Abstract
Os ácaros da orelha (
cynotis cynotis
) e tumores canal auditivo são altamente prevalentes entre raposas Ilha federal em vias de extinção (
Urocyon littoralis catalinae
) que vivem na ilha de Santa Catalina fora da costa do sul da Califórnia. Desde estudos começaram na década de 1990, quase todas as raposas examinados foram encontrados para ser infectado com ácaros da orelha, e tumores da glândula ceruminosas (carcinomas e adenomas) foram detectados em cerca de metade de todas as raposas ≥ 4 anos de idade. Trabalhamos com a hipótese de que a redução da infecção do ácaro da orelha reduziria otite externa e hiperplasia das glândulas ceruminous, um fator de risco para o desenvolvimento do tumor. Neste estudo, foi realizado um ensaio de campo randomizado para avaliar o impacto do tratamento acaricida sobre a prevalência do ácaro da orelha e intensidade de infecção, otite externa, hiperplasia da glândula ceruminous, e os níveis de anticorpos IgG e IgE específica para ácaros. O tratamento foi altamente eficaz em eliminar ácaros e reduzir otite externa e hiperplasia das glândulas ceruminous, e os níveis de anticorpos IgG específicos para ácaros foram significativamente menores entre raposas não infectados. hiperplasia da glândula ceruminous aumentou nos cronicamente infectadas, raposas não tratados durante o estudo de seis meses. Nossos resultados fornecem evidências convincentes de que o tratamento acaricida é um meio eficaz de reduzir os ácaros da orelha, e que a remoção de ácaros por sua vez, reduz as lesões de ouvido e os níveis de anticorpos IgG específica para ácaros em raposas ilha de Santa Catalina. Este estudo tem avançado o nosso entendimento da patogênese subjacente que resulta em tumores da glândula ceruminosas, e tem ajudado a informar as decisões de gestão que a conservação das espécies de impacto
Citation:. Moriarty ME, Vickers TW, Clifford DL, Garcelon DK, Gaffney PM , Lee KW, et ai. Mite Removal (2015) Ear na ilha de Santa Catalina Fox (
Urocyon littoralis catalinae
): Controlar fatores de risco para desenvolvimento de câncer. PLoS ONE 10 (12): e0144271. doi: 10.1371 /journal.pone.0144271
editor: Douglas Thamm, Universidade Estadual do Colorado, United States |
Recebido: 01 de agosto de 2015; Aceito: 16 de novembro de 2015; Publicação: 07 de dezembro de 2015
Direitos de autor: © 2015 Moriarty et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão disponíveis através Dryad (DOI: 10,5061 /dryad.12vb8)
Financiamento:. Este estudo foi financiado pela Fundação animal Morris (TWV; número de concessão D08ZO-043; https://www.morrisanimalfoundation.org), Instituto de Estudos de Vida selvagem (TWV, MEM; https://www.iws.org), Catalina Island Conservancy (JLK, CLD; https://www.catalinaconservancy.org), Greer Laboratories, Inc. (SIA, MEM; http : //www.greerlabs.com), a formação de estudantes em Pesquisa avançada, UC Davis School of Veterinary Medicine (MEM; https://www.vetmed.ucdavis.edu/research/grad_education/star). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados. Greer Laboratories, Inc forneceu apoio sob a forma de salários para os autores [KWL], mas não tinha nenhum papel adicional no desenho do estudo, recolha e análise de dados, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Os papéis específicos destes autores são articuladas na seção “autor contribuições ‘
CONFLITO DE INTERESSES:. Temos as seguintes participações: Este estudo recebeu financiamento do Greer Laboratories, Inc. Kenneth W. Lee é empregado por Greer Laboratories , Inc. Não há patentes, produtos em desenvolvimento, ou produtos comercializados como resultado deste projeto. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
A doença é uma ameaça significativa para espécies selvagens dependente de conservação, particularmente para geneticamente e populações geograficamente isoladas [1]. A Ilha de Santa Catalina (SCA) fox (
Urocyon littoralis catalinae
) é uma das seis subespécies distintas [2,3] nativa das Ilhas do Canal ao largo da costa do Sul da Califórnia (SCA: 33 ° 24 ‘N, 118 ° 24 ‘W). Em 1999, uma epidemia de cinomose suspeita dizimados 85-90% desta população, e os restantes ~ 100 raposas nesta subespécie foram listadas como ameaçadas de extinção federal [4,5]. ações intensivas de gestão, incluindo translocação, reprodução em cativeiro, e a vacinação evitou com sucesso extinção e contribuiu para o crescimento rápido da população para uma população estimada de 1.114 em 2012 [6, 7]. Embora a população está a aumentar, epidemias de doenças continuam a ser uma ameaça principal para a existência continuada das raposas SCA [8, 9].
