Abstract

Fundo

níveis de metilação de nucleotídeo intercaladas longa elementos (linha-1) são representativos do estado de metilação do genoma e crucial na manutenção da estabilidade genômica e expressão. Seu impacto prognóstico em pacientes com câncer de cólon que receberam quimioterapia adjuvante não foi bem estabelecida. Foi avaliada a associação entre o estado LINE-1 metilação e características clínico-patológicas e resultados oncológicos pós-operatórias em fase III pacientes com câncer de cólon.

Materiais e Métodos

129 fase III pacientes com câncer de cólon UICC que tinham recebido radical ressecção e FOLFOX quimioterapia adjuvante foram inscritos. metilação global foi estimada por meio da análise de tumores LINHA-1 estado de metilação usando reacção em cadeia da polimerase-bissulfito (PCR) e ensaio pyrosequencing. Demografia, dados clinicopatológicos e resultados pós-operatórios foram registrados por abstractors treinados. Medidas de desfecho incluíram recorrência pós-operatória e sobrevida livre de doença. Univariada, multivariada, e sobrevivência foram conduzidas para identificar fatores prognósticos de resultados oncológicos.

Resultados

O LINE-1 metilação de todos os 129 pacientes foi medido em uma escala de 0-100 (média de 63,3 e mediana 63,7, desvio padrão 7,1), lINE-1 hipometilação foi mais comum em pacientes com idades entre 65 anos e acima (61,7% ± 7,6% vs 64,6 ± 6,4,

p

= 0,019) e aqueles com pós recorrência terapêutica (61,7 ± 7,4 vs 64,3 ± 6,7,

p

= 0,041). Considerando ajuste de risco, LINE-1 hipometilação foi encontrado para ser um fator de risco independente de recorrência pós-terapêutica (OR ajustado = 14,1,

p

= 0,012). A análise de Kaplan-Meier indicou que os pacientes no grupo de baixo metilação teve mais curto período de sobrevida livre de doença (

p

= 0,01). Numa análise estratificada, que incluiu 48 pacientes com recorrência pós-terapêutica, verificou-se que aqueles que experimentaram mais curto período de sobrevida livre de doença (≦ 6 meses) pareciam ter menores LINE-1 níveis de metilação do que os pacientes que relataram de recorrência após 6 meses (56,68 ± 15,75 vs. 63,55 ± 7,57,

p

= 0,041)

Conclusão

Houve um risco significativamente maior de recorrência pós-operatório imediato e um curto período de doença- sobrevida livre na Fase III pacientes com câncer de cólon expositoras lINE-1 estatuto hipometilação depois de serem tratados com ressecção radical e FOLFOX quimioterapia

Citation:. Lou YT, Chen CW, Fan YC, Chang WC, Lu CY, Wu IC, et ai. (2015) LINE-1 metilação Estado correlaciona-se significativamente a recorrência pós-terapêutica em Fase III Os pacientes do cancro do cólon Receber FOLFOX-4 Quimioterapia Adjuvante. PLoS ONE 10 (4): e0123973. doi: 10.1371 /journal.pone.0123973

Editor do Academic: John Souglakos, Universidade de Creta, Grécia

Recebido: 07 de outubro de 2014; Aceito: 24 de fevereiro de 2015; Publicação: 28 de abril de 2015

Direitos de autor: © 2015 Lou et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por Kaohsiung Medical University Foundation Research (KMU-1M-30), Centro de biomarcadores e de biotecnologia drogas, Kaohsiung Medical University (KMU-TP103C03 , KMU-TP103H11) e a Concessão de Biosignature em cânceres colorretais, Academia Sinica, Taiwan. CWC e JYW recebeu o financiamento. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

