Abstract

Fundo

Perturbações em moléculas de adesão celular são ligados a alterações em complexos caderina-catenina e provavelmente desempenham um papel importante na invasão e metástase; seu impacto sobre as fases pré-cancerosas precoces permanece ainda desconhecido. Nós mostramos a superexpressão ALCAM em lesões orais precoces e seu acúmulo citoplasmático em carcinoma de células escamosas oral (CCEO) para ser um preditor de progressão da doença e mau prognóstico. Este estudo testou a hipótese de que alterações no E-caderina e β -catenina expressões são eventos iniciais na tumorigênese via oral, associados com o prognóstico da doença, e correlacionar com perturbações na expressão ALCAM.

Métodos

Expressões de e-caderina e β-catenina foram analisados ​​no mesmo grupo de 105 epidermóide estudados, 76 lesões orais e 30 tecidos orais normais por imunohistoquímica e correlação com os parâmetros clínico e prognóstico. O efeito de siRNA mediada knockdown ALCAM sobre E-caderina e β -catenina foi determinada utilizando western blot, microscopia confocal e análise de RT-PCR em células de câncer bucal.

Resultados

Uma perda significativa de membranoso e-caderina e β-catenina foi observada expressão do normal, hiperplasia, displasia de carcinoma epidermóide estudados (p

tendência 0,001); e correlacionado com a acumulação citoplásmica ALCAM em epidermóide estudados (p = 0,006). A análise multivariada revelou perda de membrana β-catenina e ALCAM /β-catenina

acumulação nuclear /citoplasmático-se preditores significativos para a fase clínica tardia (p 0,001, OR = 8,7; p = 0,006, OR = 9,9, respectivamente) e nodal metástases (p = 0,003, OU = 3,8; p = 0,025, OR = 3,4, respectivamente). A regressão de Cox mostrou E-caderina perda de membrana /expressão citoplasmática ALCAM [p 0,001; HR = 4,8] para ser prognosticadores adversos independentes em carcinoma epidermóide estudados. siRNA silenciamento mediado de ALCAM resultou em aumento concomitante da E-caderina e β-catenina tanto a nível de transcrição e proteínas.

Conclusões

As perdas de expressões E-caderina e β-catenina são precoces eventos em tumorigênese bucal; suas associações com o comportamento do tumor agressivo e recorrência da doença sublinham o seu potencial como marcadores prognósticos. Correlação da perda de E-caderina e β-catenina com a acumulação ALCAM citoplasmática ambos

in vitro Comprar e no

in vivo

sugere que estas mudanças dinâmicas no sistema de adesão celular pode desempenhar papel fundamental no câncer oral .

Citation: Kaur J, Sawhney M, Dattagupta S, Shukla NK, Srivastava A, Walfish PG, et al. (2013) Significado Clínico da expressão alterada de β-catenina e E-caderina em Displasia Oral e Câncer: potencial ligação com ALCAM Expression. PLoS ONE 8 (6): e67361. doi: 10.1371 /journal.pone.0067361

editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japão

Recebido: 30 de novembro de 2012; Aceito: 16 de maio de 2013; Publicação: 28 de junho de 2013

Direitos de autor: © 2013 Kaur et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O financeira apoio a este trabalho a partir de Mount Sinai Fundação de Toronto da Vinci Gala Fundraiser, Alex e Simona Shnaider Cadeira no cancro de tiróide, Canadian Institutes of Health Research para o presidente em cancro avançado Diagnostics, George Knudson Oakdale Fundo Torneio de Golfe Raiser, eo Mount Sinai Departamento Hospital do Fundo de Pesquisa de Medicina é reconhecido agradecimento. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Perturbações na modulação orquestrada de causar defeitos de adesão celular em arquitectura dos tecidos que desempenham papéis críticos no desenvolvimento do câncer [1] – [3]. E-caderina está localizada na superfície de células epiteliais nas regiões de contacto célula-célula, conhecidos como adherens junções e está implicada na adesão célula-célula em tecidos epiteliais [4] – [6]. β-catenina interage com caderinas através do seu domínio citoplasmático. α-catenina liga a E-caderina e complexo β-catenina a filamentos de actina. A dissociação do complexo caderina-E-catenina da membrana celular é importante na progressão maligna. Em muitos cancros epiteliais, membranosa E-caderina for perdida e β-catenina dissocia-se no citoplasma e acumula-se no núcleo como um factor de transcrição, concomitantemente com a progressão tumoral [5]. Down-regulação do membranoso E-caderina e β-catenina, e acúmulo citoplasmático /nuclear de β-catenina foram previamente relatados em vários tipos de câncer e uma promessa como marcadores prognósticos [7].