Os tumores da glândula ceruminosas (carcinomas e adenomas) foram observadas pela primeira vez em raposas SCA em 2001 [ ,,,0],10]. Em nosso estudo complementar realizado no período de 2001-2008, Vickers et al. descobriram que aproximadamente metade das raposas SCA ≥ 4 anos de idade tinham tumores da glândula ceruminosas, e que os ácaros da orelha estavam presentes em 98% de raposas SCA [10]. Os ácaros da orelha têm sido detectados em duas outras subespécies de raposas ilha de canal nas ilhas do sul, mas nunca nos três subespécies nas ilhas do norte; no entanto, raposas SCA são as únicas subespécies que têm tumores do canal auditivo (Fig 1) [8,10]. Ainda não está claro por que algumas subespécies de raposas insulares têm os ácaros da orelha e outros não, mas os potenciais hipóteses incluem introdução histórica de ácaros da orelha de gatos selvagens para as ilhas do sul [8], bem como as possíveis diferenças na resposta imunológica ou susceptibilidade genética. avaliação quantitativa dos riscos mostrou que os tumores estão associados com hiperplasia da glândula ceruminous (CGH), que por sua vez é fortemente correlacionada com otite externa causada por ácaros da orelha (
cynotis cynotis
) [10]. Estes resultados são consistentes com a hipótese de que as raposas SCA são predispostos exclusivamente a lesões graves do canal auditivo, e que os ácaros da orelha incitar uma resposta inflamatória e hiperplasia das glândulas ceruminous que precedem e pode promover a formação de tumores e carcinogênese [10].
distribuição das raposas que não estão infectados ou infectados com ácaros da orelha, e raposas que têm tumores canal auditivo. raposas da ilha não residem em Santa Barbara ou Anacapa ilhas.
Os ácaros da orelha viver e na queratina superficial do canal auditivo e causar uma reação inflamatória na derme que aumenta a produção de cerume e detritos queratina, por vezes, obstruindo o canal auditivo, e levando a hiperplasia da glândula ceruminous [11-13]. Este exsudado ceruminous engrossado pode ser cancerígeno [14], e um estudo em cães e gatos demonstraram uma forte associação entre otite externa crônica eo desenvolvimento de hiperplasia ceruminuous glândula e neoplasia [15]. Em raposas SCA, infecção do ácaro foi visto em associação com acentuada otite externa, feridas peri-aural, celulite, localizada infecções secundárias bacterianas e septicemia, bem como carcinomas da glândula ceruminosas com invasão local e metástases à distância [8,10]. Embora os ácaros aparecem para iniciar uma cascata de eventos que podem predispor para tumores da glândula ceruminosas, nenhum estudo anterior examinou o que a remoção efeito ácaro poderia ter sobre a progressão da doença.
O objetivo deste randomizado de seis teste de campo mês foi avaliar o efeito do tratamento sobre os ácaros da orelha acaricida, lesões canal auditivo, e os níveis de anticorpos específicos de ácaro (IgG e IgE) em raposas SCA deagrupamento. Além disso, comparamos os níveis de anticorpos específicos do ácaro de raposas SCA com Ilha de Santa Cruz (SCZ) raposas (
Urocyon littoralis santacruzae
), uma subespécie estreitamente relacionadas com nenhuma evidência de ácaros da orelha, otite ou tumores ceruminosas . Nossa hipótese é que (1) a prevalência do ácaro e intensidade da infecção seria significativamente reduzido por tratamento raposas com acaricida; (2) remoção do ácaro estaria associada com otite reduzida e hiperplasia das glândulas ceruminosa; e (3) a remoção de ácaros estaria associada com níveis reduzidos de IgG específico-ácaro e IgE.