tem havido um aumento constante no cancro colorectal (CRC) casos em todo o mundo nos últimos anos. De acordo com estimativas GLOBOCAN apresentados em 2008, CRC é o terceiro câncer mais comum em homens eo segundo mais comum em mulheres [1]. Devido à proliferação de dietas pouco saudáveis ​​e estilos de vida em Taiwan, CRC tornou-se a terceira causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer. Nos últimos anos, mais de 4.000 pacientes com CCR morreram anualmente (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm; acessada em dezembro de 2013). As recentes melhorias na detecção de tumores e terapia adjuvante, no entanto, aumentaram as expectativas de vida de pacientes com CCR [2]. No entanto, apesar da cirurgia curativa e quimioterapia adjuvante, ainda há um número considerável de pacientes que se deparam com a recorrência do tumor durante o período de acompanhamento. Muitos programas de vigilância pós-operatório têm sido propostos para detectar a possibilidade de recorrência numa fase precoce. Médicos pesquisadores também chegaram a um consenso sobre vigilância de rotina da fase II e III pacientes CRC que foram tratados com cirurgia curativa [3-5]. Ao mesmo tempo, muitos investigadores continuam a procurar biomarcadores sofisticados capazes de detectar eficazmente recorrência assintomática de CRC após a cirurgia. Atualmente, alguns biomarcadores são promissores, mas ainda longe de ser avaliável na maioria dos pacientes. Enquanto isso, a rotulagem dos grupos de alto risco, que são propensos à recaída parece ser outra tática entre as estratégias de vigilância pós-operatória intensiva utilizados nestas populações suscetíveis.

CRC desenvolve devido a alterações genéticas e epigenéticas. Na última década, vários estudos têm investigado o papel dos fatores epigenéticos no desenvolvimento da CRC em pacientes [6,7]. Epigenética, que tem sido descrito como uma ponte entre a genética eo ambiente, foi encontrado para ter uma estreita relação com a biologia do câncer [8,9]. alterações Epigenetic poderia ser herdado mas estes factores são igualmente reversível e pode provar ser útil na elucidação muitos aspectos ambíguos da carcinogénese e recorrência de tumor em pacientes com CCR. Além disso, desde eventos epigenéticos podem ser revertidas, somos capazes de regular o processo de modificação química, incluindo a actividade anti-neoplásica potencial [7,10].

Entre os vários eventos epigenéticos, a metilação do DNA é um componente-chave da epigenética no genoma de mamífero que resulte na adição de um grupo metilo (CH

3) na posição carbono-5 do anel citosina. Dois dos principais padrões de metilação são freqüentemente observadas em CRC: uma é a hipermetilação, que geralmente envolve ilhas CpG, eo outro é hipometilação, o que frequentemente envolve sequências de DNA repetidos [6,8]. Embora relatórios sobre hipermetilação em malignidades superam relatórios sobre hipometilação, este último parece ter se tornado um tema de intensa investigação nos últimos anos [9,11]. Além disso, os níveis de metilação podem ser afetados por técnicas de amostragem, locais de tumor, fatores ambientais, e da idade do paciente [9,12-15].

hipometilação do DNA global pode levar à instabilidade genética. Sua estreita relação com uma ampla variedade de malignidades, incluindo CRC, tem sido relatado em estudos anteriores [6,7,9]. Retroelementos, sequências repetidas de elementos-1 de comprimento, intercalados nucleares (Linha-1), ocorrem em quase 18% do genoma humano [16]. Estes retroelementos pode causar efeitos prejudiciais na célula hospedeira, mas é geralmente inibida por mecanismos supressores. No entanto, retroelementos pode contribuir para tumorigênese em diferentes contextos. metilação global pode ser medida indirectamente através da avaliação do estado de metilação de LINHA-1 [17]. Estudos anteriores demonstraram que o ensaio pyrosequencing para LINE-1 metilação é quantitativa, eficaz e reprodutível [18-20].

Recentemente, muitos estudos epigenéticos elucidaram a relação entre LINE-1 metilação e cânceres. Tem sido sugerido que o grau de LINHA-1 hipometilação serve como um factor independente na determinação dos resultados desfavoráveis ​​em pacientes oncológicos CRC [18,21,22]. Ogino et ai. descobriu que LINE-1 hipometilação é um fator de risco independente, indicando alta mortalidade específica por câncer e mortalidade global em doentes com cancro do cólon [21]. Sunami et ai. também relataram que existe uma relação linear entre a progressão da Linha 1-metilação e a progressão do tumor [23]. Goel et ai. informou que câncer colorretal hereditário sem polipose (HPNCC) foi associado com menor grau de LINE-1 metilação [24]. Além disso, alguns estudos descobriram que de início precoce CRC está associado com menor LINE-metilação e destacaram o seu papel potencial como um biomarcador de prognóstico em pacientes mais jovens CRC [18,25]. No entanto, muitos investigadores propuseram LINHA-1 como um marcador para prever promissora CRC prognóstico. Portanto, fatores de confusão mais paciente e ao tratamento de deve ser controlada para gerar conclusões mais convincentes, especialmente à luz das estratégias modernas que destacam tratamentos adaptados para diferentes estágios de CRCs.

