PLOS ONE: Genes galectina-3 e Beclin1 /Atg6 em cancros humanos: utilizando o painel de tecido cDNA, qRT-PCR e Modelo de Regressão Logística para identificar Cancer Cell Biomarkers

Abstract

Fundo

biomarcadores de câncer são procurados para apoiar o diagnóstico de câncer, câncer de prever a resposta do paciente ao tratamento e sobrevivência. Identificar biomarcadores confiáveis ​​para prever a resposta ao tratamento do cancro precisa de compreensão de todos os aspectos de cancro morte celular e sobrevivência. A galectina-3 e Beclin1 estão envolvidos em duas vias coordenadas de morte celular programada, apoptose e autofagia e estão ligados a necroptosis /necrose. O objetivo do estudo foi quantificar mRNA de galectina-3 e Beclin1 em painéis de cDNA de tecido de câncer humano e determinar a sua utilidade como biomarcadores de sobrevivência da célula cancerosa.

Métodos e Resultados

Um painel de 96 cDNAs de oito (8) diferentes tipos de tecido normais e de cancro foram usadas para quantitativo em tempo real da reacção em cadeia da polimerase (qRT-PCR) utilizando ABI7900HT. Miner2.0, um de 4 e 3 parâmetro de software de regressão logística baseada na web foi usada para derivar bem polimerase eficiências individuais de reação em cadeia (E) e os valores limite de ciclo (CT). software Miner fórmula derivada foi usado para calcular os níveis de mRNA e dobre mudanças. Os rácios de cancro para os níveis normais de tecido de galectina-3 e Beclin1 foram calculados (usando a média para cada tipo de tecido). expressões de ARNm relativos de galectina-3 foram superiores para Beclin1 em todos os tipos de tecido (normal e cancro). Em tecidos de cancro, da mama, do rim, da tiróide e da próstata tinham os níveis mais elevados de ARNm de galectina-3 em comparação com tecidos normais. Níveis elevados de níveis de mRNA foram Beclin1 em cancros do fígado e da próstata, quando comparado aos tecidos normais. Mama, rim e tiróide cânceres tinham níveis baixos Beclin1 alta galectina-3 níveis e.

Conclusão

galectina-3 padrões de expressão em tecidos normais e cancerosas apoiar os seus papéis relatados no câncer humano. padrão de expressão Beclin1 apoia os seus papéis na sobrevivência de células cancerosas e na resposta ao tratamento. método de análise de qRT-PCR utilizado pode permitir estudos de alta capacidade para a geração conjuntos de biomarcadores moleculares para diagnóstico e prever a resposta ao tratamento do câncer

Citation:. Idikio HA (2011) galectina-3 e Beclin1 /Atg6 Genes em cancros humanos: Usando cDNA Tissue Panel, qRT-PCR e Modelo de Regressão logística para identificar biomarcadores de células cancerígenas. PLoS ONE 6 (10): e26150. doi: 10.1371 /journal.pone.0026150

editor: William C. S. Cho, a rainha Elizabeth Hospital, Hong Kong

Recebido: 29 de outubro de 2010; Aceito: 20 de setembro de 2011; Publicação: 19 de outubro de 2011

Direitos de autor: © 2011 Halliday A. Idikio. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O autor não tem financiamento ou apoio a declarar

competir interesses:.. O autor declarou que não existem interesses conflitantes

Introdução

biomarcadores de câncer são procurados para ajudar no diagnóstico definitivo, respostas ao tratamento e predizer a sobrevida de pacientes com câncer [1], [2]. A fim de prever a resposta ao tratamento do câncer, são necessários marcadores confiáveis ​​de cancro morte celular e vias de sobrevivência e como eles são afetados por modalidades de tratamento do câncer. Os métodos disponíveis para identificar tais marcadores incluem genômica, proteômica e tecidos com base coloração imuno-histoquímica [3]. A quantificação de transcritos de biomarcadores de câncer usando em tempo real reação em cadeia da polimerase quantitativa (qRT-PCR) de grandes amostras podem ajudar na busca de biomarcadores de câncer clinicamente úteis que podem ser integrados no projeto do ensaio clínico [4].

