Abstract

Fundo

JCV é um poliomavírus de ADN muito bem adaptado aos seres humanos. Embora o DNA JCV tem sido detectada em cancro colorectal (CRC), a associação entre JCV e CRC permanece controverso. Na China, a presença de infecção em pacientes de CRC JCV não foi relatada. Aqui, nós investigamos infecção e JCV carga ADN viral em pacientes chineses de CRC e para determinar se o ADN JCV no sangue periférico (PB) pode ser utilizado como marcador de diagnóstico para CRC-relacionada JCV.

Metodologia /Apreciação Principais

Os tecidos tumorais, tecidos tumorais adjacentes não-cancerosas e amostras PB foram coletados de 137 pacientes com CCR. Além disso, 80 amostras de tecidos colo-rectais normais de pacientes sem amostras de CRC e PB de 100 voluntários saudáveis ​​Foram também colhidas como controlo. JCV ADN foi detectada por PCR aninhada e dot blotting baseado em lâmina de vidro. carga de ADN viral de amostras positivas foram determinadas pela quantitativa PCR em tempo real. JCV ADN foi detectada em 40,9% (56/137) dos tecidos CRC com uma carga virai de 49,1-10,3 × 10

4 cópias /ug de ADN. Trinta e quatro (24,5%) tecidos colorrectais não cancerosos (192,9 a 4,4 × 10

3 cópias de ADN /ug) e 25 (18,2%) amostras de Pb (81,3 a 4,9 × 10

3 cópias /ug de ADN) do CRC pacientes foram positivos para JCV. tecidos tumorais tinham níveis mais elevados de JCV que os tecidos não cancerosos (

P

= 0,003) ou amostras PB (

P Art 0,001). Não houve correlação entre a presença de JCV e características demográficas ou médicas. A prevalência JCV em amostras de PB foi significativamente associada com o status JCV em amostras de tecido (

P Art 0,001). Onze (13,8%) tecidos colorretais normais e sete (7,0%) amostras PB de doadores saudáveis ​​foram positivos para JCV.

Conclusões /Significado

infecção JCV é frequentemente presentes em tecidos tumorais colorretais de CRC pacientes. Embora a associação entre a presença JCV em amostras PB e estado JCV em amostras de tecido foi identificado neste estudo, se a detecção PB JCV pode servir como um marcador para o status JCV de CRC requer um estudo mais aprofundado

Citation:. Mou X, Chen L, Liu F, Lin J, P Diao, Wang H, et al. (2012) Prevalência de vírus JC em pacientes chineses com cancro colorectal. PLoS ONE 7 (5): e35900. doi: 10.1371 /journal.pone.0035900

editor: Herman Tse, The University of Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 30 de novembro de 2011; Aceito: 23 de março de 2012; Publicado em: 11 de maio de 2012

Direitos de autor: © 2012 Mou et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi financiada por doações de Ciência da China Nacional e Projeto principal Tecnologia No. 2012ZX10002006-003, o programa Nacional de Pesquisa básica da China (973 programa) No. 2007CB513001, e uma Qiu Shi cátedra na Universidade de Zhejiang para CX. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o vírus John Cunningham (JCV) é uma pequena poliomavírus onipresente, não envelopados com uma circular genoma fechado, double-stranded DNA que freqüentemente reside nos rins de indivíduos saudáveis ​​e é excretada na urina de uma grande parte da população adulta. JCV infecção é subclínica e leva a latência ao longo da vida, mas pode ser reactivada quando o sistema imune está deficiente [1] – [3]. JCV está associada com doença principalmente em indivíduos imunocomprometidos e sua replicação em células gliais poderia levar a leucoencefalopatia multifocal progressiva (PML), uma doença geralmente fatal do sistema nervoso central [4]. Como outros poliomavírus, JCV codifica uma versão de um grande antigénio T que podem ligar-se e inactivam as proteínas supressoras de tumor p53 e pRB e interferir com várias vias de sinalização de células [5] – [7]. Além disso, sequências de ADN genómico JCV e expressão T-antigénio foram detectados em uma ampla gama de tipos de células de tumor humano, incluindo oligodendrócitos, astrocitomas, os glioblastomas, ependimomas, e a maioria dos outros tipos de tumores cerebrais [8], indicando que a infecção JCV pode ser associado com a carcinogênese humana.

