Abstract

Tumor microenvironement é um ator importante da progressão do câncer de ovário, mas as relações entre células mesenquimais e células de cancro do ovário permanecem obscuros. O objetivo deste estudo foi determinar modificações biológicas das células de cancro do ovário “induzidas por células mesenquimais. Para abordar esta questão, usamos duas linhas de células de cancro do ovário diferentes (NIH: OVCAR3 e SKOV3) e co-cultivadas-los com células mesenquimais. Após a co-cultura das diferentes populações de células foram classificadas para estudar o seu transcriptoma e propriedades biológicas. A análise do transcriptoma revelou três grupos de genes de função biológica foram enriquecidos em contacto com células mesenquimais. Estes foram relacionados ao aumento das habilidades metastáticos (adesão, migração e invasão), proliferação e chemoresistance

in vitro

. Portanto, o contato com o nicho de células mesenquimais poderia aumentar iniciação metastático e expansão através da modificação de células cancerosas. Em conjunto, estes resultados sugerem que os caminhos envolvidos na interação hetero-celular podem ser direcionados para perturbar o perfil pró-metastático adquiriu

Citation:. Lis R, Touboul C, Raynaud CM, Malek JA, Suhre K, M Mirshahi , et ai. (2012) Interação celular mesenquimais com células do cancro do ovário Aciona propriedades pró-metastáticos. PLoS ONE 7 (5): e38340. doi: 10.1371 /journal.pone.0038340

editor: Eric Deutsch, Instituto Gustave Roussy, França |

Recebido: 09 de fevereiro de 2012; Aceito: 04 de maio de 2012; Publicado em: 30 de maio de 2012

Direitos de autor: © 2012 Lis et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Esta publicação foi possível graças a uma doação do Fundo Nacional de Pesquisa Qatar sob o seu número prêmio Programa Nacional de Pesquisa Prioridades NPRP 09-1174-3-291 e NPRP 4-640-1-096. O seu conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam necessariamente a posição oficial do Fundo de Investigação Nacional do Qatar. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

A maioria dos pacientes com câncer de ovário geralmente morrem de doença peritoneal [1]. Desenvolvimento de carcinomatose peritoneal envolve definido passos críticos, incluindo derramamento de células, a interação ea adesão ao mesoteliais camada, e proliferação na sub-mesotélio [2]. Vários relatórios descrevem um nicho pré-metastático dentro do órgão alvo, facilitando a sobrevivência de células de tumor inicial [3], [4], [5].

As células mesenquimais (MCs) são células pluripotentes que dão origem a uma variedade de tipos de células de tecido conectivo [6]. Derivadas da medula óssea células-tronco mesenquimais (BM-MSC) são recrutados em número significativo aos locais tumorais onde eles contribuem para a invasão, metástase e resistência à quimioterapia de linhas de células de cancro do ovário [7], [8], [9], [ ,,,0],10], [11]. MSC têm sido mostrados para contribuir para tumorigenicidade câncer de ovário através da produção alterada de osso Morfogenética Protein (BMP-2), levando a um aumento de células de cancro do ovário (OCC) proliferação

in vitro

e

in vivo

[ ,,,0],12]. Enquanto muitos estudos focam fatores específicos na aquisição de perfil metastático, poucos estudos estão avaliando as mudanças transcriptomic globais que ocorrem em células cancerosas após a sua interação com as células-tronco mesenquimais (MSC) [13]. Zhang S. et al.

13 relataram a modificação do transcriptoma de células de cancro da próstata induzida por interacção com o MCS. As modificações definido um novo estado pró-metastático. Compreender os caminhos afetados pela interação de células cancerosas e seu microambiente e as modificações globais induzidas é obrigatória, a fim de ser capaz de orientar caminhos específicos microambiente [13].

