Abstract

Objectivo

A maioria dos cancros do endométrio são detectados precocemente e ter um bom prognóstico, enquanto alguns tipos de cancro do endométrio são altamente invasiva, metástase precoce e responder subótima à terapia. Atualmente, os sistemas modelo adequado para estudar a natureza agressiva destes tumores são escassos. O objetivo deste estudo foi estabelecer um modelo de rato xenoenxerto de tumores do endométrio derivadas de pacientes, a fim de estudar as características agressivas biológicos que fundamentam a invasão e metástase.

Métodos

fragmentos de tecido do tumor endometrial ( 1,5 mm x 1,5 mm) de pacientes submetidos a cirurgia, foram transplantadas sob a cápsula renal de NOD

camundongos

gama SCID. Após 6-8 semanas, os tumores foram excisados ​​e em série transplantadas em ratinhos adicional para propagação. Análise imuno-histoquímica dos tumores foi feito por vários marcadores tumorais.

Resultados

Quatro casos de diferentes subtipos de cancro do endométrio foram cultivadas e propagadas em camundongos. Três dos quatro casos de tumor invadiu para os rins e órgãos adjacentes. Enquanto todos os tumores exibiram mínima ou nenhuma coloração para α do receptor de estrogénio, foi observada a coloração do receptor de progesterona para enxertos de tumor. Além disso, os níveis de localização e de E-caderina, citoqueratina e vimentina variou dependendo do subtipo. Finalmente, todos os xenotransplantes tumorais coradas positivamente para o ativador do plasminogênio uroquinase enquanto xenoenxertos 3 tumorais, que apresentou características invasivas, corou positivamente para o receptor do ativador do plasminogênio uroquinase.

Conclusão

tumores do endométrio transplantadas sob a exposição cápsula renal crescimento, invasão e disseminação local. Estes tumores podem ser propagados e usados ​​para estudar o cancro endometrial agressiva

Citation:. Unno K, Ono M, Winder AD, Maniar KP, Paintal AS, Yu Y, et al. (2014) Estabelecimento de humanas derivadas-Paciente do cancro Endometrial xenoenxertos em NOD

scid

Gamma Ratos para o Estudo da invasão e metástase. PLoS ONE 9 (12): e116064. doi: 10.1371 /journal.pone.0116064

editor: Eric Asselin, Universidade de Quebec em Trois-Rivieres, Canadá |

Recebido: 10 de julho de 2014; Aceito: 01 de dezembro de 2014; Publicação: 26 de dezembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Unno et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. National Cancer Institute RO1CA155513. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer endometrial é o quarto tumor maligno mais comum entre as mulheres nos Estados Unidos, com cerca de 49.500 novos casos e 8.200 mortes em 2013 [1]. Existem dois tipos de cancros endometriais classificados como Tipo I e Tipo II, dependendo histológico e os resultados clínicos. Tipo I, que ocorre em aproximadamente 75% -85% dos casos de cancro do endométrio está associado à ação estrogênio com fatores de risco, incluindo a obesidade, anovulação, e síndrome do ovário policístico. Tipo 1 tumores são adenocarcinomas, também denominado câncer endometrial endometrioid (CEE) [2]. CEE é caracterizada por uma variedade de alterações genéticas, incluindo PTEN, β-catenina, PIK3CA, ARID1A, KRAS e mutações ARID5B [3]. Tipo cancros II incluem carcinoma seroso, carcinoma de células claras, pouco diferenciado, de grau 3 carcinoma endometrioid e carcinossarcoma ou tumor mülleriano misto maligno (MMMT). Estes cancros têm prognósticos mais pobres e representam 40% das mortes por câncer endometrial [4], [5]. Carcinoma uterino seroso (USC) é uma lesão altamente agressivo em que a morfologia epitelial é semelhante ao carcinoma seroso do ovário [6]. USC tende a espalhar extensivamente em espaços vasculares e através do miométrio [4]. Estes tumores geralmente espalhou para os gânglios linfáticos no abdômen e [7]. A alteração genética mais notável da USC é mutação p53, que ocorre em aproximadamente 90% dos casos de [3]. A mutação de p53 que conduz a sobre-expressão da proteína é considerada como um evento precoce da carcinogénese USC, e MSI ou mutação de PTEN não são tão prevalente [3].