Materiais e Métodos
declaração Ética
captura de animais e de amostragem biológica da SCA raposas foi autorizado sob uma Fish and Wildlife Service EUA (USFWS) Federal 10 (a) 1 (a) autorização (No. TE744878-9) e um Memorando de Entendimento com a Califórnia Departamento de Pesca e Vida Selvagem (CDFW). Todos os procedimentos envolvendo animais foram revistos e aprovados pela Universidade da Califórnia, Davis, Institutional Animal Care e Use Committee (protocolo n ° 13366).
O campo experimental Design by
raposas SCA foram capturados em julho 2009 (t
0), setembro de 2009 (t
1), Novembro de 2009 (t
2), e janeiro de 2010 (t
3) (Tabela 1). Raposas capturadas com t
0 foram incluídos no estudo se tivessem ácaros em exame inicial, foram mais de 1 ano de idade, não tinha sido tratado para ácaros da orelha nos últimos 12 meses, e não tinha história de ressecção parede lateral anterior do canal auditivo para a remoção do tumor. raposas inscritos foram aleatoriamente designados para os grupos de comparação tratados ou não tratados em blocos de dois, que ocorreram no momento da captura e seguidos
a priori
instruções para atribuir ao acaso o primeiro raposa para um dos grupos e alocação grupo alternativo depois disso.
armadilhas Box (Tomahawk vivo Armadilha Company, Tomahawk, Wisconsin, EUA) foram definidos e iscas com uma combinação de croquete cão, comida de gato enlatada, e colar baga. As armadilhas foram colocadas ao longo de transectos perto de estradas e trilhas, em intervalos de 250-300 metros. Uma a duas armadilhas foram fixadas em cada local, com 15-44 locais utilizados cada dia. Todas as armadilhas foram verificadas todas as manhãs, e raposas foram examinados, recolhidos, tratados e liberados no local da captura. Raposas foram vendados e contido manualmente enquanto o veterinário projeto (TWV) realizaram um exame físico e avaliação otoscópica de ambos os canais de orelha. dados de base foram coletados, incluindo o número passivo transponder integrado tag, sexo, idade, peso, condição física, e observações canal auditivo. Raposas 1-3 anos de idade foram classificados como jovens e raposas ≥ 4 anos de idade foram classificados como maduros. Se a idade exata não pôde ser determinada a partir da história de captura anterior, raposas foram atribuídos a grupos de idade usando padrões de desgaste do dente [16,17], e raposas foram categorizados como os jovens se eles tinham Classe 1 padrões de exposição da dentina ou madura se tivessem Classe 2- 4 padrões de dentina exposição
Ear ácaros intensidade de infecção foi avaliada por dois métodos:. contagem de ácaros e contagem de ácaros. A pontuação subjetiva gravidade ácaro foi determinada otoscopicamente pelo veterinário projeto (Tabela 2). Depois de marcar, um cotonete foi inserido em cada canal auditivo para coletar ácaros, em seguida, colocado em um tubo de vidro e mantidos em um recipiente isolado com pacotes de gelo até ser armazenado a 4-8 ° C. Dentro de uma semana de recolha, as amostras foram enviadas em gelo seco para o laboratório na Universidade da Califórnia, Davis, e o número de ácaros foi determinada usando um microscópio de dissecação (MEM). Ambos contagem pontuação ácaro e ácaro-se a média entre as orelhas esquerda e direita para fornecer uma estimativa global de intensidade de infecção.
biópsias canal auditivo foram realizadas sob anestesia local com lidocaína gel 4% e solução injetável lidocaína infundido por via subcutânea imediatamente adjacente ao local da biópsia. Usando um soco pele estéril 5-6 mm, as biópsias foram retirados do aspecto caudal inferior dos canais de orelha verticais esquerda e direita na junção com os canais horizontais, e fixados em formalina a 10% tamponada neutra. lesões proliferativas também foram biopsiados e inteiramente removidos se obstruída completamente o canal. Após a obtenção da amostra, a pressão digital e hemostático pó foram aplicados ao local da biópsia para promover hemostasia. Um anti-inflamatório não esteróide fármaco (cetoprofeno, 2 mg /kg, Zoetis Inc., Kalamazoo, MI, EUA) e antibiótico sistémico (Enrofloxacina, 10 mg /kg, Bayer, West Haven, CT, EUA) foram administradas por via subcutânea.