Aqui, nós investigamos co-cultura de dois diferentes tipos de linhas de OCC com MCs. Nós demonstramos que esta interacção aumenta a capacidade metastáticos de OCC. Usando a análise do transcriptoma e ensaios funcionais; demonstra-se que os genes relacionados com a adesão celular, invasão, migração, proliferação e quimiorresistência são modificados mediante OCC /MC de contacto de uma maneira específica da linha celular. Nossos resultados sugerem que as vias específicas podem ser direcionados para perturbar o perfil pró-metastático adquiriu

Materiais e Métodos

Cultura celular

linhas celulares de cancro do ovário SKOV3 (HTB-77. ) e OVCAR3 (HTB-161) foram adquiridos a partir de ATCC e mantidas em cultura segundo as recomendações da ATCC (DMEM de alto teor de glucose [Hyclone, Thermo Scientific], 10% de FBS [Hyclone, Thermo Scientific], solução a 1% de penicilina-estreptomicina-Amphotericyn B [ ,,,0],Sigma], 1X não essenciais de aminoácidos [Hyclone, Thermo Scientific]). As linhas de células de cancro do ovário foram estavelmente transduzidas por vectores lentivirais que codificam eGFP (Généthon, Evry). As células mesenquimais foram adquiridos de Células Estaminais, Inc (MSC-001F, Vancouver, CA) mantidas e expandidas em cultura utilizando MesenCult® MSC Meio Basal completado com mesenquimais Stem Cell Suplementos estimuladores (Células-tronco Inc, Vancouver, CA). A sua capacidade de se diferenciar em adipócitos, osteoblastos e chnodrocytes foi verificada de acordo com as instruções do fornecedor (dados não mostrados).

Co-culturas

Nós estabelecemos co-culturas de eGFP-OCC com BM- MC na proporção de 1:02 durante 24 horas. OCC foram diferenciado do BM-MC com base na sua eGFP e EP-Cam. As populações de células diferentes foram classificados usando fluorescência de células activadas (FACS).

fluorescente de células activadas triagem

As células foram colhidas e bloqueada em PBS-FBS a 5% com 1% de BSA-10% de FcR reagente de bloqueio (Myltenyi Biotec). suspensão de uma única célula foi analisado e classificado em SORP FACSAria2 (BD Biosciences). Os dados foram processados ​​com FACSDiva 6.3 (BD ​​Biosciences). Doublets foram excluídos pelo FSC W-× FSC H-e SSC-W × SSC-H análise, canais manchadas individuais foram utilizados para compensação e fluoróforo menos um (FMO) controles foram usados ​​para gating. eGFP fluorescência foi adquirida com 488 nm laser azul e 510/50 nm de emissão, 50 000 eventos foram adquiridos por amostra. Gráficos exibir a mediana da intensidade de fluorescência (IMF) em relação ao controlo. Durante máscara de fase pureza e separação de células foi aplicada. monoculturas OCC foram processadas e classificadas como controles.

análise

A expressão gênica

Após a separação de células mRNA foi isolado utilizando o reagente Trizol seguido de purificação utilizando o kit de extração RNAeasy da Qiagen. 200 ng de RNA total foram analisados ​​em Affymetrix GeneChip Human Genome U133 mais 2,0 Matriz. Os dados foram analisados ​​utilizando o software Partek (St. Louis, MO). Classe comparação entre condições diferentes (três réplicas biológicas) foi realizada para identificar as alterações de expressão de genes com diferenças significativas de expressão e de duas vezes aumentado ou diminuído de expressão [14], [15], [16]. Análise de Componentes Principais (PCA) foram realizadas utilizando Partek com as configurações padrão. As comparações estatísticas para dados de microarranjos foram calculados utilizando Estudantes bicaudal teste t. correcção Benjamini-Hochberg foi aplicado para limitar a taxa de detecção de falsos positivos a 5%. As comparações estatísticas para dados categóricos foram obtidos por meio do teste do qui-quadrado. Correlações foram realizadas utilizando a correlação de Pearson. Todas as outras comparações estatísticas foram calculadas usando bicaudal teste t.