A ponto final desejado no tratamento de cancros humanos é produzir a morte total de células de cancro [5], [6]. a morte de células de cancro pode prosseguir através Apotosis (tipo I), necrose ou autofagia (tipo II) [7], [8]. Necroptosis (necrose) é uma via de morte celular programada que requer a formação de necrosome, tem um inibidor natural (necrostatin1), e requer o complexo de funcionamento RIP1 e (receptor de cinase de serina /treonina proteínas que interagem 1/3) RIP3 [9], [10], [11], [12]; necroptosis pode ser induzida por outras vias, tais como os receptores de tipo Toll (TLR), cinases Jun, CD40, SPP1 e metabolismo da glutationa [13]. Necroptosis e apoptose tem alguns reguladores comuns. RIP3 pode mover-se a partir de células de apoptose necroptosis [14]. A indução de autofagia pode complementar a morte de células de cancro induzido por drogas [15]. Há um consenso crescente de que todos os três percursos de morte celular programadas estão interligados [16], [17]. Além disso, uma característica principal da maioria dos cancros é a resistir morte celular [18]. Muitos factores e vias de sinalização conduzir à morte de células de cancro [8]. Inibindo autofagia pode promover a morte celular necrótica [19], a apoptose [20], e a apoptose pode mudar para autofagia [21] e vice-versa [22].

A galectina-3, um membro da família de galectina ( galectinas 1-15), tem tanto efeitos anti- e pró-apoptóticas, expresso no núcleo e no citoplasma [23], [24], afecta-Ras sinalização em cancros [25] e de localização nuclear pode induzir a resistência ao tratamento [26] , [27]. A galectina-3 está presente em muitos tecidos e tipos de células normais [28], incluindo as células endoteliais [29]. expressão de galectina-3 foi ligado a progressão, metástase e a sobrevivência de pacientes com muitos tipos de cancro humanas, tais como cancros da mama e da tiróide [24], [30], [31]. outras vias de sinalização de galectina-3 regula [32]. A galectina-3 de sinalização não tem sido associada a autofagia mas tem domínio BH1 de Bcl-2 e interage com a Bcl-2 [33], [34] e, portanto, podem interagir com a via de autofagia.

Beclin1 (também conhecido como Atg6) é uma proteína relacionada com a autofagia e o gene supressor de tumor haploinsufficient oncogene e [35] e é altamente expresso em muitos cancros humanos. Beclin1 sobre-expressão pode promover a sobrevivência de células de cancro [5]. Beclin1 é eliminado em alguns tipos de câncer [36]. Beclin1 é uma classe III fosfatidilinositol 3-quinase [37], [38]. genes autofagia são reguladas por genes do ciclo celular (E2-F1) [39], oncogenes [40], [41], [42] e receptor inositol trifosfato [43].

A apoptose e autofagia são ativados por sinais semelhantes, como estresse, drogas, radiação e são regulados por caminhos semelhantes, como Bcl-2, Bax, fosfatase e tensina homólogo excluída no cromossomo 10 (PTEN), alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR), Akt e p53 [5] , [8], [16], [20], [44], [45], [46], [47], [48]. Isto sugere que a expressão de galectina-3 podem regular, ou estar relacionado com autofagia em cancros e agir como modo adicional de influenciar a progressão do cancro.

O objectivo do estudo foi o de determinar os níveis de galectina-3 e expressão em Beclin1 normal e câncer de tecidos e correlacionar padrões de expressão em tipos de câncer.

O presente estudo utilizou qRT-PCR para determinar os níveis de mRNA de galectina-3 e Beclin1 em cancros humanos. os níveis de mRNA de galectina-3 foram superiores Beclin1 em todos os tipos de tecidos e sobre-e sub-expressão de ambos galectina-3 e Beclin1 foram observados em tecidos normais e de cancro. Os resultados suportam os efeitos conhecidos da galectina-3 no comportamento e na progressão de certos tipos de câncer humano. Os níveis de expressão Beclin1 sugeriu contribuição para o comportamento do câncer e propôs papel na resposta ao tratamento do câncer. O método de análise de dados qRT-PCR será de ajuda em larga escala estudos para determinar biomarcadores morte da célula cancerosa úteis.