uma amostra de 10 ml de sangue foi coletada por punção venosa jugular em um tubo de coleta de soro e mantido em um recipiente isolado com pacotes de gelo. Após a coagulação, as amostras de sangue foram refrigerado e centrifugado a 1176 x g (Fischer Scientific Modelo Centrific 225) dentro de 24 horas de captura; Os soros foram dispensadas em aliqots e armazenado a -80 ° C até ser utilizado para a IgG específica para ácaros teste e IgE. Foxes no grupo tratado recebeu fipronil (Frontline Top Spot, 30 mg /kg, Merial, Ltd., Duluth, GA, EUA) topicamente entre as omoplatas e ivermectina (Acarexx, 0,5 mL de solução de 0,01%, a Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc ., St. Joseph, MO, EUA) em cada orelha. Fipronil foi dada como um complemento para ajudar com o tratamento da
cynotis
. Este é um uso off-label, mas foi justificada para reduzir a probabilidade de re-infestação imediato de contato com outras raposas (maior semi-vida de ivermectina), e para evitar a reintrodução de ácaros de uma orelha à outra através da superfície da pele . Foxes no grupo de comparação não tratada não recebeu qualquer tratamento.
Os esforços para recapturar raposas do estudo foram feitas a cada dois meses durante o período de teste de seis meses (t
1, t
2, t
3). Nos dois primeiros eventos de recaptura (t
1, t
2), todas as raposas foram examinados e amostradas (ácaros da orelha e sangue), enquanto as raposas única tratados receberam acaricida (Tabela 1). No final do período de seis meses (t
3), todas as raposas foram examinados, amostrado (ácaros da orelha e sangue), biopsia, e tratou-se para maximizar o número de raposas tratados na população SCA no final do estudo (Tabela 1).
avaliação de histopatologia de biópsias
biópsias da orelha canal foram rotineiramente processadas, seccionadas a 5 mm e corados com hematoxilina e eosina embebido em parafina. Imuno-histoquímica para pan-citoqueratina foi usada para o diagnóstico do tumor definitiva. Todos histologia foi interpretado por um patologista especialista (PMG), na Universidade da Califórnia, Davis, que permaneceu cego para o tratamento. As amostras foram avaliadas para a evidência de inflamação consistente com otite (Tabela 2), CGH (Tabela 2), e a presença ou ausência de adenoma ou carcinoma da glândula ceruminosa. As pontuações da orelha esquerda e direita foram ponderados para fornecer uma estimativa global de otite e CGH.
extractos de ácaros e preparação de cavidades
foram utilizados Os ácaros da orelha isolados de raposas SCA durante as avaliações de campo para preparar soluções aquosas de antigénios específicos de ácaro. Resumidamente, os ácaros foram moídos utilizando um moinho de tecidos Tenbroeck então suspenso em tampão fosfato salino (PBS). A seguir à incubação durante a noite a -20 ° C, a suspensão foi centrifugada a ácaro 12.857 x g e o sobrenadante foi recolhido e utilizado como antigénio específico de ácaro. O teor de proteína foi determinada colorimetricamente com um ensaio de proteína BCA (Thermo Fisher Scientific, Pierce, Rockford, IL, EUA). conjuntos de tira de fundo plano Immulon 4HBH (Thermo Electron Corporation, Waltham, MA, EUA) foram utilizados ao longo e servido como a fase sólida para todos os ensaios imunossorventes ligados a enzima de ligação directo (ELISA). As tiras de 12 poços foram revestidos individualmente com extractos de ácaros (1 ug /ml) após um procedimento previamente definido [18]. Resumidamente, os extractos individuais foram diluídas em tampão de bicarbonato (pH 9,6) e 350 uL foram adicionados a cada poço identificado. A seguir à incubação durante a noite a 4-8 ° C, os poços foram lavados com PBS, bloqueadas com 1% monoetanolamina (pH 7,5), secas ao ar e armazenadas a -20 ° C em sacos de Ziplock até ser utilizado.