Assim, neste estudo, focado exclusivamente sobre a população câncer de cólon estágio III. Nós investigamos a tumoral LINE-1 estado de metilação de fase III, os doentes com cancro do cólon depois que eles foram tratados com ressecção radical e FOLFOX quimioterapia adjuvante. Neste estudo, foi dada especial atenção aos seus resultados oncológicos, incluindo recorrência pós-operatória e mortalidade específica por cancro. Ao controlar outros fatores prognósticos potenciais, procurou-se analisar o impacto prognóstico da LINE-1 metilação no estágio III pacientes com câncer de cólon.

declaração Materiais e Métodos

Ética

A estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board do Hospital Universitário Kaohsiung Medical (KMUHIRB-20120043) em Kaohsiung, Taiwan. Todos os participantes do estudo assinaram um termo de consentimento informado-.

Os sujeitos do estudo

Foram analisados ​​retrospectivamente os registros de todos os pacientes com câncer de cólon que foram tratados cirurgicamente em Kaohsiung Medical University Hospital, entre janeiro de 2008 e julho 2012. Um total de 150 pacientes fase III de câncer de cólon que foram submetidos à ressecção radical e subsequente FOLFOX quimioterapia adjuvante foram inicialmente matriculados. Quatorze pacientes foram excluídos como amostras de tecido ideais não estavam disponíveis. Entre os 136 pacientes restantes, sete foram excluídos por dados clínicos dos pacientes estava incompleta. Assim, um total de 129 pacientes qualificados para a análise final (Fig 1). Todos os pacientes receberam acompanhamento regular em intervalos de 2-3 meses até a morte ou o fim de junho de 2013.

Pós-operatório quimioterapia adjuvante

Todos os participantes do estudo receberam adjuvante FOLFOX-4 quimioterapia de acordo com as diretrizes do centro para tratamento de câncer. O protocolo seguinte foi utilizado para administrar FOLFOX-4 quimioterapia: oxaliplatina 85 mg /m

2 foi infundida dentro de um período de duas horas no Dia 1; leucovorina 200 mg /m

2 foi infundido concorrentemente com oxaliplatina dentro de um período de duas horas no dia 1, seguido de um bolus de 5-FU 400 mg /m

2; em seguida, uma infusão contínua de 5-FU 600 mg /m

2 foi administrado ao longo de 22 horas. Este protocolo foi repetido a cada duas semanas × 12 ciclos.

Os dados clínicos coleção

As características dos pacientes, incluindo idade, sexo, localização do tumor, e as características clínico-patológicas, foram obtidos a partir de registros médicos eletrônicos e fichas clínicas . características clínicas e os estágios de tumores primários foram definidos utilizando os critérios propostos pela Comissão Mista theAmerican sobre o Câncer /União de Controle do Câncer Internacional (AJCC /UICC) [26]. graduações histológicas foram classificados da seguinte forma: bem diferenciado (WD), moderadamente diferenciado (MD), ou pouco diferenciado (PD). Conforme relatado em um estudo anterior, os locais de tumor foram classificados como proximal ou distal ao ângulo esplênico [27]. invasão vascular, invasão perineural, profundidade de invasão tumoral e metástases linfonodais foram fatores particularmente categorizados antes de comparação adicional uma vez que cada fator foi considerado como um fator de risco independente [28-31].

isolamento do DNA genômico

Estes fixado em formol e-embebidos em parafina (FFRE) amostras obtidas de 129 pacientes foram revisados ​​para identificar os locais representativos de câncer. blocos de tecidos FFPE foram microdissecadas a adquirir 10 uM secções de cada amostra. tratamento com bissulfito de ADN tumoral foi então realizada com um kit de bissulfito EPITECH (Qiagen, Valencia, CA) de acordo com o protocolo do fabricante.