Até à data, os estudos de xenoenxerto de cancro do endométrio têm sido limitados a (uterinos) injecções subcutâneas e ortotópicos de linhas celulares imortalizadas [8] – [12]. Considerando que o crescimento de xenoenxertos subcutâneos pode ser facilmente monitorada numa forma não-invasiva, xenoenxertos em locais ectópicos ortotópicos ou outros dentro da cavidade do corpo proporcionar um microambiente diferente para os tumores crescem, muitas vezes, permitindo um melhor crescimento, a sobrevivência e a vascularização. O rim de NOD

scid gamma é um site que tem sido amplamente utilizada para enxerto de tecido porque este órgão fornece alto nível de taxas de fluxo sanguíneo e linfático, e uma pressão do fluido intersticial positiva [13]. As células e tecidos a partir de tecidos tanto benignas e malignas têm sido enxertados com sucesso sob a cápsula renal nestes murganhos. Estes incluem endométrio e mioma tecidos humanos [14] – [16]., Cancro da próstata, tecidos mamários [17], [18], os tecidos do tumor dos ovários [19], [20]

Portanto, os objetivos de neste estudo foram estabelecer e propagar tumores de cancro do endométrio avançado primário, sob a cápsula renal de NOD

camundongos e

gama SCID para caracterizar tumores utilizando vários marcadores para subtipo de tumor, EMT, receptores de esteróides e invasão.

Materiais e Métodos

coleta de tecido

tumores do endométrio foram obtidas de mulheres submetidas a histerectomias na Northwestern Memorial Hospital. Pacientes forneceram consentimento por escrito antes da cirurgia. Este estudo foi aprovado pela Comissão de Seres Humanos da Universidade Northwestern, de acordo com o Departamento de Regulamento Sanitário dos EUA.

enxertia subrenal de tecidos de câncer de endométrio primários humanos

Todos os procedimentos envolvendo animais foram aprovados pela Northwestern University de animal Care e Use Committee (Protocolo # 2012-2867). Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob anestesia por injeção intraperitoneal de cetamina /xilazina (90/8 mg /kg) e todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento. camundongos adultos NOD fêmea

scid gama (NSG) (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), foram ovariectomizadas (OVX) e complementada com ou sem 0,36 mg E2 na forma de peletes de libertação de 90 dias (Pesquisa Inovativa of America Inc., Sarasota, FL) que foram implantados subcutaneamente. fragmentos de tecido de tumores do endométrio foram obtidas de pacientes pós-cirurgia. Os tumores foram cortados em fragmentos pequenos (1,5 mm x 1,5 mm) e enxertados sob a cápsula renal de ratos adultos fêmea NSG (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) como anteriormente descrito [14]. Dois fragmentos por rins foram enxertadas sobre o anterior e os lados caudal e foram usados ​​ambos os rins. Após 6-8 semanas de enxerto, os tumores foram removidos, cortados em fragmentos mais pequenos (1,5 mm x 1,5 mm) e, em seguida transplantadas sob a cápsula renal de ratos NSG para propagação em série. xenoenxertado tecidos foram marcados como a passagem 0 (P0), P1, P2, etc., dependendo do número de passagens a partir do tumor inicial. Os tecidos tumorais foram fixados em formalina a 10% tamponada neutra, contendo 3,8% de formaldeído (VWR International, West Chester, PA) e subsequentemente embebidas em parafina para análise histológica. Porções do tumor também foram congeladas rapidamente em azoto líquido ou criopreservadas e armazenadas a -80 ° C para análise adicional.

Os ratinhos foram alojados em instalações de barreira, que é livre de agentes patogénicos, em gaiolas com o enriquecimento do meio ambiente, e alimentado irradiadas dieta de roedores Teklad. Os ratos foram alojados durante 14 horas de luz e 10 horas de ciclo escuro. Ratos receberam analgésicos (meloxicam) para o manejo da dor por dois dias pós-cirurgia e observado diariamente para sinais de sofrimento, como diminuiu a respiração, a falta de preparação e ruffling pele e falta de resposta a batida gaiola. Ao fim de 6-8 semanas, os ratinhos foram sujeitos a eutanásia por CO

2, seguido por deslocação cervical.