ELISA para específicos do ácaro de IgG e IgE
A presença do anticorpo específico para o ácaro de IgE no soro de raposa foi avaliada usando um ELISA específico para IgE canina [18, 19]. Um semelhante semi-quantitativo de ELISA específico para a raposa IgG foi desenvolvida para este estudo a fim de determinar o nível relativo de anticorpo IgG específico do ácaro em cada amostra de soro (MEM e SIA). Para o ensaio de IgG, três diluições em série de soros de raposa variando de 1: 150 a 1: 36450 foram adicionadas, em triplicado, de placas revestidas com antigénios extraídos de ácaros da orelha homogeneizadas. anticorpos anti-IgG monoclonais biotinilados foram utilizados como o reagente de sonda primária, estreptavidina fosfatase alcalina como a enzima contendo marcador secundário, e p-nitrophenylphosphatase como o substrato cromogénico [18].
Para padronizar os resultados do ensaio e permitir comparações consistentes de resultados de ensaio, através de várias execuções de ensaio e diluições de soro variáveis, todos os resultados foram normalizados para uma calibração de quatro pontos [20]. A quantidade relativa de IgG específica do ácaro foi interpolado a partir de uma curva de regressão de quatro pontos, criada representando graficamente a densidade óptica corrigida-fundo observada com cada um dos calibradores versus um valor de concentração arbitrariamente atribuído com base no esquema de diluição usado para preparar as soluções de calibrador. O nível de IgG relativamente presente na amostra de soro original é o produto do valor interpolado e o factor de diluição do soro que foi testado. Sera coletadas de Ilha de Santa Cruz (SCZ) raposas (n = 43) serviu como comparações não infectados ácaro da orelha. As raposas nesta ilha são uma subespécie separada e ácaros da orelha nunca foram detectadas no exame de raposas SCz vivas ou mortas.
A análise estatística
Para determinar se ou não tratadas e não tratadas raposas eram comparáveis no início do estudo, comparou-se a idade, o sexo, a avaliação bruta canal auditivo (ácaros da orelha, lesões proliferativas, inflamação, espessamento nodular, pus), avaliação canal auditivo histológico (otite externa, CGH, glândula sebácea hiperplasia, hiperplasia epidérmica, acantose , hiperqueratose, adenoma, carcinoma ou diagnóstico prévio de tumor), e os níveis de IgG /IgE específica para ácaros, utilizando o teste de Yates corrigido qui-quadrado, t de duas amostras-teste, e Mann-Whitney U [21]. Recapturar o sucesso, definida como a proporção de raposas inicialmente amostrados reamostrados em cada período de captura, foi comparado com o teste do qui-quadrado de Pearson [21].
Para determinar se ou não carga do ácaro da orelha diminuiu após o tratamento de raposas com acaricida , avaliou a prevalência do ácaro e intensidade de infecção. Prevalência foi definida como a proporção de raposas com uma pontuação de ácaros e /ou contagem 0, e não infectados raposas foram definidos como aqueles com os dois pontuação ácaro e contar igual a 0. A intensidade de infecção foi avaliada usando tanto pontuação ácaro e contar, e teste de classificação de Spearman foi realizado para avaliar correlação entre as duas medidas [21]. Prevalência e intensidade de infecção foram comparadas entre os grupos tratados e não tratados em cada período de captura utilizando um teste qui-quadrado de Pearson e teste de Mann-Whitney U, respectivamente. Mudanças na prevalência e intensidade de infecção de t
0 e t
3 foram avaliadas usando um teste de McNemar qui-quadrado e teste de Friedman, respectivamente [21].
Para determinar se ou não otite e CGH foram reduzidas por remoção de ácaros, as pontuações de histopatologia foram comparados entre os grupos tratados e não tratados em t
3, utilizando um teste de Mann-Whitney. Mudanças na patologia da orelha entre t
0 e t
3 foram avaliadas usando um teste de Friedman. Para determinar se os níveis de IgG e IgE foram reduzidas por remoção de ácaros, os valores foram comparados entre os grupos tratados e não tratados, em cada período de captura utilizando um teste de Mann-Whitney. Alterações nos níveis de IgG e IgE entre t
0 e t
3 foram comparados usando um teste de Friedman. níveis de IgG e IgE foram comparadas entre raposas SCA em cada período de captura e raposas SCz usando um teste de Mann-Whitney.