pirossequenciao para linha de medição 1-metilação

Em adição ao acima mencionado no processo de conversão do ADN com bissulfito (bissulfito EPITECH Kits rápida FFPE; Qiagen; No.59844 sódio), os ensaios pyrosequencing também composta de reacção em cadeia da polimerase (PCR) (Pyromark PCR Kit; Qiagen; No.978703) e sequenciação da sequência alvo por síntese de ensaio (Pyromark ouro Reagentes q24; Qiagen; No.970802). Este ensaio amplifica uma região do elemento de linha-1. As condições de PCR foram 45 ciclos de 95 ° C durante 20 s, 50 ° C durante 20 s, 72 ° C durante 20 s, seguido por 72 ° C durante 5 min. Os LINE-1 Resultados de metilação foram obtidos em uma escala contínua de 1-100 usando o ensaio pyrosequencing.

Medidas de desfecho

O desenvolvimento de recorrência do câncer de pós-operatório e sobrevida livre de doença (DFS) foram utilizados como os principais pontos finais para assegurar que as inferências causais sobre os resultados observados foram atribuídos principalmente ao câncer. O desenvolvimento de uma nova recorrência local ou lesões metastáticas distantes após a cirurgia foi considerada como recorrências pós-operatórias. Ao calcular os resultados DFS, foram excluídos os casos de mortalidade pós-operatória que ocorreram dentro de 30 dias. Os indivíduos que morreram de outras causas de CRC também foram excluídos da análise dos resultados. No que diz respeito ao resultado do tratamento para o regime FOLFOX, DFS foi definida como o tempo decorrido desde o início de FOLFOX quimioterapia para recorrência.

Análise Estatística

Os dados foram analisados ​​utilizando o Statistical Package for Ciências Sociais, versão 17.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL). teste t de Student, qui-quadrado de Pearson, teste exato de Fisher eo teste de Kruskal-Wallis foram utilizados para comparar as características demográficas e clínico-patológicas entre os grupos de acordo com suas diferentes medidas de resultado. Todas as variáveis ​​foram dicotomizada para gerar odds ratio não ajustados na análise univariada que foi realizada posteriormente. A análise de regressão logística múltipla foi realizada para identificar as variáveis ​​que foram significativamente relacionados com a probabilidade de reincidência do tumor ou sobrevida específica do câncer. Os modelos de regressão foram controladas pelos efeitos de variáveis ​​de confusão. Os resultados da análise de regressão logística foram relatados como odds ratio ajustado (OR) com intervalo de confiança de 95% (CI). A avaliação comparativa dos resultados de longo prazo foi realizada através da análise das curvas de sobrevivência utilizando o método de Kaplan-Meier. Curvas para DFS foram comparadas pelo teste de log-rank. Todos os testes de significância foram bicaudais, e

P

-Valores 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.

Resultados

Características clínicopatológicos da população paciente

A média de idade no momento da cirurgia para estes 129 pacientes foi de 61,6 anos (variação, 30-87 anos ), e 81 pacientes eram do sexo masculino (62,8%). características clinicopatológicas são detalhados na Tabela 1. Todos os pacientes foram tratados com FOLFOX quimioterapia adjuvante. O tempo médio de acompanhamento foi de 24 meses (IQR: 16,9-36). recorrência do tumor foi relatado por 48 pacientes, enquanto que 34 pacientes morreram durante o período de acompanhamento.