Mais recentemente, JCV também foi encontrada em cancros não neurais, tais como cancros [9] e pulmonares gástricas [10]. infecção JCV foi relatada pela primeira vez como um potencial fator de risco para o cancro colorectal (CRC) em uma obra de Laghi et al. [11], que constatou que 96% dos tecidos CRC foram positivos para seqüências de DNA JCV. Subsequentemente, outros estudos foram publicados mostrando que as sequências de JCV foram encontrados em 26% -88,9% de tecidos de CRC, com tamanhos que variam de exemplo 18-105 [12] – [15]. Em contraste, outros estudos têm mostrado posteriormente que nenhum DNA JCV detectável estava presente nos tecidos colorretais indicando que não há associação entre JCV e cólon neoplasia [16] – [17]. prevalência JCV em vários conjuntos de amostras de CRC pode ser devido a diferenças na sensibilidade do ensaio em todos os estudos, a contaminação entre amostras, ou localizações geográficas da população selecionada. Embora demonstração da presença dos componentes virais de tumor é o primeiro passo para caracterizar o papel da JCV em CRC carcinogénese, evidências adicionais, tais como carga viral elevada, é necessário para suportar um papel causal. No entanto, apenas dois estudos mencionaram a carga viral da JCV no CRC [11], [15]. Considerando os relatórios controversas sobre a etiologia do JCV no CRC, verifica-se que a associação entre a infecção e JCV CRC precisa ser mais investigada.

Muitos estudos demonstraram que o ADN ou antigénios JCV pode ser detectado no sangue periférico (PB) ou soro. componentes virais detectados no sangue têm sido historicamente presume ter se originado a partir de células de câncer de metástase ou a partir de restos celulares contendo vírus eliminado a partir de um site de infecção local [18]. Apesar de dois estudos caso-controle prospectivo tenha sido realizado para determinar a associação entre JCV soropositividade e desenvolvimento CRC [19] – [20], não houve nenhum relatório descrevendo a presença de DNA JCV no sangue de pacientes com CCR publicados até à data. Neste estudo, foi investigada a prevalência de JCV em pacientes CRC chinesas para determinar uma relação potencial. Além disso, investigamos se DNA JCV na PB é adequado como um marcador diagnóstico para CRC relacionadas com JCV.

Métodos

declaração Ética

Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética Comissão do primeiro Hospital Filiado, faculdade de Medicina da Universidade de Zhejiang, Hangzhou, China. consentimento informado por escrito foi fornecido por pacientes e controles.

Amostras clínicas

Todas as amostras clínicas foram obtidas entre maio de 2007 e outubro de 2011 a partir de pacientes internados na Primeira Affiliated Hospital, Faculdade de Medicina, Universidade de Zhejiang (Hangzhou, China). tecidos tumorais, tecidos não cancerosos tumorais adjacentes e amostras PB de 137 pacientes CRC aleatórios (média de idade do paciente, 62,99; gama, 27-86 anos) foram coletadas menos de três meses após o diagnóstico CRC. Foram excluídos os pacientes submetidos a cirurgia para as recorrências. tecido tumoral adjacente não-cancerosas foi coletado de uma área -15 cm distal do tumor. Além disso, 80 tecidos colorrectais de mucosa não-patológico de pacientes submetidos a colonoscopia para avaliação dos distúrbios funcionais, tais como a diarreia ou obstipação não relacionada com cancro ou doença inflamatória do intestino (IBD) e 100 amostras de PB a partir de dadores saudáveis ​​de exame físico sem história de cancro ou diagnóstico de pólipos foram coletadas como controle. As amostras de tecido foram divididos; uma parte foi mantida para análise histopatológica, e o outro transferidas para criotubos, imediatamente congelado em azoto líquido, e armazenado a -196 ° C para posterior análise. Todos os dados da amostra foram registrados em um banco de dados de coleta de amostras.