A imuno-histoquímica

secções embebidas em parafina foram desparafinadas e corados usando o kit Envision DAB HRP (Dako) ou hematoxilina e eosina (H e). Os seguintes anticorpos primários foram utilizados para IHC; policlonal de coelho anti-progesterona receptor 1:1000 (Dako, Cat # A0098), receptor anti-estrogénio monoclonal de coelho α 1:5000 (Abgent, Cat # AJ1268a), monoclonal de rato anti-Ki67 1:31250 (Dako, Cat # M7249) , policlonais de cabra anti-CD31 1:1000 (Santa Cruz, Cat # Sc-1506), rato monoclonal anti-E-caderina 1:50 (BD Transduction Laboratories, Cat # 610181) citoqueratinas, rato monoclonal anti-Pan-citoqueratina (reconhecendo 4, 5, 6, 8, 10, 13 e 18) 1:500 (Cell Signaling, Cat # 4545), monoclonal de coelho anti-vimentina 1:2500 (Abcam, ab92547), monoclonal de coelho anti-p53 1:160 (Cell sinalização, Cat # 2527), monoclonal de coelho anti-PTEN 1:125 (Cell Signaling, Cat # 9188), rato monoclonal anti-uPA 01:50 (American Diagnostic GmbH, Cat # ADG3689). Para o anticorpo de PTEN, SignalStain Anticorpo Diluente para a diluição de anticorpo primário e SignalStain impulso (HRP, coelho) para a detecção de Cell Signaling foram usadas. Upar (ATN-617 mouse) anticorpo 1:300 foi gentilmente cedido pelo Dr. Andrew Mazar (Northwestern University). Após incubação dos anticorpos primários, as lâminas foram lavadas em TBS-T e específicas da espécie (anti-coelho, anti-ratinho e anti-cabra) anticorpo secundário conjugado com um polímero e de rábano a peroxidase marcada de dextrano foi aplicada e corados usando solução de DAB. As imagens foram capturadas em uma Leica DM5000B microscópio.

A crioconservação de tecidos xenoenxertados

fragmentos de tecido com 1,5 mm de tamanho × 1,5 mm (cerca de 10 partes por tubo) foram colocados numa solução de 10% de DMSO e FBS a 90% e armazenado a -80 ° C. fragmentos de tumor para CEE4 foram descongeladas à temperatura ambiente, lavou-se duas vezes com PBS e imediatamente enxertados sob a cápsula renal de ratos OVX dois. Sete semanas após a enxertia, os ratos foram dissecados e crescimento do tumor foi analisado.

Resultados

Estabelecimento de xenotransplantes sob a cápsula renal

tumores do endométrio foram obtidas a partir de um total de 11 pacientes . Quatro casos de Tipo II uterina carcinoma seroso (USC), 1 caso do tipo carcinoma de células claras II uterina (UCCC), 1 caso de tumor maligno mülleriano misto (MMMT), e 5 casos de carcinoma endometrioid endometrial (CEE) foram transplantadas sob a cápsula renal de camundongos NSG. Entre estes tumores, USC1, MMMT1, CEE2 e CEE 4, estabelecida e cresceu sob a cápsula renal (Tabela 1). As taxas de aceitação de enxerto foram calculados como a percentagem do número de gráficos que cresceram a partir do número total de fragmentos de tecido transplantado. USC1 e CEE4 ter taxas não diferiram se estradiol estava presente ou não nos ratos ovariectomizados. A taxa de enxertamento para tomar MMMT1 foi mais elevado na ausência de estradiol, enquanto CEE 2 tiveram taxas de levar mais alto com o estradiol, o que demonstra a dependência no diferencial de estrogénio para crescimento. Representação gráfica dos xenoenxertos de os 4 casos e corresponde a H E de coloração são mostrados nas Figs. 1 e 2. Os ratinhos albergando os xenoenxertos não exibiram sinais visíveis de agitação durante o período de tempo experimental, apesar de a carga tumoral pesada em alguns casos. Além disso, os ratos não morreu durante as 6-8 semanas de incubação tumor.

tecidos primários da uterina carcinoma seroso (USC1), foram transplantadas sob a cápsula renal de (OVX) ratos immunodefficient ovariectomizadas com E2 pellet. Às 6 e 8 semanas após o transplante, o tumor foi colhida e cortada em múltiplas 1,5 x 1,5 milímetros

3 partes, os quais foram enxertados sob a cápsula renal (1-2 unidades /rim) para a passagem contínua. Na passagem 3 (P3), os tecidos foram transplantadas em ratinhos OVX com ou sem E2. USC1 enxertos de tecidos e H E colorações são mostrados. T, tumor; K, do rim. Barra de escala; 200 um.