LINE-1 metilação análise

Embora os níveis de LINE-1 de metilação em 129 tumores do cólon (Figura 2) foram amplamente distribuídas (variação de 37,4-77,9 em uma escala de 0-100), eles ainda apresentaram distribuição normal (teste de Kolmogorov-Smirnov;

P Art 0,05). O nível de metilação média LINE-1 em ascendente, transverso, descendente, cólon sigmóide e recto, foram 66,41 ± 5,23%, 60,71 ± 7,26%, 61,53 ± 10,45%, 63,32 ± 6,34%, 61,33 ± 8,05%, respectivamente. O nível de metilação foi significativamente maior no cólon ascendente em relação a outros sítios. (

p

= 0,042) O nível de metilação média LINE-1 no grupo de sobrevivência foi de 63,8 ± 6,6% versus 61,9 ± 8,2% no grupo de mortalidade (

p

= 0,164). No que diz respeito à recorrência pós-operatória do tumor, o nível de metilação significativo LINHA-1 foi significativamente menor no grupo de recorrência em comparação com o grupo de não-retorno (61,7 ± 7,4% vs. 64,3 ± 6,7%;

P

= 0,041) . Porque não há nenhum limite universalmente aceito para definir se o nível da linha de metilação é o ideal ou anormal, dividimos os níveis de metilação em dois grupos usando um receptor operando análise característica (ROC), com sensibilidade equilibrada e especificidade. O valor de corte foi de 70,15% como a área sob a curva (AUC) foi de 0,593.

A análise univariada de LINE-1 nível de metilação

Foram examinados os LINE-1 níveis de metilação em os diferentes grupos categorizados pelas variáveis ​​listadas na Tabela 1. Para uma melhor comparação, a idade foi dicotomizada em dois grupos, com um valor de ponto de corte de 65 anos. Como mostrado na Tabela 2, na análise univariada incorporando nove variáveis, line-1 níveis de metilação demonstraram ser significativamente diferente entre o grupo com 65 anos e acima e no grupo com idade inferior a 65 anos (64,6% versus 61,7%, respectivamente;

p

= 0,019).

univariada e análise multivariada de avaliações de resultados

a tabela 3 mostra os resultados da análise univariada e multivariada com relação às avaliações de resultados de recorrência pós-terapêutica. Os tipos histológicos foram divididos em dois grupos, um incorporem bem diferenciado (WD) e espécimes moderadamente diferenciadas (MD), e as outras amostras compreendendo pouco diferenciados (PD). Devido a um número limitado de casos T1, T-estágios foram dicotomizadas em “T3 + T4” agrupamentos “T1 + T2” e. Os níveis de metilação LINE-1 foram dicotomizadas em comparação com grupos de “baixa” “altos” de acordo com um valor de corte de 70,15% gerado pela nossa análise ROC anterior. Posteriormente, a regressão logística foi aplicado com selecção para a frente. LINE-1 metilação parecia ser o único fator prognóstico independente para o resultado oncológico de recidiva tumoral pós-terapêutica (OR ajustado = 14,1,

p

= 0,012).

A análise de sobrevida

dados de acompanhamento estava disponível para todos os 129 participantes. O período médio de sobrevivência foi de 25 (IQR: 19-40) meses para os pacientes que sobreviveram, 19,1 (IQR: 12.9-26.7) meses para os pacientes que morreram, e 24 (IQR: 16,9-36) meses para a coorte total. Para avaliar as implicações de prognóstico de LINE-1 metilação, nós nos concentramos em recorrência pós-operatória e DFS depois de tomar em consideração os resultados da análise multivariada. O método de Kaplan-Meier mostrou que mais casos de recidiva pós-operatória e uma DFS médio mais curto foram observadas no grupo de metilação baixo LINE-1 (Fig 3,

p

= 0,010).

As curvas que descreve os efeitos sobre a recorrência pós-operatória de lINE-1 metilação quando divididos em pacientes com “baixo” versus “alta” metilação.

Influência da lINE-1 nível de metilação no DFS nos pacientes com pós-terapêutica recorrência

com base nas evidências sobre a DFS médio menor no grupo metilação baixo lINE-1, temos a hipótese de que há alguma associação entre lINE-1 nível de metilação e DFS no grupo de recorrência. A fim de detectar o limiar da DFS causando diferenças significativas nos níveis de LINE-1 metilação, introduzimos quatro limiares empíricos de DFS (3, 6, 9 e 12 meses) e dicotomizadas todos os pacientes da recorrência para “recidiva precoce” (DFS mais curto do que ou igual ao limiar) e “tardia recurrence2010043 (DFS) mais do que os grupos de limiar. Quando o limite de DFS é de seis meses, o grupo de recidiva precoce parecia ter uma média significativamente mais baixa LINE-1 nível de metilação (Tabela 4).