DNA extração

Cerca de 50 mg de cada amostra de tecido foi homogeneizado em um tubo estéril 2 ml com solução de cloreto de sódio a 1 ml de 0,09%, utilizando um homogeneizador elétrico (PRO Scientific, Oxford, CT, EUA). Para minimizar a contaminação cruzada entre as amostras, a sonda foi lavada em água estéril fresco três vezes, a solução de peróxido de hidrogénio a 40%, duas vezes, 75% de etanol duas vezes e aquece-se em um queimador de etanol a 95% durante 3 min entre as amostras. Quatrocentos microlitros de cada amostra de PB foi utilizado para o isolamento de ADN. O DNA de cada amostra foi extraído utilizando o kit de purificação de ADN MasterPure (Epicentre Biotechnologies, Madison, WI, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Para confirmar a integridade do ADN extraído, por PCR usando glyceraldehydes fosfato desidrogenase (GAPDH) foi realizada iniciadores tal como descrito anteriormente [21].

nested PCR na JCV genoma

amplificação aninhada por PCR foi realizada usando um conjunto de iniciadores para o antigénio T, como descrito previamente [13]. Resumidamente, o alvo de 173 pb da JCV T-antigénio foi primeiro amplificado usando os iniciadores de JCT-1F (5′-AGT CTT CTT TAG GGT CTA-3 ‘) e JCT-1R (5’-GGT GCC AAC CTA TGG AAC AG-3 ‘). Primeiro condição rodada PCR foi desnaturado a 95 ° C durante 10 min, seguido por 30 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 15 s, emparelhamento a 55 ° C durante 30 s e extensão a 72 ° C durante 30 s. Nested PCR foi realizada usando 2 ul do produto da primeira ronda como um modelo, com os iniciadores JCT-1F e JCT-2R (5’-TGA AGA CCT GTT TTG CCA TG-3 ‘). A condição nested PCR foi desnaturado a 95 ° C durante 10 min, seguido por 30 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 15 s, emparelhamento a 60 ° C durante 30 s e extensão a 72 ° C durante 30 s. O procedimento de PCR aninhada amplificada uma sequência-alvo de 110 pb. Para evitar possíveis PCR resultados falso-positivos, foram incluídos dois controles de água para a primeira rodada PCR e PCR. Se quer o controlo dos dois controles de água originou um falso-positivo na PCR aninhada, todo o conjunto de PCR e PCR com iniciadores internos foi reiniciado com novo reagente. Para cada amostra, 1 ul de DNA foi amplificado por PCR com iniciadores internos. Quatro microlitros de cada um dos produtos de amplificação foram analisados ​​por electroforese em gel e coloração com brometo de etídio de agarose a 2%.

vidro dot-blotting com base corrediça

Os produtos nested-PCR foram purificados com o kit de purificação de PCR MinElute (QIAGEN, Hilton, Alemanha) e, finalmente, eluiu-se em 10 ul de tampão de EB (10 mM de Tris-Cl, pH 8,5). Amostras de DNA purificadas foram misturadas com um volume de DMSO, e viu sobre superfícies de lâminas de aminossilano (CapitalBio, Pequim, China) como três repetições, com um observador SmartArrayer (CapitalBio, Beijing, China). Após o cozimento durante 1 h a 80 ° C, as lâminas foram lavadas em 0,2% de SDS durante 5 min e limpo por lavagem com DDQ

2O. sonda oligonucleotídica marcada com TAMRA (JCT-sonda, de 5′-GTT GGG ATC CTG TTT TGT CAT CAT C-3 ‘) foi adquirido de Invitrogen (Xangai, China) e diluída até uma concentração de 10 uM. A hibridação foi realizada a 45 ° C durante 2 h. As lâminas foram lavadas em SSC 2 × /SDS a 0,2% a 42 ° C durante 5 min, e, finalmente, em DDH

2O a 42 ° C durante 5 min. As lâminas foram secas por centrifugação e digitalizada com um digitalizador GenePix 4100 (Axon, União, EUA). As imagens foram analisadas com GenePix 5.0 software Pro (Axon).