Como o tratamento é simplesmente um método para reduzir os ácaros, e a presença de ácaros e intensidade são os fatores de risco reais de interesse, todas as análises acima, também foram realizados comparando raposas infectados e não infectados, independentemente do grupo de tratamento. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando software SPSS (versão 20.0, IBM SPSS Statistics para Windows, Armonk, NY) com um nível alfa de 0,05.
Resultados
Cento e dezessete raposas foram inscritos no estudar: 59 foram designados para o grupo tratado e 58 no grupo não tratado (Tabela S1). Durante o curso do estudo, dois raposas, tanto a partir do grupo tratado, morreram de trauma veículo., Não se observaram efeitos adversos de amostragem ou tratamento durante os exames de recaptura. No início do estudo, não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos tratados e não tratados em relação à idade, sexo, avaliação bruta canal auditivo, a avaliação histológica canal auditivo, ou os níveis de IgG /IgE específica para ácaros (p ≥ 0,1). Recapturar o sucesso foi similar entre raposas tratados e não tratados em t
1 (39/59 = 66% e 43/58 = 74%, respectivamente) e t
3 (40/59 = 68% e 37/58 = 64%, respectivamente) (P ≥ 0,3); no entanto, menos raposas tratados foram recapturados do que raposas não tratados em t
2 (25/59 = 42% e 36/58 = 62%, respectivamente) (p = 0,03) (S1 e S2 Figs).
Efeito do acaricida sobre a prevalência do ácaro e intensidade de infecção
pontuação Ear ácaros e contar foram significativamente correlacionados (p 0,001), portanto contagem ácaro foi usado para descrever a intensidade de infecção. raposas tratados apresentaram significativamente mais baixa prevalência ácaro e intensidade da infecção, quando comparado com os não tratados raposas em t
1, t
2, e t
3 (p 0,001; Figura 2). prevalência Ácaro diminuiu significativamente no grupo tratado (p 0,001), mas não no grupo não tratado (p = 0,1) entre T
0 e T
3. No entanto, a intensidade da infecção do ácaro diminuiu significativamente em ambos os os tratados (p 0,001) e não tratados grupos (p = 0,02) entre t
0 e t
3. Estimou-se a duração da eficácia acaricida examinando um subconjunto de raposas que só foram tratados uma vez (em t
0), em seguida, re-avaliou dois, quatro ou seis meses depois. Entre as raposas tratados, 10/39 foram infectados dois meses depois, 1/7 foram infectadas quatro meses mais tarde, e 3/7 foram infectados, seis meses depois (S1 Fig)
Prevalência:. Número de raposas com ácaros /número total de raposas. Intensidade da infecção: contagem do ácaro da orelha média. Número de raposas tratados e não tratados (t
0: 59, 58; t
1: 39, 42; t
2: 24, 36; t
3: 40, 36). Intervalo de valores para intensidade ácaro mostrado entre parênteses acima de cada bar. Raposas excluídos da análise: uma raposa não tratada em t
1 e t
2, um fox tratada em t (contagem de ácaros em falta)
3 (acidentalmente tratados em t
2).
a, b, c diferença significativa (teste do qui-quadrado de Pearson, p 0,001).
d diferença significativa (teste do qui-quadrado de McNemar, p 0,001).
E, F, G diferença significativa (teste de Mann-Whitney, P 0,001).
h, i diferença significativa (teste de Friedman, p 0,001, p = 0,02)
Efeito da remoção de ácaros em otite e hiperplasia
raposas tratados apresentaram significativamente menor. otite e CGH pontuações do que raposas não tratado à t
3 (p 0,001; Figura 3). Entre T
0 e T
3, otite resultados diminuíram significativamente no grupo tratado (p 0,001), enquanto que não houve alteração significativa no grupo não tratado (p = 0,5). pontuações CGH também diminuiu significativamente no grupo tratado (p = 0,007) entre T
0 e T
3, mas em contraste com pontuações otite, as pontuações CGH aumentou significativamente no grupo não tratado (p = 0,001) entre T
0 e t
3. Os mesmos resultados foram observados quando as raposas não infectados foram comparados com raposas infectadas.
Comparação entre raposas tratados e não tratados em t
3, e entre t
0 e t
3 dentro de cada grupo. Número de raposas tratados e não tratados em t
0 e t
3 (37, 33). Intervalo de valores para otite e CGH mostrado entre parênteses acima de cada bar. Raposas excluídos da análise: três tratados e duas raposas não tratados em t
0, uma raposa ou não tratados na t
3 (biópsia não diagnóstica), 18 tratados e 22 raposas não tratados em t
3 não ( recapturado).
a, b Diferença significativa (teste de Mann-Whitney, p 0,001).
c, d, e diferença significativa (teste de Friedman, p ≤ 0,007).