Ingenuity Pathway Analysis

Foi utilizado software Ingenuity Pathway Analysis (IPA) (Ingenuity Systems, Redwood City, CA) para análise de rede de genes que foram diferencialmente regulado mediante co-cultura. Definimos listas de genes global que representa palavras-chave IPA: “Metástase”, “Proliferação de linhas de células” e “morte celular da linha de células de tumor”. Todas as bordas são apoiados por pelo menos uma referência da literatura, livro-texto ou informações canônica armazenada na base de dados de conhecimento Ingenuity Pathways.

P-

valores para enriquecimento das funções biológicas foram gerados com base na distribuição hipergeométrica e calculada com o direito de cauda exato de Fisher para 2 × 2 tabelas de contingência, conforme implementado no Ingenuity.

ensaio de adesão

96 bem as placas foram revestidas com Matrigel (BD Biosciences-). 20 000 OCC-EGFP foram semeadas por poço e incubadas em 5% incubadora de CO2 a 37 ° C durante 15, 30 e 60 minutos. As células não aderentes foram removidas por lavagem. As células aderentes foram quantificadas usando o leitor de fluorescência de placas (Wallac, Perkin Elmer) (488 nm de excitação, 510 emissão). Todas as experiências funcionais foram realizadas em triplicata biológicos. Ensaios

Migração /Invasão

8 mm poros Transwell suportes permeáveis ​​foram revestidas com Matrigel. 50 000 OCC viável (classificados de co- e monocultura) foram semeadas por poço e incubadas em 5% de CO2 a 37 ° C durante 12 e 24 horas. OCC migração e invasão foi então avaliada utilizando um leitor de placas de fluorescência (Wallac, Perkin Elmer).

Proliferação ensaio

5000 OCC foram semeadas em monocultura ou no MSC-Morange monocamada em um soro livre /meios de comunicação livres de citocinas. OCC foram contadas a cada dois dias durante 14 foram revestidas com Matrigel. 50 000 dias sob um microscópio utilizando GFP fluorescência. Cada dia dez campos foram quantificados.

chemoresistance

100000 OCC foram semeadas em monocultura ou com BM-MSC em 01:02 ratio. Mono- e co-cultura foram tratadas com 90 pM de cisplatina e Paclitaxel 6 uM (Sigma) durante 24 h. As células foram então coradas com Calce�a Red-Orange, VIVO /MORTO azul Aqua (Invitrogen, Molecular Probes), CD73-APC (BioLegend, clone: ​​AD2) de acordo com as instruções do fabricante e analisadas por FACS. OCC foram definidos como células GFP + CD73-, vivendo OCC foram definidos como calceína Vermelho-Laranja + Live /aquicultura MORTOS. 50 000 eventos foram adquiridos por amostra.

A análise estatística

testes t de Student, Fisher teste exato e testes qui-quadrado foram realizados conforme o caso. Todos os valores de p são duas faces com significância estatística avaliado nos 0,05 níveis de alfa. intervalos de noventa e cinco por cento de confiança (IC 95%) foram calculados para avaliar a precisão das estimativas obtidas. Toda a análise estatística foi feita por meio da análise de dados plug-in do Microsoft Excel 2008.

Resultados

Modificação do transcriptoma OCC mediante interação com MC

A fim de investigar modificações de OCC transcriptoma em cima do contato MC, foi elaborado um modelo de co-cultura em que OCC são cultivadas sozinho (condição de controle) ou na presença de MC (condição de teste), durante 24 h em meio citocina livre de soro livre,. OCC (condições de controlo e de ensaio) foram depois classificadas por FACS com base na sua co-expressão da molécula de adesão da célula epitelial (EpCAM, CD326) e o reforçada-Proteína Fluorescente Verde (eGFP) (Figura 1A).