A) tecidos primários de tumor maligno mülleriano misto (MMMT1), foram transplantadas sob a cápsula renal de ratos do NSG que estavam OVX com ou sem E2. Às 6 e 8 semanas após o transplante, o tumor foi colhido e re-enxertados em outros ratos (1-2 unidades /rim). Em P2, a invasão de tecidos para MMMT1 pâncreas é mostrado. B) tecidos primários de adenocarcinoma endometrioid (CEE 2), foram transplantadas sob a cápsula renal de ratos OVX com E2. Às 6 e 8 semanas após o transplante, o tumor foi colhido e re-enxertados em outros ratos (1-2 unidades /rim). Em P4, os tecidos foram transplantadas em ratinhos OVX E2 sem sedimento. Em P1, invasão de tecidos CEE 2 para o útero é mostrado. C) os tecidos primários de adenocarcinoma endometrióide (CEE 4), foram transplantados sob a cápsula renal de ratinhos OVX com ou sem E2. Às 6 e 8 semanas após o transplante, o tumor foi colhido e re-enxertados em outros ratos (1-2 unidades /rim). No P3, invasão de tecidos CEE4 para o útero é mostrado. painéis da esquerda mostram H E colorações de tecidos primários. painéis Média mostrar enxertos de tecidos passadas e H E colorações. painéis da direita mostram invasão de enxertos de tecidos e seus H E colorações. T, tumor; K, rim; S, baço; P, pâncreas; Peri, peritoneu; U, Útero; V, vagina. Barra de escala; 200 um.

USC1 foi obtido de um paciente com diagnóstico de patologia final do estágio IA grau 3 USC, com invasão do espaço linfovascular (Lvsi). A taxa de absorção enxerto foi elevada para este tecido com o crescimento da maioria dos enxertos (Tabela 2). O exame histológico do tumor no rim não revelaram qualquer invasão significativa para o rim com uma fronteira distinta entre o rim e tumor (Fig. 1). Independentemente de estradiol estava presente ou não, os tumores cresceram USC1 de um modo semelhante (Fig. 1, Tabela 2).

MMMT1 a partir de um paciente com diagnóstico de tumor maligno mulleriana misturado com Lvsi resultou num enxerto tomar taxa de 42% na presença de estradiol e 79% de estradiol sem nos murganhos (Quadro 2). Além disso, os tumores eram menores em ratinhos tratados com estradiol em comparação com nenhum de estradiol (Fig. 2A). Ocorreu crescimento visível do lado de fora do rim e também infiltrada no rim. Notavelmente, os tumores em segunda passagem mostrou infiltração em todo o rim, com disseminação local e invasão do pâncreas, que no rato é muito próximo do rim (Fig. 2A, a Tabela 3). A propagação de tumores em ratinhos p2 com estradiol resultou em crescimento sub-óptima, indicando um efeito negativo sobre o crescimento de E2 de MMMT1.

CEE 2 foi derivado de um paciente com estágio IA grau 2 adenocarcinoma endometrióide sem Lvsi. CEE2 tumores foram propagados em ratos OVX com implantes E2. Para determinar E2 dependência, tecidos na passagem 4 foram transplantadas em ratos OVX sem E2. Como resultado, apenas um tecido de 16 cresceu (Quadro 2). H E de coloração mostrou áreas de necrose no tecido (Fig. 2B). Na presença de estradiol, tumores do rim CEE2 infiltrada e distribuídos localmente para órgãos proximais incluindo o útero e pâncreas com uma proporção disseminação local de 11,4% e 2,9%, respectivamente (Fig. 2B, a Tabela 3). proporção disseminação local foi calculada como a percentagem do número de órgãos invadidos excluindo rins a partir do número total de fragmentos de tecido transplantado (1-2 /peças de rim).

CEE4 originado a partir de um paciente com fase IIIC2 grau 3 endometrióide adenocarcinoma com vasta Lvsi. Este tumor foi a mais agressiva, com uma razão de enxerto tomada de 81% e 85% com ou sem estradiol, e invasão significativa e disseminação local de órgãos adjacentes. Tumor foi encontrado no útero, baço, fígado, pâncreas e peritoneu (Fig. 2C, a Tabela 3). Além disso, foram observados tumores metastáticos no fígado (Tabela 3). Não foi observada nenhuma dependência E2 para o crescimento deste tumor como tomar e se espalham as taxas foram semelhantes se E2 estava presente ou não. Para este tumor também avaliou se os tumores criopreservados poderia ser re-propagada. Após descongelação, os tecidos foram transplantados sob a cápsula renal de ratos duas semanas mais tarde, e 7, o crescimento do tumor foi observada com padrões invasivos e espalhadas similares como os xenoenxertos originais.