Efeito da remoção de ácaros em níveis de IgG e IgE
Os grupos tratados e não tratados não têm significativamente diferentes níveis de IgG em t
1 (p = 0,08), t
2 (p = 0,3), ou t
3 (p = 0,06), mas houve uma diminuição significativa nos níveis de IgG em ambos grupos de entre T
0 e T
3 (p 0,001; Figura 4). Ambos os grupos de raposas SCA em t
0 tinham níveis de IgG significativamente mais elevadas do que as raposas SCz não infectados (p 0,001). As raposas SCA tratados mantiveram níveis significativamente mais elevados de IgG de SCZ raposas em t
1 (p 0,001) e t
2 (p = 0,01), mas a sua IgG diminuiu para níveis semelhantes aos raposas SCz em t
3 (p = 0,6). Em contraste, a SCA raposas não tratados mantiveram níveis significativamente mais elevados de IgG do que raposas SCz em tudo recapturar períodos (t
1 e t
2: p 0,001, t
3: p = 0,004)
.
nível de IgG: uma quantidade relativa de anticorpo específico para o ácaro (determinados por interpolação a partir de uma curva de calibração de quatro pontos, ver texto para explicação adicional). Número de raposas tratados e não tratados (t
0: 59, 57; t
1: 38, 42; t
2: 24, 36 t
3: 40, 36); número de raposas não infectados e infectados (t
0: 116; t
1: 31, 49; t
2: 25, 35 t
3: 42, 35); número de raposas SCz (43). Intervalo de valores para IgG mostrado entre parênteses acima de cada bar. Raposas excluídos da análise: um /raposa infectada não tratada em t
0 e um tratado de raposa /não infectados pelo t
1 (faltando nível de IgG).
a, b Diferença significativa (teste de Friedman, p 0,001).
c diferença significativa entre SCZ raposas vs. SCA tratados e não tratados raposas em todos os eventos de captura (Mann-Whitney U, P ≤ 0,01), exceto para SCA raposas tratados em t
3 (p = 0,6).
d, e, f Diferença significativa (teste de Mann-Whitney, p ≤ 0,01).
g, h diferença significativa (teste de Friedman, p ≤ 0,004).
i diferença significativa entre SCZ raposas vs. SCA infectados e não infectados raposas em todos os eventos de captura (Mann-Whitney U, p ≤ 0,001), com exceção de SCA raposas não infectados em t
2 (p = 0,1) e t
3 (p = 0,9).
Quando os níveis de IgG entre raposas SCA foram comparados com base no estado de infecção, raposas não infectados tinham significativamente mais baixos níveis de IgG do que raposas infectadas pelo t
1 (p 0,001), t
2 (p = 0,01), e t
3 (p = 0,01; Figura 4). Entre T
0 e T
3, houve uma diminuição significativa nos níveis de IgG em ambas as raposas não infectados e infectados (p 0,001, 0,004). SCA raposas não infectados tinham níveis de IgG significativamente mais elevadas do que a EZ raposas não infectadas em t
1 (p 0,001); No entanto, os níveis de IgG foram semelhantes em t
2 (p = 0,1) e t
3 (p = 0,9). Em contraste, SCA infectados raposas mantidos níveis de IgG que eram significativamente mais elevados do que raposas SCz em tudo recapturar eventos (t
1 e t
2: p 0,001, t
3: p = 0,001). Os níveis de IgE para SCA e SCz raposas estavam abaixo do limite de detecção do ensaio; Portanto, os dados não foram analisados ainda mais. ocorrência do tumor
canal auditivo
A prevalência do tumor inicial em toda a população estudada de raposas SCA foi de 21% (23/111). Seis raposas foram excluídos da análise devido à insuficiência de biópsias colhidas no início do estudo. A grande maioria dos tumores em t
0 foram detectados em raposas maduras, onde 51% (22/43) das raposas ≥ 4 anos tumores do canal auditivo expostos. Apesar de 79% (88/111) dos raposas foram inicialmente sem tumores, um número significativo destes raposas desenvolvidos novos tumores mais de ensaio de seis meses. Durante o período de captura final (t
3), 53 das raposas inicialmente tumorais -livre foram capturados e examinados, e 12 dessas raposas foram ≥ 4 anos de idade. Novos tumores canal auditivo foram observados em cinco raposas (5/53), três dos quais foram infectadas (todos os não tratados) e dois dos quais foram não infectados (um tratado, um não tratada). Mais uma vez, a maioria dos tumores foram detectados em raposas maduras, em 33% (4/12) das raposas novos tumores canal auditivo exibiram ≥ 4 anos de idade.