Materiais e Métodos

Painel de cDNA TissueScan para Quantitative real -Time em Cadeia da Polimerase Reaction (qRT-PCR)

cDNA TissueScan Oncology Origene painel de 96 amostras de normais (3) e câncer de tecidos humanos (9) (mama, cólon, rim, fígado, ovário, próstata, pulmão e tireóide) foi obtido a partir Origene Inc (CSRT101; 2-96well pack). tecidos mamários eram somente de fêmeas, com idades entre 42-63years. amostras de cólon foram do sexo masculino e feminino, com idades entre 42-91years. amostras de rim foram do sexo masculino e feminino, com idades entre 32-57 anos. amostras de pulmão eram do sexo masculino e feminino, com idades entre 49-79 anos. Amostras de fígado foram do sexo masculino e feminino, com idades entre 21-86 anos. amostras de tireóide eram do sexo feminino e masculino, com idades entre 15-74 anos anos. amostras de ovário foram somente de fêmeas, com idades entre 31-80years. amostras de próstata eram do sexo masculino somente, com idades entre 53-71years.

Primers para QRT-PCR

Os primers para galectina-3 (LGALS3 cromossomo 14q21-q22, NCBI GenBank ID NM-002306), Beclin1 (BECN1, Chromosome17q21: NCBI GenBank ID 003766) e β-Actina (ACTB; NCBI GenBank ID 001101) estão no Quadro 1, incluindo o tamanho do amplicon e comprimentos de iniciadores. Os iniciadores foram obtidos a partir de PrimerBank [49]. Os oligonucletides purificados foram adquiridos de IDT (Integrated DNA Technologies Inc).

RT-PCR quantitativa (qRT-PCR)

reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) foram realizadas no Integrated Biomolecular projeto Laboratories (IBD) no Departamento de Bioquímica da Faculdade de Medicina e da Universidade de Odontologia de Alberta usando Applied Biosystems 7900HT sistema real-Time PCR rápido (Applied Biosystems Inc CA, EUA). A mistura de reacção continha 5 uL de amostra misturada com 15microL de coquetel de PCR (iniciador 2,8 pM e Jump2X (dNTP 160? L, 400? L ROX, Syber VERDE 1/00 ​​DMSO 50 uL, JumpStart Taq 240 uL total de 10 mL) a uma proporção de 1:02) .Cada bem foi executado em duplicado para a primeira demão de teste e referência (β-actina) e um conjunto de amostras duplicado foi executado para cada iniciador de interesse. A reacção para cada poço foi realizada como se segue: 95 ° C durante 3 minutos, seguido por 95 ° C durante 15 segundos, 55 ° C durante 15 segundos, 72 ° C durante 1 hora x 40 ciclos, seguido por 95 ° C durante 15 segundos, em seguida 60 ° C durante 15 segundos e finalmente 95 ° C durante 15 segundos. O software ABI7900HT (SD 2.0) foi usado para obter dados de fluorescência em bruto (Rn e DRN) para análise.

qRT-PCR A análise de dados

Todos os dados de fluorescência em bruto (Rn) para cada poço ( em duplicado) foram enviados para o site do Miner (www.ewindup.info/miner/verson2) para análise utilizando 4 e 3-parâmetro de modelo de regressão logística para calcular a eficiência (e) e limiar de ciclo (Ct valores) derivada da segunda derivada máxima do modelo [50]; o modelo cinético não requer a utilização de curva padrão, define S curva em forma para cada PCR, identifica a fase exponencial (EP) da reacção de PCR, estima a eficiência (E) utilizando a regressão não-linear iterativa seguido por média ponderada para ajustar o adequado curva dos dados brutos e Ct derivada de segunda máximo derivado. software Miner desde que os resultados para cada poço e a média Ct e eficiência para cada poço. As amostras foram em duplicado e a média /média foi usada em cálculos de eficiência (E) e Ct. métodos semelhantes têm sido utilizados por outros, tais como a curva sigmoidal modelo de ajustamento [51], [52], [53] e modelo de regressão linear [54]. Muitos aspectos da directrizes MIQE foram levados em consideração para métodos e análise [55].