A expressão de ER, PR, e CD31 Ki67

USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 tecidos xenoenxerto, foram coradas para os receptores de hormonas esteróides, PR e ERa, o marcador de proliferação, Ki67 e do CD31 marcador de células endoteliais. Enquanto USC1 e CEE2 tinha coloração ponteada PR focal em áreas específicas do tumor, MMMT1 e CEE4 tinha um padrão de coloração mais difusa, com CEE4 exibindo o mínimo de coloração. Em xenoenxertos CEE 2, PR foi expresso principalmente na região da frente da invasão nos rins (Fig. 3). níveis ERa eram baixos a ausentar em USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 (Fig. 3). A maioria das células foram positivas para Ki67 em tecidos USC1, MMMT1, CEE2 e CEE 4, em 6 semanas após o transplante, indicando a proliferação de células de tumor activa (Fig. 3). CD31 coloração foi predominante dentro do xenotransplante tumoral em MMMT1, CEE2 e CEE4, especialmente em frente ao invasor. O nível de coloração CD31 em USC1 foi menor em comparação com os outros tumores (Fig. 3).

A imunocoloração para o PR, ERa, Ki67 e CD31 de USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 tecidos xenoenxerto foi feito. Os tumores dos ratos OVX (sem E2) para USC1, MMMT1 e CEE4 e com E2 para CEE2 são mostrados. tecidos USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 foram coradas na passagem 3, 2, 1 e 0, respectivelyT, Tumor; K, do rim. Barra de escala; 200 um.

Expressão de citoqueratinas, vimentina e E-caderina

invasão e metástase das células cancerosas está associada com a transição epitelial-mesenquimal (EMT), onde células epiteliais pode se transformar em móveis células mesenquimais [21]. xenotransplantes tumorais foram coradas para marcadores de EMT, incluindo citoqueratina, vimentina, e E-caderina e comparados com endométrio normal, endométrio hiperplásico e grau 1 cancro do endométrio (Fig. 4). epitélio glandular manchado fortemente positiva para citoqueratina no endométrio normal, hiperplasia e grau 1 câncer (Fig. 4). Curiosamente, xenotransplantes USC1 manchado positivo para citoqueratina no núcleo, enquanto MMMT1 e CEE2 exibiram coloração citoplasmática e CEE4 tinha muito fraca ou nenhuma coloração. Ambos os tecidos primários e xenoenxertados apresentaram padrões similares de coloração com a excepção de USC1 onde xenoenxertos coradas principalmente no núcleo para citoqueratina (Fig. 4, S1 Fig.).

coloração imuno-histoquímica foi feito para citoqueratina, vimentina e E -cadherin no xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um.

vimentina foi fortemente positiva em ambos os tecidos xenoenxertados e primários para USC1, CEE2 e tecidos CEE 4, bem como em células do estroma endometrial normal (Fig. 4, S2 Fig.). Grau 1 câncer e hiperplasia endometrial tecidos foram fracamente positivas para vimentina em ambas as células do epitélio e estroma (S2 Fig.). O componente glandular da MMMT1, não apresentaram coloração para vimentina em ambos os tecidos xenoenxertados e primárias, enquanto estroma foi positivo (Fig. 4, S2 Fig.).

coloração de E-caderina no endométrio e um grau normal e hiperplásica tumores localizados principalmente no compartimento glandular e apareceu citoplasmática (Fig. 4, S3 Fig.). Em contraste, foi observada coloração nuclear de E-caderina nos xenoenxertos de tumores primários e de USC1, CEE2 e CEE4 enquanto MMMT1 exibiram coloração citoplasmática escuro. A ausência de E-caderina na superfície de células de alterar as propriedades de adesão de células promovendo um fenótipo mais móveis.