Discussão
Os resultados deste estudo fornecem evidências convincentes de que o tratamento acaricida é um meio eficaz de reduzir os ácaros da orelha, e que a remoção de ácaros reduz fatores de risco conhecidos para a formação de tumor da glândula ceruminous em raposas SCA. remoção Mite parece diminuir a irritação canal do ouvido crônica e produção de cerúmen excessivo, provavelmente diminuindo alterações patológicas na orelha que pode levar à formação de tumor. O facto de CGH efectivamente aumentado em um curto período de tempo dentro de raposas persistentemente infectados proporciona forte evidência de que a presença a longo prazo de ácaros é provavelmente relacionado com hiperplasia epitelial. divisão celular rápida ao longo do tempo aumenta a oportunidade de adquirir uma mutação oncogénica, levando a um crescimento descontrolado e o desenvolvimento de tumores epiteliais, como os adenomas e carcinomas ceruminosas [22]. Sem intervenção, hiperplasia no canal do ouvido continuará a avançar em raposas infectadas por ácaros, provavelmente aumentando o risco de desenvolvimento de tumores.
A diminuição da prevalência do ácaro e intensidade de infecção suporta o uso continuado de ivermectina ou outros acaricidas foneticamente para reduzir infecções ácaro da orelha em raposas SCA. Um pequeno número de raposas no grupo tratado foram infectadas com ácaros em t
3; isto pode ser atribuível a eliminação incompleta da infecção inicial, ou reinfecção. contagem Ácaro diminuiu em ambos os grupos tratados e não tratados durante o estudo de seis meses, e embora a redução foi muito mais significativa no grupo tratado, a redução ácaro dentro do grupo não tratado foi inesperado. Nós suspeitamos que a remoção mecânica de ácaros e alteração do ambiente audível durante os procedimentos de amostragem e de biópsia pode ter contribuído para esse declínio geral. A administração de lidocaína e aplicação de pó styptic para os locais de biópsia, bem como exsudato ou soro produzido pelo processo de cura, pode ter contribuído para uma redução temporária dos encargos de ácaros em ambos os grupos imediatamente após a biópsia. Qualquer processo que aumenta a inflamação e exsudato no canal auditivo pode criar um ambiente inóspito para os ácaros da orelha, muitas vezes causando ácaros abandonar o canal auditivo ou morrer, diminuindo assim fardo ácaro geral [12]. Este “efeito washout” de soro ou exsudato Também foi sugerido em raposas SCA com canais de orelha gravemente doentes, onde alguns ácaros estão presentes [10]. Também é possível que, ao reduzir a carga de ácaros em uma proporção da população, que diminuiu a taxa de reinfecção, que ocorre quase exclusivamente através do contacto directo com as raposas infectadas [12]. mudança sazonal da carga ácaro é improvável porque o clima da ilha SCA é seco e quente, com apenas flutuações moderadas de temperatura e precipitação [23],
O
.
cynotis
é um ectoparasita obrigatório que completa todas as fases da vida de seu hospedeiro [24], alta prevalência do ácaro foi detectado em raposas SCA durante todo o ano, e condição geral do corpo da raposa não parece mudar com as estações do ano ( JKL, comunicação pessoal).
Atualmente, raposas da ilha são uma espécie intensivamente gerenciados, e será no futuro previsível. Durante trapping censo em toda a ilha anual na ilha SCA, um número substancial de raposas são examinados, identificados com uma etiqueta de transponder integrado passiva e vacinados contra a cinomose e raiva.