Gráfico de contorno que mostra um típico discriminação de OCC e MC por FACS. OCC foram definidos como eGFP + EpCAM + (população verde), enquanto MCs foram definidos como eGFP-EpCAM- (população cinza escuro). B. A análise PCA para os ovário células cancerosas linhas sozinho ou pós-contato com as células mesenquimais

Em contacto MC, o transcriptoma das duas linhas de células testadas (NIH:. OVCAR3-eGFP e SKOV3 -eGFP) foi drasticamente alterado (Figura 1 B). NIH: OVCAR3 regulada positivamente de forma significativa e 26 genes regulados negativamente genes 10 (Tabela S1); SKOV3 regulada positivamente de forma significativa e 18 genes regulados negativamente 3 genes (Tabela S2). Mudanças observadas nas duas linhas celulares de cancro do ovário não permitem estabelecer uma assinatura genética comum sobre a MC contacto (Figura 1 B, Tabela S1, Tabela S2). No entanto usando software Ingenuity Pathway Analysis, fomos capazes de identificar três clusters função biológica enriquecidos em contato com MC: “Metástase” (NIH: OVCAR3, p = 6,48 * 10

-6; SKOV3, p = 5,42 * 10

-5), “Proliferação de linhas de células” (NIH: OVCAR3, p = 4.36.48 * 10

-7; SKOV3, p = 6,79 * 10

-6) e “A morte celular da linha de células de tumor “(NIH: OVCAR3, p = 5,68 * 10

-8; SKOV3, p = 7,62 * 10

-5). Estes grupos foram divididos entre NIH:. OVCAR3-eGFP e SKOV3-eGFP (Tabela 1)

Em conjunto, estes dados indicam que apesar da falta de sobreposição em relação aos genes para cima ou para baixo-regulado por MC contacto, os mesmos grupos de funções biológicas foram enriquecidas nos dois linha celular de cancro do ovário testadas. Neste artigo, apresentamos a idéia de que MC exercer um efeito pró-metastático em OCC, portanto, decidimos para validar os clusters de funções biológicas descritas na Tabela 1 com

in vitro

experimentações.

MCs aumentar a função biológica OCC metástase: a adesão, migração e invasão

iniciação metástase peritoneal envolve a adesão, migração e invasão através do mesotélio. Usando o software IPA, identificamos um conjunto função biológica: “metástase”, que foi enriquecido em cima do contato célula de cancro do ovário com o MC. Por isso, investigou o efeito biológico correspondente a esta modificação pró-metastático genômica realizando

in vitro

migração, adesão e invasão ensaios. Após 24 horas de co-cultura com MC, OCC (EpCAM + eGFP +) foram classificados (Figura 1A). Em seguida, testamos OCC capacidade de aderir a ECM. OCC (NIH: OVCAR3 e SKOV3) foram semeadas no Matrigel um (BD Biosciences) -Revestido bem durante 10 min, 15 min, 30 min e 1 hora. Nós definimos a adesão ao ECM como a fluorescência da GFP residual fomos capazes de adquirir após lavagem PBS. Como apresentado na Figura 2.A, tanto da linha celular de cancro do ovário mostram um aumento da adesão ao ECM: 1,38 vezes de aumento relativamente ao controlo para NIH: OVCAR3-EGFP em 10 min, e 1,94 vezes de aumento a 1 h, 1,28 e 1,85 vezes para SKOV3-eGFP em 10 minutos e 1 hora, respectivamente.

a. OCC-EGFP (NIH: OVCAR3, gráfico à esquerda e SKOV3, quadro da direita) foram semeadas no Matrigel um (BD Biosciences) -Revestido bem durante 10 min, 15 min, 30 min e 1 hora. O aumento da adesão ao ECM é observada quando OCC foram preventivamente cultivada com MC (barras cinza claro) em relação ao controle (barras cinza escuro). B. Esquema representando o ensaio de invasão e migração. C. Ordenado OCC foram semeadas em (des) transwells revestidos e sinal de GFP de cada poço sob a membrana revestida foi adquirido após 24 h. O aumento da migração e invasão através do ECM é observada quando OCC foram preventivamente cultivada com MC (barras cinza claro) em relação ao controle (barras cinza escuro). SEM são representados, n = 3, | p . 0,05 teste T-Student