O desenvolvimento de epidermóide oral carcinoma de células (CEB) é um processo de várias etapas que envolve interações entre vários fatores, como substâncias cancerígenas associadas ao tabaco intra-oral, noz de areca, betel quid e consumo de álcool, e /ou infecções virais [8], [9]. Epidermóide estudados são frequentemente precedidos por lesões clinicamente evidente, muitas vezes leucoplasia, e o risco de vários tipos de câncer é 5-10 vezes maior em pacientes com carcinoma epidermóide estudados precedidas por leucoplasia [8], [10]. Estas lesões, muitas vezes evoluir para o câncer se não for tratada [11]. Uma taxa de transformação média anual de 1% foi proposta com base em vários estudos que relatam transformação de 5% observada em 5 anos [11], [12]. Na Índia, mais de 80% de carcinoma epidermóide estudados surgir de lesões orais existentes (OLS) [13], [14]. A capacidade de prever o resultado da OLS continua a ser um grande desafio para a intervenção precoce. A detecção precoce da OLS que irá desenvolver em tumores invasivos é necessário melhorar o mau prognóstico dos pacientes com câncer bucal.

Estas alterações dinâmicas da adesão celular que se manifesta por dissociação de membranoso complexo E-caderina-β-catenina estão implicados na perda de coesão epitelial como um acontecimento importante na invasão e metástase. Activado leucocitária a molécula de adesão celular (ALCAM) /MEMD /CD166) é uma glicoproteína transmembranar de superfamília de imunoglobulinas que medeia a adesão célula-célula através de ambos homofica (ALCAM-ALCAM) e heterofílica (ALCAM-CD6) interacções [15], [16]. Nós demonstramos expressão ALCAM é aumentada em OLS e seu acúmulo citoplasmático em CCEO é um preditor de progressão da doença e mau prognóstico [17]. Aqui, procurou-se investigar o significado clínico da E-caderina e β-catenina expressão em secções de tecido de série do mesmo conjunto de pacientes de diferentes fases da doença por imuno-histoquímica, para identificar alterações na proteína específica do palco e determinada a sua relação com a expressão ALCAM. As evidências experimentais em suporte de correlações entre perturbações na expressão ALCAM e alterações na expressão de E-caderina e β-catenina foram fornecidas pela curta ARN interferente (siRNA) mediada knockdown ALCAM e determinando a mudança na expressão de todas estas três proteínas, tanto a transcrição e os níveis de proteína.

Materiais e Métodos

Tissue espécimes

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Todos Instituto de Ciências Médicas da Índia, Nova Deli, Índia ética humana. Para a análise imuno-histoquímica de tecidos ou amostras de biópsia de CCEO, displasia, hiperplasia e tecidos orais histologicamente normais ressecado cirurgicamente foram obtidos a partir Unidade de Oncologia Cirúrgica do Dr. B. R. Hospital Ambedkar Instituto Rotary Câncer, Instituto de Ciências Médicas da Índia, Nova Deli, Índia, com o consentimento informado por escrito antes dos pacientes.

Características clínicopatológicos de pacientes

Cento e cinco pacientes com tumores primários (faixa etária, 29-75 anos, com idade média de 40 anos) submetidos a cirurgia do câncer bucal curativa, na Unidade de Oncologia cirúrgica do Dr. BR Ambedkar Instituto Hospital do Câncer Rotary, Instituto de Ciências Médicas da Índia, Nova Deli, Índia foram incluídos neste estudo após obtenção de consentimento prévio por escrito dos pacientes. Os dados clínicos e patológicos, incluindo o estadiamento clínico TNM (tumor, nódulo, metástase baseado em Union International Center le Cancer TNM de classificação), local da lesão, diferenciação histopatológica, idade e sexo foram registrados em um anteriormente pré-concebidas performa como descrito [ ,,,0],17]. O diagnóstico foi baseado no exame clínico e análise histopatológica das amostras de tecido. A distribuição local de casos de CCEO foi: mucosa bucal (36), a língua (35), alvéolo (12), lábio (6) e outros sites (16), incluindo sulco ginigivobuccal, palato duro, palato mole, trígono retromolar e assoalho da boca. Os tumores foram histologicamente classificados CECs bem, moderadamente ou pouco diferenciados. Biópsias de OLS com evidência histológica de hiperplasia (56 casos) e displasia (20 casos) também foram incluídos neste estudo. A distribuição local da OLS se: mucosa bucal (53), a língua (12), alvéolo (5), o lábio (4) e sulco ginigivobuccal (2). Trinta tecidos não malignos tomadas a partir de um local distante de carcinoma epidermóide estudados (com confirmação histológica do epitélio oral normal para cá para que se refere aos tecidos normais como orais) também foram avaliadas para a expressão ALCAM. Após a excisão, os tecidos foram imediatamente congelados em N líquido