A quantificação da carga viral por PCR em tempo real

A SYBR em tempo real método de PCR Verde foi utilizada para determinar a carga viral JCV em amostras como descrito por Chapagain [22]. Especialmente, os iniciadores de RT-JCT-F (5′-AGA GTG TTG GGA TCC TGT GTT TT-3 ‘) e RT-JCT-R (5′-GAG AAG TGG GAT GAA GAC CTG TTT-3’) foram usadas na PCR em tempo real uma sequência de direccionamento do gene antigénio T, a produção de um produto de 78 pb durante a reacção. JCV quantificação da carga virai foi realizada na Bio-Rad CFX96 em tempo real do sistema de detecção de PCR utilizando 200 ng de ADN molde, 10 ul de SYBR mistura verde PCR Master (TaKaRa, Dalian, China) e 4 pmol de cada um para a frente e reverso iniciadores. ciclagem térmica foi iniciada com um primeiro passo de desnaturação a 95 ° C durante 30 s, seguido de 40 ciclos de 95 ° C durante 5 s e 60 ° C durante 15 s e a fluorescência da amplificação foram monitorizadas a 60 ° C no final de cada ciclo. Uma curva padrão foi construída utilizando diluições em série (de 1,0 a 10

7 cópias de ADN JCV) de JCV plasmídeo T-antigénio. Três réplicas foram realizadas para cada amostra e os dados de PCR em tempo real foram analisados ​​usando o software gestor de Bio-Rad CFX. Os números de cópias em média nas amostras foram calculadas de acordo com a curva padrão e foram representar como cópias de DNA viral por DNA genômico microgramas.

Métodos estatísticos

As características demográficas foram comparadas entre pacientes com CCR (C) e controles (pacientes não-CRC (N) ou doadores saudáveis ​​(H)) usando o

t de Student

-teste para as variáveis ​​numéricas eo χ

2 de teste para as variáveis ​​categóricas. Sexo, tabagismo, uso de álcool, residência, histórico familiar de CRC, local palco e tumor patogênica foram comparadas entre CRC-pacientes JCV positivos e negativos usando o χ

2 de teste. estado de diferenciação foi comparada entre pacientes com CCR JCV positivos e negativos usando o teste exato de Fisher. O modelo de regressão logística exata, ajustado para idade, foi utilizado para estimar a associação entre infecção JCV e CRC. software R estatística (v 2.12.0, www.r-project.org/) foi usado para análise estatística. Em todas as análises, um

P

-valor 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados

As características demográficas dos 137 pacientes de CRC, 80 pacientes não-CRC e 100 doadores saudáveis. estão presentes na Tabela 1. Os pacientes com CCR eram mais velhos do que os pacientes não-CRC (

P Art 0,001), mas não foi observada nenhuma diferença entre pacientes com CCR e doadores saudáveis. A história familiar de CRC foi mais comum entre os pacientes de CRC versos pacientes não-CRC ou doadores saudáveis, mas as diferenças não foram estatisticamente significativas (

P

= 0,491 para C vs N,

P

= 0,162 para C vs H).