Discussão

Principais conclusões do presente estudo

neste estudo, demonstramos que lINE-1hypomethylation está associado a maior recorrência pós-operatória e um DFS mais curtos no estádio III pacientes com câncer de cólon, que se submeteram à cirurgia radical e posterior quimioterapia FOLFOX. Estudos anteriores relataram que a progressão do tumor dos pacientes de CRC, sobrevivência, ou de reincidência pode variar de acordo com o nível de LINE-1 metilação [21,23,32]. No entanto, como esses estudos incluíram várias populações e diferentes procedimentos de tratamento, houve heterogeneidade óbvio em suas descobertas. Nós só avaliou as implicações de prognóstico de LINE-1 níveis de metilação em uma população homogênea compreendendo fase III doentes com cancro do cólon, que tinham recebido a ressecção radical e FOLFOX quimioterapia adjuvante. Nossos resultados confirmam os achados anteriormente relatados de Ahn et al. sobre a influência prognóstica de LINE-1 hipometilação no palco III pacientes CRC ressecados [33]. Eles enfatizaram que hypomethyaltion DNA era um biomarcador viável de recorrência em proximal, mas não em casos de CRC distal. Ao incluir ajustes de confundimento, tais como localização do tumor (proximais em relação distal) em nosso estudo, descobrimos que níveis baixos de LINE-1 metilação (abaixo de 70,15) ainda continua a ser um fator de risco robusta tendo cerca de oito vezes de risco de recorrência pós-operatória.

Relação entre lINE-1 metilação e os locais subsite de tumores

o conceito de dois cólon é convencionalmente utilizados para indicar características moleculares distintas através da classificação dicotômica de proximal e tumores do cólon distal. Em estudos anteriores, a instabilidade cromossómica (CIN) tem sido mais frequentemente observados em CRCs distal [34]. Por outro lado, a instabilidade de microssatélites (MSI) e

BRAF

mutações são mais comuns em CRCs proximais [35-37]. No entanto, Yamauchi et al. descobriram recentemente que as frequências de alta CpG ilha methylator fenótipo (CIMP), MSI-alta, e

BRAF

mutações aumentar gradualmente a partir do reto para o cólon ascendente [38]. Este achado profundamente desafiado o conceito convencional do modelo de dois cólon que tem sido usado desde há várias décadas. Em nossos próprios dados, embora a nossa comparação de linha de 1 níveis de metilação em pacientes com câncer de cólon do lado direito e do lado esquerdo indicaram significância estatística limítrofe, observamos que o nível de metilação média foi significativamente maior no ascendente tumores do cólon em relação aos de outros sites . Recomendamos que os fatores de confusão específicos do local deve ser sempre considerada durante a realização de estudos de investigação sobre alterações genéticas ou epigenéticas.

A definição de hipermetilação ou hipometilação

Apesar de um crescente corpo de evidências suporta a importância prognóstica de lINE-1 metilação, um limiar que define se o nível de metilação medida é hipermetilado ou hypomethylated ainda não foi estabelecida. Saito et al. observado o impacto prognóstico da LINE-1 metilação no câncer de pulmão de não pequenas células mantendo um alto limiar de 90% [39]. Antelo et ai. definido LINE-1 hipometilação em pacientes CRC jovens usando um valor de corte de 65%, e afirmou que os pacientes que tiveram 65% LINE-1 metilação tinham sobrevida global mais pobre [18]. Em nosso estudo, categorizada os níveis LINE-1methylation em grupos de alto e baixo nível baseados em conceitos de pesquisadores anteriores [40,41]. A fim de identificar com precisão um valor de corte ideal para LINE-1 metilação em pacientes que relatam recorrência do tumor após a cirurgia CRC radical, que, em seguida, realizou uma análise ROC. Para os dados contínuos obtidos a partir destas amostras, a área sob a curva (AUC) foi encontrado para ser 0,593, e a 70,15% foi considerada como o valor de corte de metilação foi equilibrada com sensibilidade e especificidade. Com um valor de corte superior e pior desempenho discriminativo, nosso resultado foi ligeiramente diferente do relatado no estudo anterior por Baba et al [25]. Em uma população heterogénea compreendendo CRCs de todas as fases, eles alcançaram uma melhor AUC de 0,62, considerando um valor de corte de 60%. No entanto, há espaço para melhorar o desempenho diagnóstico como mais estudos em grande escala deve ser baseada em populações estratificadas e localizações tumorais diferentes.