Para executar ensaio de migração, temos semeado 8 um Transwell com a OCC classificadas após 24 horas de co-cultura com MC. Foi testada a sua capacidade para migrar através da inserção Transwell e medido o sinal de GFP de cada poço após 24 h. Observou-se 2 vezes e 2,5 vezes maior de migração com NIH:. OVCAR3 e SKOV3 após o contato MC, respectivamente

Para executar ensaio de invasão, usamos Matrigel (BD Biosciences) -Revestido 8 mm transwells. Ordenar OCC foram semeadas em transwells revestidos e sinal de GFP de cada poço sob a membrana revestida foi adquirido depois de 24 h. A migração celular foi aumentada em 2,5 vezes e 1,5 vezes para NIH: OVCAR3 e SKOV3 após o contato MC, respectivamente

Nós demonstramos aqui que MC através da interação direta com OCC foram capazes de mudar drasticamente o comportamento OCC.. Após o contato com MC OCC exibida uma maior adesão ao ECM, uma migração mais rápida e uma invasão mais eficiente através da ECM. Considerando o conjunto destas observações enfatizar o papel do MC, para melhorar, tanto a nível transcricional e funcional o potencial metastático de OCC.

As células mesenquimais sustentar a proliferação de células cancerígenas de ovário

Após a infiltração de mesotélio, o desenvolvimento de carcinose peritoneal envolve a proliferação de células de cancro do ovário no seu estroma circundante. Nós cluster de genes com base na sua função biológica, e demonstraram que os genes envolvidos na proliferação de linhas de células foram enriquecidas quando em contacto com MC OCC (Tabela 1). Por conseguinte, investigada a capacidade do MC para sustentar a proliferação de OCC. Uma vez que o uso de soro em ordem poderia prejudicar grandemente o estudo do efeito do microambiente na célula de cancro do ovário, foi realizado o ensaio de proliferação de um em um contexto livre, isento de soro das citocinas. OCC-EGFP (NIH: OVCAR3 e SKOV3) foram cultivadas isoladamente ou numa monocamada MC-Morange. Observou-se que a CM o crescimento sustentado de células de cancro pelo menos durante 15 dias, enquanto OCC foram quiescente na sua ausência (Figura 3A-C).

OCC foram cultivadas em um MC que expressam Morange ou direclty no prato de plástico. ensaio de proliferao foi realizado num meio isento de soro livre de citocina. As fotografias foram tiradas a cada dois dias, e as células GFP foram quantificados. B. Detalhe do poço no dia 14, podemos notar OCC exibir uma morfologia normal. contagem de células exibindo C. Gráfico realizado ao longo de 14 dias. OVCAR3 eGFP quando semeadas em um MC são capazes de sustentar ciclo celular em uma mídia livre citocina sem soro. Resultados semelhantes foram obtidos com células SKOV3 (dados não mostrados). SEM são representados, n = 3, | p . 0,05 t de Student Teste

MC induzir chemoresistance de células de cancro do ovário

O tratamento de câncer de ovário com carcinose peritoneal, ou seja, doença em estágio avançado, inclui a quimioterapia antes ou após a cirurgia . Nós cluster de genes com base na sua função biológica, e demonstraram que os genes envolvidos no “morte celular da linha celular de tumor” de linhas de células foram enriquecidas quando em contacto com MC OCC (Tabela 1). Por isso, investigou se MC são capazes de promover a resistência à quimioterapia OCC.

OCC foram cultivadas por 24 h na ausência ou presença de MC in, uma comunicação social livre de citocinas no soro livre. O mono- ou co-culturas foram então tratadas durante 24 horas com 90 pM de cisplatina e paclitaxel 6nm. A análise FACS anterior, as células foram coradas com um corante de viabilidade (calceína) e um corante de morte celular (Live /Dead). OCC e MSC foram discriminados na sua expressão diferencial de CD73 e eGFP, OCC foram definidos como eGFP + CD73- (figura 4.A, painel superior). tratamento viável OCC após a quimioterapia foi definida como Calce�a Alto /Vivo negativo Dead (LD) (figura 4.A, painel inferior).