Todas as amostras foram positivas para o controle GAPDH, indicando integridade adequada das amostras. Os controles negativos em ambos os ciclos de PCR revelou nenhuma evidência de contaminação do reagente. Utilizando PCR aninhada, a sequência de nucleótidos T-antigénio JCV foi detectada em 40,9% (56 de 137) de tecidos tumorais e de 24,8% (34 de 137) de tecidos tumorais adjacentes a partir de pacientes de CRC (Figura 1). Os produtos de PCR foram confirmados como sequências autênticas JCV por análise de matriz de lâmina de vidro (Figura 1B). Encontramos ambos os pares combinados de tecido tumoral e tecido não canceroso de 17,5% (24 de 137) dos pacientes com CCR foram positivos para DNA JCV. 23,4% (32 de 137) e 7,3% (10 de 137) dos pacientes teve ADN JCV apenas em tecido tumoral ou tecido tumoral adjacente não-cancerosas, respectivamente (Figura 1C). 18,2% (25 de 137) de amostras SP de pacientes com CCR foram positivos para DNA JCV. A presença JCV significativamente maior foi observada em tecidos CRC em comparação com os tecidos adjacentes não-cancerosos (OR, 2,089; 95% CI, 1,213-3,636;

P

= 0,007) e as amostras PB (OR, 3.084; 95% CI, 1,729-5,619;

P Art 0,001). presença JCV em amostras de PB foi positivamente associado com status de JCV em amostras de tecido (

P Art 0,001); no entanto, ele não estava relacionado com a idade do paciente, sexo, tabagismo, uso de álcool, residência, histórico familiar de CRC, estágio patológico e local do tumor, mas tende a aumentar com a diferenciação dos tecidos CRC, embora esta tendência não foi estatisticamente significativa (Tabela 2 ). Em comparação com os tecidos de pacientes de CRC, apenas 13,8% (11 de 80) de tecidos colorretais de pacientes não-CRC tinha DNA JCV detectável. Na análise estatística não-parâmetro, frequências JCV em pacientes de CRC e pacientes de CRC não foram significativamente diferentes. Desde a idade dos dois grupos diferiram, a associação entre a infecção JCV e CRC foi estimada pela análise de regressão logística exata, ajustado para idade. O OR da JCV risco CRC associado foi estatisticamente significativa (OR, 6,611; 95% CI, 2,928-14,929;

P Art 0,001). Entre as amostras PB de 100 voluntários saudáveis, verificou-se que apenas 7% (7 100) foram positivas para JCV DNA, que foi menor do que o percentual positiva JCV em amostras PB de pacientes de CRC (OR, 0,339; 95% CI, 0,118 -0,852;

P

= 0,021)

(A) O fragmento de 110 pb foi amplificado a partir de ADN isolado a partir de amostras correspondentes de cancro colorectal (superior) e de tumor tecidos normais adjacentes (inferior) com. nested PCR. M: marcador de ADN DL 2000 (Takara); P: controlo positivo; N1: na primeira rodada controle negativo; N2: controle negativo segunda rodada. (B) Imagens de matrizes produtos JCV nested-PCR. produtos de PCR de tecidos tumorais (esquerda) e tecidos adjacentes tumorais normal (direita) foram vistos em superfícies de lâminas de aminossilano como três repetições, hibridizaram com sonda de oligonucleotídeo TAMRA marcado e, finalmente visualizados por scanner de AXON. (C) O número de amostras JCV positivo em 137 pares de tecido do tumor, tecido tumoral adjacente não-canceroso e amostras de pacientes PB CRC.

A carga viral em amostras JCV-positivos a partir de pacientes com CCR foram determinados por um quantitativo PCR em tempo real (qRT-PCR). A carga viral em tecidos tumorais variou de 49,15-1,03 × 10

4 cópias /ug de ADN (média ± SD, 3795.64 ± 3.054,58). Na verdade, os números absolutos de cópias de ADN JCV em tumores CRC foram menores do que uma cópia por célula. Baixa carga viral JCV foi observada em tecidos 34 JCV-positivo, não cancerosos, tumorais adjacentes (gama, 192,85-4,44 × 10

3 cópias /ug de ADN; significa ± SD, 1470.09 ± 887,12) e 25 amostras PB ( faixa, 81,30 a 4.962,99 cópias /ug de ADN; média ± SD, 945.17 ± 1.140,39). Os tecidos tumorais tinham níveis significativamente mais elevados de ADN JCV de tecidos tumorais adjacentes não-cancerosas e amostras de PB (Figura 2).

amostras positivas

JCV determinadas por PCR foram analisados ​​utilizando qRT-PCR. Blots representam uma média de número de cópias (3 poços em duplicado) de ADN JCV para tecido tumoral, o tecido não canceroso e PB, respectivamente, e barras representam calculada medianas.