A expressão de p53 e PTEN

A alteração genética mais prevalente no USC ocorre em o gene de p53 em aproximadamente 90% dos casos de [3]. A mutação na p53 frequentemente se manifesta como um aumento nos níveis de proteína p53 [22]. Os níveis de proteína p53 foram indetectáveis ​​nas glândulas e estroma do endométrio normal e hiperplásica e grau 1 cancro do endométrio (S4 Fig.). Do mesmo modo, a coloração para p53 era mínima a ausente em MMMT1, CEE2 e CEE 4 em ambos os tumores xenoenxertados e primários (Fig. 5, S4 Fig.). Em contraste, a coloração p53 foi fortemente positiva em USC1 xenoenxerto e tumores primários. Tipo I CEE é caracterizada por uma variedade de alterações genéticas com as mutações mais frequentes no gene PTEN [3]. Todos os tumores xenoenxertados e primárias coradas para PTEN com a excepção de CEE 2 que mostrou o mínimo de coloração nas células de tumor (Fig. 5, a Fig. S5). Comparativamente, o compartimento glandular da hiperplasia e grau 1 câncer endometrial não apresentaram coloração de PTEN enquanto endométrio normal corada para PTEN nas glândulas e estroma (S5 Fig.).

coloração imuno-histoquímica foi feito para p53, PTEN, uPA e uPAR em xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um.

A expressão do sistema de uroquinase do ativador do plasminogênio (UPA)

UPA e seu receptor Upar promove a proteólise que aumenta o crescimento do tumor e invasão. Ambos UPA e uPAR tem sido mostrado para ser expresso em cancros avançados [23]. Todos os xenoenxertos de tumores e tumores primários coradas positivamente para UPA (Fig. 5, Fig. S6). Da mesma forma, endométrio normal e hiperplásica e grau 1 do cancro endometrial, corada para UPA em ambos os compartimentos glandulares e estromais (S6 Fig.). Em contraste, a coloração para uPAR foi evidente nos tumores invasivos, foi observada MMMT1, CEE2 e CEE4 com pouca coloração em USC1 (Fig. 5). níveis Upar estavam ausentes no grau 1, câncer de endométrio e endométrio normal (S7 Fig.). Estes resultados sugerem que a expressão do uPAR pode contribuir para a natureza invasiva dos tumores endometriais em nosso sistema.

Discussão

O objetivo deste estudo foi estabelecer paciente derivado xenoenxertos de tumores de câncer endometrial primária tecidos para propagação continuou a fornecer um modelo para estudar invasão e metástase. Relatamos aqui estabelecimento de tumores de quatro pacientes de diferentes tipos de cancro do endométrio e notas que mostram diferencial capacidade invasiva e metastática. Os xenoenxertos reter características das características do tumor e de visualização originais que são exclusivas para tipo 1 ou tipo II cancro do endométrio.

Como tumores do endométrio se tornar mais agressivo e pouco diferenciado, expressão de receptores hormonais, ER e PR diminui, e sua capacidade de resposta hormonal muda. A dependência de enxertos de tumor para E2 foi demonstrada aqui. USC1, MMMT1 e CEE4 não exigia E2 para enxertos para crescer. Isto pode ser devido aos baixos níveis de ER nos tumores. Em contraste, CEE2 mantida E2 dependência apesar dos baixos níveis de ER detectados. E2 poderia ser um ligando para o receptor acoplado a proteína G 30 (GPR30), que é sobre-expresso em cancro do endométrio alto grau [24]. Além disso, é possível que GPR30 medeia os efeitos não-transcricionais de estrogénio sobre a activação da via PI3K /Akt neste tumor, e promover o crescimento [25]. Curiosamente, enquanto todos os quatro tecidos xenoenxerto foram ERa baixo para negativo, todos os tumores enxertados expressa diferentes níveis de PR. O PR células de CEE2 expressando foram localizados em torno da frente de invasão do rim. A razão para a expressão de PR nesta área particular e do seu papel na invasão permanece obscura. Na verdade, o mecanismo de acção da progesterona através do seu receptor em avançado, carcinoma do endométrio invasiva é desconhecido. Genes que são regulados por PR no endométrio normal são diferentes do que os de cancro do endométrio [26]. Dada a actividade pleiotrópico de PR, que é dependente do ambiente celular [15], é possível que o PR podem ter tanto growth-, invasion- metastasis- e promover ou inibir as acções sobre a célula de tumor. O nosso modelo de xenoenxerto paciente seria uma ferramenta útil para decifrar o papel da progesterona sobre estes tumores.