Análise Estatística

O pacote de software estatístico R (www.r-project.org) foi usado para calcular relativa (concentrações dobrar mudança) de ARNm níveis de galectina-3 e Beclin1 nas amostras utilizando a fórmula Miner 1 /(1 + e) ​​∧CT. software Gretl (v1.8.0) foi utilizado para traçar e análise estatística.

Resultados

Galectin3 mRNA-regulação em Câncer tecidos humanos

galectina-3 Os níveis totais de mRNA em todas as 96 amostras é mostrado na Fig. 1-A. valor mínimo foi de 1.2E-03 eo valor máximo foi 937e-02 (média = 67.6047e-02 +/- 130.3e-02). Os níveis de ARNm relativos de galectina-3 em tecidos normais são na Fig. 1b e de tecidos de câncer em Fig. 1c. O nível mais elevado de galectina-3 em tecidos normais foi na mucosa do cólon. Os tecidos normais e de cancro do pulmão e fígado teve a menor expressão de galectina-3. Alta galectina-3 que expressam tecidos de câncer foram mama, próstata, rim e tiróide quando comparado aos tecidos normais (Tabelas 2 e 3).

(A) Box-plot da expressão geral galectina-3 em todos os tecidos tipos. (B) Os diagramas de caixa de distribuição de galectina-3 de níveis de mRNA relativos em tecidos normais (Na = mama normal, Nb = cólon normal, Nc = renal normal, Nd = fígado normal, Ne = pulmão normal, Nf = ovário normal, Ng = normal da próstata, Nh = tireóide normal). parcelas (C) caixa de níveis de mRNA relativas de galectin3 em tecidos de câncer. BRCA câncer = mama, Col_Ca = cancro do cólon, Ca_Kid = cancro do rim, Ca_Liv = cancro do fígado, Ca_Lun = cancro do pulmão, Ca_Ova = cancro do ovário, Ca_Pros = O câncer de próstata, Ca_Thyr = cancro da tiróide (ver Tabela 2a e b para valores para cada grupo).

Beclin1 /mRNA Atg6 em normal Humano e Câncer tecidos

níveis de mRNA relativos de Beclin1, em todos os tipos de tecidos de 96 foram menor em comparação com a galectina -3 (Fig. 2a). O valor mínimo foi 1.27e-05 eo valor máximo foi 5.15e-01 (média = 3.18056e-02 +/- 6.4003e-02). A distribuição de ARNm em tecidos normais Beclin1 é apresentado na Fig. 2b e para os tipos de tecido de câncer é mostrado na Fig. 2c e Tabelas 4 e 5. cólon, próstata e câncer de fígado tecidos tinham valores elevados de mRNA relativos.

(A). gráfico de caixa da expressão geral em todos os tipos de tecido. parcelas (B) da caixa de distribuição Beclin1 dos níveis de mRNA em tecidos normais (Na = mama normal, Nb = cólon normal, Nc = renal normal, Nd = fígado normal, Ne = pulmão normal, Nf = ovário normal, Ng = Próstata Normal, Nh = tireóide normal). (C) parcelas Box-suiça dos níveis relativos de mRNA Beclin1 em tecidos de câncer. BRCA câncer = mama, Col_Ca = cancro do cólon, Ca_Kid = cancro do rim, Ca_Liv = cancro do fígado, Ca_Lun = cancro do pulmão, Ca_Ova = cancro do ovário, Ca_Pros = O câncer de próstata, Ca_Thyr = cancro da tiróide (ver Tabela 3a e b para valores).

Desequilíbrio da galectina-3 e Beclin1 /Atg6 Expressão em condições normais e cancerosas tecidos