P

-Valores foram calculados utilizando o teste de Wilcoxon.

Discussão

No presente estudo, JCV foi detectado em 40,9% dos tecidos CRC e 24,8% dos tecidos colorectal não-cancerosas, que estavam na posição intermédia de taxa de antigénio-T em estudos anteriores (Tabela 3). Várias razões potenciais representam a falta de acordo entre estes estudos, incluindo uma potencial contaminação durante a coleta de amostra e processo durante a extração de DNA e amplificação PCR. Muitos estudos não relataram qualquer passo para controlar resultados falso-positivos [11] – [12], [14]. No presente estudo, evitamos resultados falso-positivos, como mencionado em nosso estudo anterior [21]. A sensibilidade do método é crítico, como uma baixa carga viral JCV no tecido colorectal tem sido documentado [15]. A imuno-histoquímica, PCR, PCR aninhada e Q-RT PCR foram utilizados para a detecção de JCV [11], [14] – [15], [23]. JCV ADN foi detectada em 1% e 0% de tecidos de CRC em dois grandes estudos [16] – [17] utilizando um ensaio de PCR em geral, que é conhecido por ter uma sensibilidade mais baixa. Nested PCR é uma técnica altamente sensível para a detecção JCV. alvos de PCR menores foram encontrados para ser mais facilmente amplificado do que longas sequências para a detecção JCV [11]. Tal como descrito por Hori et al. [13], utilizou-se uma PCR com conjuntos de iniciadores como alvo uma sequência de 110 pb JCV T-antigénio, o qual foi capaz de detectar tão poucos como um cópia de ADN JCV (dados não mostrados). Postula-se super-enrolado a topologia do ADN JCV altamente homóloga pode limitar a eficiência de amplificação por PCR [11]. No entanto, nós não utilizar topoisomerase I tratamento antes da amplificação PCR como descrito por Laghi et al. [11], o que pode levar a uma taxa ligeiramente mais baixa de infecção JCV. Idade, sexo, região e estilo de vida de uma população selecionada poderia contribuir para taxas que variam de infecção JCV (Tabela 3). A população americana CRC foi mais comumente selecionadas em estudos anteriores, em que o DNA JCV foi encontrado em 0% -96% dos tecidos CRC [11], [14], [16] – [17], [24]. resultados contraditórios têm sido relatados por dois grupos de pesquisa italianos [12], [25]. Hori et al. [13] e Lin et ai. [23] JCV identificada em 26,1% e 86,4%, respectivamente, de tecidos de CRC de populações asiáticas. Em nosso estudo, o DNA JCV foi detectado em 49,6% dos pacientes com CCR chineses.

Além disso, investigamos a presença de DNA JCV em tecidos de pacientes não-CRC. Em determinados pacientes de alto risco, tais como aqueles com pólipo ou IBD, a incidência de CRC é substancialmente mais elevada. Portanto, os pacientes submetidos a colonoscopia para pólipo e IBD foram excluídos do grupo de controlo antes da coleta da amostra. Para além de idade, não havia nenhuma característica de linha de base significativamente diferentes entre pacientes de CRC e não-BF. No entanto, o ajuste para idade não alterou a associação entre a infecção JCV e CRC. Combinando com a observação de maior prevalência de JCV em tecido de tumor de pacientes com CCR, propomos que JCV está correlacionada com CRC e podem participar no CRC carcinogénese ou, em alternativa, o vírus infecta células de tumor mais facilmente do que as células não-cancerosas.