LINE-1 variação metilação no CRC, com e sem recorrência

Muitos pesquisadores com entusiasmo continuou a explorar o mecanismo pelo qual lINE-1 metilação está associada com resultados oncológicos. Hipometilação do line-1 resulta em activação da transcrição de uma possível carcinogênese [9,16]. Uma expressão aumentada de LINHA-1 depois de hipometilação pode resultar em instabilidade cromossomal (CIN), que foi denominado como um fenótipo característico em cancros invasivos mais com pior prognóstico [13,16]. Além disso, Hur et ai. informou recentemente que houve evidência para provar que LINE-1 hipometilação serve como um recurso crucial na metástase do CRC, especialmente na metástase hepática [42]. Isto está em boa concordância com a diferença estatisticamente significativa entre a linha-1 níveis de metilação de grupos de recorrência e de não-retorno de nosso estudo (Tabela 2). Entre as recorrências de cancro do cólon 48 em nossa coorte estudo, houve 14 casos de metástases hepáticas. No entanto, a linha-1 níveis de metilação de pacientes com câncer de cólon com metástase hepática não mostrou uma diferença significativa quando comparados àqueles com outras recorrências. Em contraste com as perspectivas de pesquisadores anteriores, temos demonstrado uma descoberta fundamental que LINE-1 hipometilação tem alguma influência sobre a recidiva precoce (DFS duração inferior a 6 meses) na coorte que, eventualmente, experimentou recorrência. Estes resultados enfatizam o papel crucial de LINE-1 metilação no desenvolvimento de recorrência do câncer de cólon, especialmente recidiva precoce. Portanto, é necessário desenvolver estratégias de vigilância frequentes e precoces para guiar o pós-operatório de seguimento dos pacientes pertencentes ao grupo hipometilação.

Limitações

Várias limitações devem ser consideradas ao interpretar o conclusões do nosso estudo. Em primeiro lugar, alguns fatores influentes de metilação global não poderia ser controlada. Porque a população de estudo não foi prospectivamente recrutados, determinados fatores ambientais ou informações relacionadas com o paciente não pode ser gravada no momento da cirurgia. Por exemplo, ionizantes irradiação, tabagismo e atividade física foram relatados para causar variações de LINE-1 metilação [43-45]. Para evitar a introdução de mais preconceitos de recall, nós não tentar controlar esses fatores de confusão potenciais em nosso estudo. Além disso, com base neste julgamento, que poderia ser eticamente inaceitável para realizar um estudo que randomizes pacientes com ou sem a administração de FOLFOX quimioterapia adjuvante. Sugerimos que o estado de metilação pode ser usado como um factor de estratificação. Em segundo lugar, o número de participantes do estudo é limitada e a população excluída é ainda considerável. A parcela excluída possa ter algum impacto sobre os resultados globais se eles também foram incluídos. Além disso, o tempo de seguimento poderia ser estendido para elucidar o impacto prognóstico sobre a mortalidade específica por câncer. Apesar destas limitações, fomos capazes de demonstrar que as características clínico-patológicas eram distintos e prognósticos foram diferentes para os subgrupos de metilação formados a partir de uma população asiática homogênea.

Conclusão

Nossos resultados indicam que, apesar de ser tratada com a cirurgia radical e FOLFOX quimioterapia adjuvante, fase III, os doentes com cancro do cólon com recorrências pós-operatório imediato lINE-1 hipometilação encontrados e mais curto DFS.

Informações de Apoio

S1 Dataset. Os detalhes dos participantes do estudo 129

doi: 10.1371. /Journal.pone.0123973.s001

(XLS)

Reconhecimentos

Os autores agradecem Ming-Yii Hwang para fornecer útil sugestões sobre versões anteriores deste manuscrito.