os níveis de expressão de mRNAs para galectina-3 e Beclin1 em todos os 96 tecidos são mostrado na Fig. 3. Wilcoxon testes de sinais com posto para as diferenças entre a galectina-3 e Beclin1 mostrou valor p de 2.22045e-1 (bicaudal). Em tecidos de cancro da mama, a galectina-3, mas não Beclin1 foi altamente expressa no cancro, em comparação com o tecido normal. Em tecidos de cancro do cólon, Beclin1 foi mais elevada em cancro, em comparação ao normal, enquanto que a galectina-3 foi mais baixa em comparação com tecidos normais. nível Beclin1 foi maior no câncer do que os tecidos normais do fígado, enquanto galectina-3 foi baixa, embora superior em câncer do que os tecidos normais. tecidos renais e câncer de tireóide teve alta galectina-3, mas diminuir Beclin1 em cancro, em comparação ao normal. Nos ovários, ambos os níveis de galectina-3 e Beclin1 foram menores em cancros em comparação com tecidos normais de ovário. tecidos pulmonares tiveram menor galectina-3 e superior Beclin1 em cancro, em comparação ao normal. tecidos de câncer de próstata tiveram ambos os níveis de galectina-3 e Beclin1 acima dos níveis de tecido normal (Tabelas 2, 3, 4 e 5; Figura 4).

(média +/- desvio padrão) GAL3 = 67.605e-02 + /-1,3030 Beclin1 = 3.1806e-02 +/- 6.4003e-02.

mudanças comparativos em galectina-3 e expressão Beclin1 em tipos de câncer individuais são mostrados.

discussão

Este estudo foi quantificar níveis de transcrição de dois marcadores de morte celular em tecidos normais e cancerosas humanas, comparar os níveis entre tecidos normais e cancerosas, e comparar e correlacionar os níveis nos diferentes tipos de câncer. O estudo revelou níveis elevados de mRNA de galectina-3 e níveis relativamente baixos de ARNm Beclin1. A distribuição da galectina-3 níveis de ARNm em tecidos normais e cancerosas são mais elevados do que para Beclin1 (Tabelas 2, 3, 4, e 5); não há nenhuma indicação de que isso implica que a função da galectina-3 na apoptose interfere com as funções de autophagy Beclin1. Essa interação, se identificadas, podem impactar a resposta ao tratamento do câncer. Tanto a galectina-3 e Beclin1 pode transportar para núcleos [56], [57], atingir o organelo Golgi [58] e interagir com Bcl-2 [33] e são inibidas por Bcl-2 [44], [59]. Beclin1 é também um alvo terapêutico [60] como autofagia pode aumentar a resistência à irradiação; inibição da Beclin1 leva a um aumento da sensibilidade à irradiação [19].

A galectina-3 Papel na humano no cancro

observações recentes em um modelo de xenoenxerto de cancro indica que a inibição da galectina-3, utilizando sintético lactulosyl-1-leucina combinada com taxol, reduzida metástases pulmonares e aumentou animais metástases livres [61]; uma descoberta que aponta para o aumento da relevância da galectina 3-atividades no câncer humano. Outro estudo utilizou pequena inibição molécula de galectina-3 em linhas celulares de cancro da tiróide e mostrou que a inibição induz a apoptose das células cancerosas e sensibilidade à doxorrubicina [62]. Cancro do estroma angiogénese pode ser promovido através de clivagem da metaloproteinase da matriz de galectina-3 N-terminal [63], tanto em modelos in vitro de angiogénese e tecidos de cancro humano. Além disso, o uso de inibidores da galectina-3 in vitro e GAL3 (- /-) animais indicam que a galectina-3 liga-se intergrin β3 a5 e induz a angiogénese através de factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) e factor de crescimento de b-fibroblastos (bFGF) [64 ]. Nos cancros com (cancros do fígado e da próstata) galectina-3 e Beclin1 elevadas, tendo como alvo tanto pode ser do benefício.