A. esquema explicativo da análise FACS. B. OCC OCC ou co-cultivadas com MSC foram tratadas durante 48 horas com 90 pM de cisplatina e 6 nm de paclitaxel. Os tipos de célula foram discriminados por FACS utilizando GFP como um marcador de células de cancro, e CD73 como um marcador de MC. análise de morte celular foi realizado utilizando a coloração dupla calceína inoperante /vivo. C. Quantificação da análise de experiências de morte celular. OCC exibir uma resistência ao tratamento com quimioterapia convencional, quando co-cultivado com MC comparadas com o controlo. SEM são representados, n = 3, | p 0,05 t de Student Teste

Co-cultura de OCC com MC não modificou a viabilidade celular ou mortalidade antes da quimioterapia (Figura 4.B e 4.C).. tratamento quimioterápico resultou em 61,4% (NIH: OVCAR3) e 63,4% (SKOV3) de morte OCC (células de alta baixa, LD calceína) (Figura 4.C). Embora a morte OCC foi reduzida após a quimioterapia, com 42,3%. (NIH: OVCAR3) e 42% (SKOV3) de calceína, células de alta LD baixos na presença de MC (Figura 4.C)

Corroborando com nosso IPA resultados, demonstramos que MC não só foram capazes de enriquecer agrupamentos de genes que estão envolvidos na regulação da morte celular, mas também estavam promovendo resistência OCC (1,45 e 1,50 diminuição vezes na morte celular para NIH: OVCAR3 e SKOV3 respectivamente). à quimioterapia

Discussão

Nosso estudo demonstrou que MCs modificar OCC transcriptoma em direção a um perfil metastático. Em contacto com MC, linhas de OCC (NIH: OVCAR3 e SKOV3) enriquecida três grupos de funções biológicas: “metástase”, “Proliferação de linhas celulares”, “A morte celular da linha de células de tumor”. Nós validado que estas funções foram modificadas

in vitro.

Nossos dados indicam que o contato MC com OCC aumento da adesão, migração e invasão de /através da ECM, proliferação e resistência à quimioterapia. Isto é consistente com relatos de MCs modificar o comportamento células cancerígenas de ovário [7], [8], [11], [12], [17].

A cavidade peritoneal é revestida por uma camada única contínua de mesotelial células [18]. As células mesoteliais são descritos na literatura como a primeira linha de defesa contra todos os tumores metastizados abdominalmente. Por conseguinte, o desenvolvimento de carcinose peritoneal em cancro do ovário envolve várias etapas fundamentais: a adesão e depuração para /da camada mesotelial, migração e invasão através do mesotelial e camadas de sub-mesoteliais, e proliferação das células de cancro do ovário [2], [19 ]. Enquanto as células mesoteliais foram descritos para inibir a adesão de células de cancro do ovário e [20], os fibroblastos associados a carcinoma (CAF) mostrar os efeitos opostos [12], [20] invasão. Em nosso estudo, nós demonstramos que as células mesenquimais (MC) aumentou ovário células cancerosas adesão e invasão. Isto está de acordo com dados de Kenny e al onde eles descritos células mesenquimais derivadas de fibroblastos promovem a migração de células do cancro do ovário e invasão de um modo dependente de MMP2 [21]. Recentemente, eles também demonstraram o papel de adipócitos na progressão do cancro do ovário [22]. Digno de nota, MC são descritos a se diferenciarem em adipocitos CAF e quando eles são expostos a células de cancro do ovário sobrenadante [11], [17]. Em conjunto, estes dados demonstram que a linhagem mesenquimal (MC, CAF, adipócitos) constitui um nicho permissiva para as células de câncer de ovário, e poderia explicar o tropismo peritoneal de tumor crescimento metastático de ovário.