Para que as células de cancro para invadir, adesão célula-célula deve ser perdido para obter a motilidade celular e romper com o tumor tecido. EMT está envolvido na disseminação de células de carcinoma individuais a partir de tecidos de carcinoma primário, seja transitoriamente ou estavelmente [27], [28]. Perda de E-caderina é o passo inicial de EMT, permitindo a invasão e metástase em muitos carcinomas. Em USC1, CEE2 e CEE4, E-caderina foi localizada para o núcleo enquanto MMMT1, grau 1 do cancro endometrial, hiperplasia, e endométrio normal exibiram coloração citoplasmática escuro. Estudos demonstraram a localização nuclear de E-caderina em ambos os tumores benignos e malignos [29], [30]. fragmentos clivados de E-caderina tem sido relatado para se translocar para o núcleo [31]. Perda de intacta transmembranar E-caderina inevitavelmente diminuir célula para a adesão celular.

A urocinase do activador de plasminogénio do sistema (UPA) podem causar a degradação da matriz extracelular, aumentar a angiogénese e levar a invasão e metástase [32]. Há pouco conhecido sobre o sistema UPA no câncer de endométrio. Anteriormente identificamos um aumento da expressão de mRNA UPA em uma linha de células de carcinoma seroso uterina (SPEC2) em comparação com a linha de baixa qualidade endometrióide de células de carcinoma (Ishikawa) [33]. O receptor de uPAR tem sido demonstrado que estar presente em níveis mais elevados em pacientes com cancros do endométrio fase agressivos e tardios, [34] [32]. Em nosso estudo, UPA coloração foi observada em todos os tumores testados enquanto uPAR foi expressa nos tumores que invadiram através dos rins e órgãos locais, sugerindo que Upar poderiam ser direcionados para inibir a invasão no câncer de endométrio avançado.

Em resumo , nós estabelecemos com sucesso e propagada paciente derivado tumores do endométrio a partir de 4 casos, usando o sistema de xenoenxerto de cápsula renal. Este modelo pode ser usado para testar novos compostos, assim como terapias de combinação e é superior aos modelos de xenoenxerto de linhas celulares convencionais. Além disso, a biologia do tumor pode ser facilmente avaliada para identificar marcadores preditivos de respostas a regimes de tratamento, que actualmente não existem para o cancro endometrial avançado e recorrente. Apesar do bom prognóstico que está associado com o cancro do endométrio de baixo grau, especialmente quando detectado precocemente, os casos avançados são letais com muito pouco ou não há tratamentos eficazes para esta doença. Estudar tumores de pacientes como xenoenxertos irá fornecer as informações muito necessária para melhorar terapias para o câncer endometrial agressivo.

Informações de Apoio

S1 Fig.

Cytokeratin em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para vimentina em tumores primários e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s001

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S2 Fig.

Vimentin em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para vimentina em tumores primários e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s002

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S3 Fig.

E-caderina em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para a E-caderina em primária e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s003

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S4 Fig.

p53 em tecidos primários e xenoenxertados. coloração imuno-histoquímica foi feito para p53 em tumores primários e xenoenxertado USC1, MMMT1, CEE2 e CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s004

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S5 Fig.

PTEN em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para PTEN no primário e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. As setas mostram células positivas PTEN em CEE2. K, rim; Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s005

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S6 Fig.

UPA em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para a UPA no primário e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 3, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feita em tecidos normais e hiperplásicas endométrio e grau 1 câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s006

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S7 Fig. níveis

Upar em tecidos primários e xenoenxerto. coloração imuno-histoquímica foi feito para uPAR em primária e xenoenxerto USC1, MMMT1, CEE2 e tumores CEE4 na passagem 5, 1, 1 e 0, respectivamente. A coloração foi feito por endométrio normal e grau 1 tecidos de câncer endometrial. Castanho significa coloração positiva. Barra de escala; 200 um

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s007

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S8 Fig.

CHEGAR lista

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116064.s008

(PDF)

Reconhecimentos

Estamos gratos à Oncologia Ginecológica da equipe, Doreine Carson , Cary Passaglia, Racher Bers, Dr. Mario J. Pineda e Dr. Kristina M. Mori para consentindo pacientes e obtenção de tecidos, o Dr. Andrew P. Mazar para fornecer anticorpo uPAR (ATN-617), Vanida A. Serna e Lindsey M. Butler para ajuda técnica, e as instalações do rato Histologia e fenotipagem de núcleo no Centro de Câncer Robert Lurie na Universidade Northwestern.