No presente estudo, a galectina-3 níveis de mRNA foram maiores na mama, pulmão, rim, e cancros da tiróide, quando em comparação com tecidos normais. Alto expressões de galectina-3 em alguns cancros humanos indicam a progressão e a actividade metastática do cancro, i.e. da mama [65], [66], rim [67], e da tiróide [68]. A galectina-3 é um quimioatraente para monócitos e macrófagos [69] e expressas em células endoteliais vasculares tumorais e poderia funcionar no feed-back de células do estroma e do cancro [70]. A galectina-3 tem efeitos sobre a K-ras de sinalização em células de cancro da mama [25] e a sua translocação nuclear aumenta a resistência à quimioterapia [71]. A galectina-3 promove a metástase em modelos experimentais de metástase do cancro da mama [72]. Galectina-3 é elevada em cancros da tiróide com subtipos p53 mutante especialmente pouco diferenciados e anaplásico [73]. Altos níveis de galectina-3 em estes subtipos têm estimulado o uso de galectina-3 em imagiologia destes cancros [68] e como alvo terapêutico [31]. Como foi encontrada neste estudo, a galectina-3 é expressa em tireóide normais [74] e os níveis mais elevados em cancros da tiróide, como visto no presente estudo, pode ser usado para separar tecidos benignos e malignos da tireóide forneceram dados baseados em evidências adequadas são tomados em consideração [75]. Combinando pequena inibição molécula da galectina-3 e tratamento doxorrubicina de linhas celulares de cancro e papilar da tiróide aumentou a resposta à droga e apoptose [62]. Em cancros do cólon, a localização nuclear da galectina-3 está associada com a resistência ao 5-fluorouracilo (5-FU) de tratamento [76]. No presente estudo, os cancros do cólon como um grupo tinham baixos níveis de galectina-3, apesar de a sua contribuição para a progressão é desconhecido. No carcinoma hepatocelular, sérico elevado ou a galectina-3 nuclear indicou histológica grau e invasão vascular [77]; neste estudo tanto galectina-3 e Beclin1 são elevados em cancro do fígado, quando comparado aos tecidos normais e, eventualmente, suporta a resistência em relação a quimio-radioterapia. Como mostrado em outros estudos, a galectina-3 foi altamente expressa em cancros renais [67]. Altos níveis de galectina-3 em carcinomas de células renais foi encontrado em carcinomas de células renais primários e metastáticos; carcinomas metastáticos tinham níveis mais elevados do que os carcinomas primários, sugerindo um papel na progressão [78]. Alta galectina-3 níveis em cancros da próstata neste estudo pode apoiar os resultados obtidos em estudos modelo animais. Na linha de células do cancro da próstata LNCaP que carece de galectina-3 (devido à hipermetilação do promotor), a expressão induzida de galectina-3 conduz a apoptose induzida por drogas reduzida [71]. Da mesma forma, a sobre-expressão de galectina-3 na linha celular de cancro da próstata LNCaP que falta expressão de galectina-3 conduziu à inibição do crescimento do tumor [79]. A galectina-3 pode ser clivada por proteases durante a progressão do cancro da próstata, e linha celular de cancro da próstata PC3 com reduzida galectina-3 apresentaram redução do crescimento tumoral em xenoenxertos [80]. Altos níveis de galectina-3 na próstata amostras de câncer poderia indicar, de baixo estágio e menos doença progressiva [81], [82].

Entrada de Beclin1 no comportamento do cancro

Em contraste com a galectina -3 descobertas, Beclin1 foi geralmente regulada negativamente em todos os tipos de tecido e, em muitos subtipos de câncer. Em carcinomas hepatocelular, Beclin1 foi aumentado em comparação ao normal e redução Beclin1 foi relatado como preditor de sobrevida livre de doença e cânceres agressivos tinham baixos níveis de Beclin1 [83]; os resultados em câncer de fígado poderia sugerir tumores menos agressivos. Beclin1 foi encontrado para regular a actividade de estradiol no cancro da mama [84] e os níveis relativamente normais encontradas podem indicar a atividade de estrogênio. níveis Beclin1 no câncer de próstata pode apoiar os resultados obtidos em estudos modelo animais. Vários estudos têm mostrado que o tratamento de células de cancro da próstata com sulforafano [85] e inibição da mTOR (alvo de rapamicina) induz autofagia e resposta a irradiação [86] aumentada. cancros da próstata teve Beclin1 maior que o normal, sugerindo resposta possível radiação. Não existem estudos diretos de mudanças na Beclin1 no cancro renal, embora pequena molécula inibição da BVS (von Hippel Landau) em células de câncer de autofagia e crescimento reduzido [87] induzidas. Neste estudo, os cancros renais expresso Beclin1 abaixo tecidos normais e pode sugerir falta de activação da morte de células autophagic. No cancro do ovário, a indução de autofagia leva a dormência tumor [88]. Neste estudo, os cancros do ovário tinham níveis Beclin1 abaixo que em tecidos normais, indicando ausência de dormência, e possivelmente o comportamento agressivo. Os níveis de expressão de Beclin1 em ovário, da próstata e da mama pode ser influenciada por deleções conhecidos que ocorrem nestes cancros [36].