Neste estudo demonstramos que MC sustentar a proliferação de células de cancro do ovário em um contexto livre, citocina livre de soro. Estes dados obtidos in vitro, estão em corroboração com vários no relatório vivo. Por exemplo, Pasquet e al. demonstraram que ascite mesenquimais derivadas células estromais promover o crescimento do tumor do ovário em ratinhos nus [9]. Esta capacidade das células estromais mesenquimatosas derivadas de ascites para promover o crescimento do tumor do ovário foi explicado por meio da indução da proliferação de células do cancro do ovário, e por um aumento da angiogénese [9]. Mais recentemente, Mac Lean e al. mostraram que a CM também pode aumentar a heterogeneidade do tumor do ovário. secreção alterada de BMP2 por MCs é capaz de aumentar o número de células estaminais do cancro do ovário e, consequentemente, estimulam o crescimento do tumor do ovário em um rato imuno-comprometido [12]. Outro componente da linhagem mesenquimal, os adipócitos, também foi relatado para aumentar in vitro e no crescimento do tumor in vivo, fornecendo energia para as células cancerígenas, através da produção de ácidos gordos [22]. O papel do ácido gordo na biologia celular do cancro do ovário se recentemente emergente. Um trabalho recente mostrou que chemoresistance foram induzidos por MC através da liberação de ácidos graxos induzida por Platinium [23]. Estes ácido gordo demonstrou a capacidade, no contexto de um xenoenxerto, para proteger OCC de numerosos agentes quimioterapêuticos [23]. Uma vez que o principal problema clínico em relação à doença do ovário é a recaída que emerge de uma doença mínima resistente a platina, é interessante notar que a MC e outros componentes mesenquimais são capazes de conduzir a proliferação e resistência à terapia, fornecendo um permissiva “metabólica” nicho.

Portanto MC e as células MC-derivadas determinar tanto a biologia do cancro do ovário e da resposta do câncer de ovário à terapia. Compreender as mudanças de expressão de genes que ocorrem no OCC sobre sua interação com o seu nicho MC poderia ajudar a definir novas abordagens terapêuticas. Nosso objetivo neste estudo foi descrever a relação entre as mudanças que ocorrem na linha de células de cancro do ovário ao nível transcriptomic e diferenças no comportamento celular foi observada com o ensaio de co-cultura foi realizada. Uma limitação do estudo é que a análise transcriptomic comparação dos NIH: OVCAR3 e SKOV3 em contato com MC não definiu uma mudança global compartilhada ao nível da expressão do gene. Recentemente, os atlas do genoma do câncer publicou seu trabalho em adenocarcinomas seroso do ovário [24]. Eles foram capazes de definir quatro novos subconjuntos (diferenciado, imunorreativo, mesenquimais e proliferativa) de adenocarcinomas seroso de alto grau de ovário com base em um estudo de 489 pacientes [24] expressão do gene. Uma explicação para a falta de sobreposição em mudanças de expressão do gene entre NIH: OVCAR3 e SKOV3 pode ser que cada linha celular pertence a diferente subconjunto de adenocarcinomas serosos de alto grau de ovário. Na verdade OVCAR3 e SKOV3 poderia representar diferentes tipos de células com base na análise de componentes principais (Figura 1 B). Apesar da aparente discrepância, fomos capazes de definir três grupos de genes de função biológica idênticos enriquecidos em cima MC contato que corroboraram nossos dados in vitro. Surpreendentemente, o nicho mesenquimais parece ser permissiva para dois subconjuntos diferentes de ovário seroso adenocarcinomas adesão, migração, invasão, proliferação e chemoresistance. portanto, são necessários mais estudos sobre o efeito do microambiente em cada subconjunto diferente de adenocarcinomas seroso do ovário (diferenciado, imunorreativo, mesenquimais e proliferativa) para refinar os genes envolvidos e definir abordagens terapêuticas inovadoras.

Informações de Suporte

tabela S1. A análise da expressão do gene

. Dobre alterações representa as mudanças de expressão gênica em NIH:. OVCAR3 após o contato com MC em relação ao controle

doi: 10.1371 /journal.pone.0038340.s001

(DOC)

Tabela S2. A análise da expressão do gene

. Dobre alterações representa as mudanças de expressão gênica em SKOV3 após o contato com MC em comparação com o controle

doi:. 10.1371 /journal.pone.0038340.s002

(DOC)