função do produto de proteína do gene enquanto outros SNPs em regiões reguladoras podem afectar a expressão do gene de [23]. Este último grupo de SNPs ocorrem geralmente em promotores, estimuladores, silenciadores, e intrões. Elas podem afectar a expressão do gene através da alteração das propriedades de ligação de regiões reguladoras de um gene com factores de transcrição e de regulação, em última análise, a interferir com os processos de transcrição ou de splicing.
Certos SNPs foram relatados para afectar o cancro da tiróide. Por exemplo, o polimorfismo L769L do
gene RET
parecia afetar a idade de início da MTC familiar [24]. Certos
SNPs RET
gene foram mostrados para ser associado com um risco aumentado de cancro da tiróide diferenciado [25], [26]. Um alelo polimórfico XRCC3 18067T foi mostrado de forma semelhante a ser associado com câncer diferenciado da tiróide [27]. Mais extensos estudos de associação do genoma têm mostrado recentemente a associação de vários SNPs com a ocorrência de câncer de tireóide [28], [29]. Ao contrário destes SNPs promotoras do câncer da tiróide, o rs17849071G /T encontrada no presente estudo diminui o risco de FTC, o que representa um raro exemplo de SNP supressor de tumor.
Como a função supressora de tumores da rs17849071G /T foi só vi na FTC, mas não em outros tipos de tumores da tiróide (Tabela 1), parece ser verdade que esta SNP afeta um processo oncogênico que é único e fundamental para o tumorigênese da FTC. A nossa descoberta da associação inversa da rs17849071G /T com
PIK3CA
amplificação fornece um tal mecanismo que explica o efeito protector deste SNP. Como
PIK3CA
amplificação desempenha um papel proeminente na tumorigênese do câncer de tireóide, especialmente FTC [7], a diminuição significativa na ocorrência de
PIK3CA
amplificação em associação com rs17849071G /T pode concebivelmente resultar na diminuição do desenvolvimento da FTC na presença deste SNP. É também possível que o rs17849071G /T pode afectar negativamente a expressão de o
gene PIK3CA
, minimizando a sua oncogenicidade e, consequentemente, reduzir o desenvolvimento de FTC. Como o rs17849071G /T é no intrão 9 de o
PIK3CA gene, ou no meio do gene, este SNP poderia afectar a ligação e função do mecanismo de splicing, limitando assim a produção de ARNm normal do
PIK3CA
. Curiosamente, os 5 casos de rs17849071G homozigoto /G no ATC todos abrigava
PIK3CA
amplificações. Portanto, a mútua exclusividade parece ocorrer apenas entre
PIK3CA
amplificação e rs17849071G heterozigótica /T, mas não o homozigoto rs17849071G /L. No entanto, em indiferenciado ATC, o ganho cópia do
PIK3CA
podem não representar necessariamente a amplificação genómica; pode representar aneuploidia cromossômica [7], portanto, não seguindo a relação de rs17849071with
PIK3CA
amplificação em tumores de tiróide. Ele continua a ser elucidado como rs17849071G /T está ligada à supressão da
PIK3CA
amplificação. Uma possibilidade que pode ser especulado que é rs17849071G /T pode afectar a ligação de ADN com um regulador desconhecida que desempenha um papel importante no processo de amplificação do gene.
A descoberta deste novo FTC-supressor de SNP é interessante . Se isso pode ser confirmada em estudos maiores, ele irá adicionar uma nova dimensão para os atualmente conhecidos matrizes alteração genética no cancro da tiróide e representa uma nova via que desempenha um papel crítico na FTC tumorigênese. elucidação mecanicista deste fenómeno irá conduzir a importantes conhecimentos sobre os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento de FTC e para a descoberta de novos alvos terapêuticos bem. O rs17849071G /T representa também o primeiro marcador genético que prevê a ausência de FTC com alta precisão. Portanto, pode ser útil para excluir o diagnóstico da FTC em ambientes clínicos apropriados.
Reconhecimentos
Agradecemos aos autores de referências [10], [11], [15] a partir do qual alguns dos
PIK3CA
informação foi utilizada para o presente estudo.