A galectina-3 e Beclin1 Juntos em cancros humanos

Decifrar o relevante vias de morte celular no cancro humano pode fornecer uma maneira de selecionar tratamentos específicos para evitar respostas indesejadas. Regulamento da apoptose e necroptosis se sobrepõem, mas também são únicas para cada modelo de morte celular [9], [10]. Portanto, a supressão das suas funções pr�apoptose galectina-3 e vai promover necroptosis através RIP1 RIP3 e [11], [14]. modelos propostos sugerem que, quando a autofagia está intacta e funcionamento, as células sofrem apoptose quando via de apoptose é preservada e ir para a sobrevivência, se a apoptose é perturbado; Por outro lado, se a autofagia é defeituosa, mas a apoptose está intacta, as células sofrem apoptose mas sobreviver se a apoptose é deficiente [89]. Nos cancros humanos com elevada da galectina-3 (presumivelmente pro-apoptose) e Beclin1, a utilização de pequena molécula inibição da galectina-3 para aumentar a resposta ao tratamento pode ser benéfico. Um estudo recente descreve a utilização de siRNA e SGC-100 /MCP (citrato de pectina modificada) para inibir a galectina-3 em células de cancro de próstata PC3 e de aumentar a resposta ao tratamento com cisplatina [90]. O presente estudo e outros sugerem a relevância do predeterminar a presença de marcadores via de morte celular em cancros para otimizar o uso de drogas combinadas e inibidores de pequenas moléculas.

Limitações do estudo

O presente estudo explorou o uso de qRT-PCR na determinação dos níveis de marcadores de morte celular de cancro dois expressão. proteômica correlativas vão beneficiar esses estudos para definir o conteúdo de proteína correlacionar e ou localização e fornecer suporte adicional para níveis de transcrição. No câncer de próstata e linha de células LNCaP, estado promotor metilação afetados expressão tecidual da galectina-3; portanto, proteômica pode precisar correlação com estado de metilação [91]. De sobrevivência e de tratamento de respostas não fazem parte do presente estudo como o seguimento e sobrevivência de dados pós-tratamento não estavam disponíveis. Correlacionando-se com a sobrevivência ea resposta ao tratamento será componentes essenciais de amostras e estudos (normais e cancerosas superior a 9 amostras) com o objetivo de definir os benefícios de biomarcadores morte da célula cancerosa predefinidos para uso clínico maiores. métodos emergentes de próxima geração seqüenciamento pode precisar de validação com avançados métodos de qRT-PCR.

Utilitário de modelos cinéticos /regressão para qRT-PCR

O presente estudo também explora o uso de software Miner ( 2.0) para a análise de todos os dados quantitativos de reacção em cadeia da polimerase-[50]. Este e outros métodos relatados por outros investigadores não requerem o uso de curva padrão e usar modelagem linear ou não-linear de regressão [51], [52], [53], [54], [92] e pode aumentar a capacidade de realizar estudos de alto rendimento quantitativo em tempo real de reação em cadeia da polimerase (qRT-PCR) para corroborando, e validar outras experiências microarray.

Conclusões

Os papéis de galectina-3 e Beclin1 em apoptose e autofagia estão bem descritos. A galectina-3 e Beclin1 papéis na progressão do cancro e a resposta ao tratamento são suportados pelos padrões de expressão utilizada no presente estudo. O estudo utilizou fluorescência dados brutos qRT-PCR e software Miner (Miner 2.0) que usa modelo de regressão logística para calcular a eficiência bem individual e valores Ct. O método de análise de qRT-PCR presta-se a utilização de grandes números de conjuntos de tecido e podem ser úteis na criação de conjuntos de biomarcadores com base em redes de genes que podem ser utilizados para o diagnóstico e prever a resposta ao tratamento do cancro.

Reconhecimento

I agradecem a ajuda de S. Bolch (Integrated biomoleculares projeto Laboratories).

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