no presente estudo, não foi observada correlação entre a presença de JCV e características demográficas ou médicas, tais como idade, sexo, educação, estágio clínico, e local do tumor, que foi consistente com outros estudos [13], [15] . Curiosamente, descobrimos que os tecidos de pacientes com CCR que receberam quimioterapia antes da coleta da amostra apresentaram maior incidência de infecção JCV comparados com os pacientes sem quimioterapia, embora a diferença não foi significativa (Tabela 2). A associação entre a imunossupressão e aumento da susceptibilidade à infecção é bem reconhecido. Como demonstrado por Selgrad et ai. [26], em um estudo retrospectivo entre receptores de transplante hepático, pacientes imunodeprimidos têm uma presença significativamente maior de JCV comparados com os controles imunocompetentes. As drogas da quimioterapia pode inibir a resposta imunitária e permitir a reactivação de vírus potencialmente oncogénicos. pacientes com CCR com história familiar têm uma maior prevalência de DNA JCV T-Ag, o que é consistente com os resultados descritos por Vilkin et al. [27]. JCV infecção é normalmente uma infecção assintomática e normalmente ocorre na infância e adolescência mais tarde, após o que o vírus permanece latente no rim. Além do estado imunológico mencionado acima, o fundo genético pode também ser associado com a susceptibilidade da infecção JCV no CRC.

A carga viral em amostras de tecidos pode indicar o papel de JCV em CRC carcinogénese. No presente estudo, a carga viral JCV em amostras positivas a partir de pacientes com CCR foram determinados por RT-PCR q. números de cópias virais JCV foram encontrados a ser maior em tecidos de tumor, em comparação com os tecidos adjacentes tumorais não-canceroso, que é consistente com estudos anteriores [11], [15]. No entanto, os números de cópias absolutos em tecidos foram tão baixa que apenas uma pequena parte das células epiteliais colo-rectais foram encontrados para serem infectadas com JCV. Este resultado apoia os efeitos transientes da JCV em transformação celular, pois ele pode ser silenciada ou seu genoma pode ser perdido durante a progressão do cancro (transformação “hit-and-run”) [28]. Uma infecção JCV introduzindo o T-antigénio poderia facilmente explicar o início da instabilidade cromossómica na carcinogénese múltiplos passos, tal como anteriormente proposto para a sequência conhecida do adenoma-carcinoma [29].

Para o nosso melhor conhecimento , este estudo é a primeira análise de DNA JCV em PB de pacientes com CCR. Mostrámos que a infecção é comum em JCV PB amostras de pacientes de CRC e indicou estado JCV em amostras de tecido. Ao contrário dos estudos soroepidemiológicos anteriores, os nossos resultados não podem ser usados ​​para prever o risco de CRC, porque todas as amostras foram recolhidas no prazo de três meses após o diagnóstico [19] – [20]. Além disso, a presença de JCV em PB de pacientes de CRC foi maior do que em PB de dadores saudáveis. Estes resultados apoiaram a proposição de que o DNA JCV em amostras PB pode ser um biomarcador válido para o diagnóstico CRC relacionadas com JCV. No entanto, as características médicas de doadores saudáveis ​​foram registrados principalmente através de auto-relato que pode levar a erros de classificação. Mais importante ainda, JCV quase sempre permanece latente no rim e pode ser facilmente detectada na urina [1] – [3]. Embora o ADN viral no corrente sanguínea é amplamente considerada como se originam de células derramado a partir de tecido de tumor, a origem do JCV em amostras PB permanece desconhecida.

Em conclusão, a infecção JCV apresenta vulgarmente em pacientes de CRC e pode ser um fator de risco para CRC. Sugerimos

In vivo

estudos moleculares, celulares e contínuos para elucidar os mecanismos da carcinogênese JCV para determinar se JCV é um agente causador da CRC. Embora não tenhamos encontrado DNA JCV em amostras PB poderia servir como um biomarcador para CRC relacionadas com JCV, mais estudos de base populacional em grande escala são encorajados a avaliar esta associação.

Reconhecimentos

Os autores agradecem Xiaoyi Chen, Li Yuan, Yiming Tang, e Xutao Hong por seu apoio técnico, Michael Brownstein por sua leitura crítica do nosso manuscrito.