2 e armazenadas a -80 ° C até uso posterior e uma parte foi recolhido em 10% de formalina e embebidos em parafina para análises histopatológicas e imuno-histoquímicas.

imunohistoquímica

As secções de parafina embutido (5 mm de espessura) de amostras de tecido orais humanos foram coradas com hematoxilina e eosina para análise histopatológica e imuno foi feito em cortes seriados como descrito anteriormente por Sawhney

et al

. [17]. Resumidamente, secções de tecido após a recuperação de antigénio em tampão de citrato foram incubadas com anticorpos anti-E-caderina ou anti-β-catenina (0,2 ug /mL) (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA) durante 16 h a 4 ° C. Os anticorpos foram detectados utilizando anticorpo secundário biotinilado e estreptavidina marcada com peroxidase usando complexo Dako LSAB plus kit (Dako Labs, Glostrup, Dinamarca) utilizando diaminobenzidina (DAB) como cromogénio. Em controlos negativos, o anticorpo primário foi substituído por IgG não-imune do mesmo isotipo para assegurar a especificidade. secções de tecido do cancro da mama com imunopositividade conhecida para a E-caderina ou β-catenina foram utilizados como controlos positivos em cada lote de seções analisadas.

Critério positiva para imuno coloração

A imunocoloração foi avaliada em aleatoriamente seleccionado cinco zonas não sobrepostas das secções de tecido com células epiteliais mais do que 80%. Para o E-caderina, coloração específica na membrana foi definida como coloração positiva. As lâminas foram pontuados como segue: ≥50% de células de tumor que mostram a imunorreactividade foram classificados como positivo para a expressão de E-caderina, enquanto que aqueles que mostra a imunocoloração em 50% de células tumorais foram classificados como negativos [18]. Para a expressão da proteína β-catenina, coloração específica na membrana /citoplasma /núcleo foi definida como coloração positiva. Para a coloração de membrana as lâminas foram pontuados como se segue: células tumorais ≥50% mostrando imunorreactividade foram classificadas como positivas, enquanto que aqueles que mostra a imunocoloração em 50% de células tumorais foram classificados como negativos [18]. Para coloração nuclear /citoplasmática de p-catenina as lâminas foram pontuados como se segue: 0, 10% de células de tumor que mostram a imunorreactividade; 1 = 10-30% de células de tumor que mostram a imunorreactividade; 2, ≥31-50 células de tumor que mostram a imunorreactividade%; 3, 50% de células tumorais mostrando imunorreatividade. A investigação imuno-histoquímica era cego, isto é, as lâminas foram codificadas e patologista não teve conhecimento prévio da carga tumoral local, disseminação lymphonodular e classificação dos epidermóide estudados, enquanto marcando a imuno.

Follow-up Study

Setenta e dois dos 105 pacientes com tumores, submetidos a tratamento de CCEO primária 2002-2005, poderia ser seguido regularmente na clínica de acompanhamento, enquanto que 33 pacientes foram perdidos para follow up. status de sobrevivência de pacientes foi verificado e atualizado regularmente a partir de registros do registro do tumor, Instituto de Hospital do Câncer Rotary, em dezembro de 2010. De acordo com nosso protocolo, pacientes com tumores com T

1 e T

2 tumores foram tratados com radioterapia radical ou cirurgia por si só, ao passo que maioria dos pacientes com T

3 e T

4 doenças foram tratados com uma combinação de cirurgia radical seguida de radioterapia radical de pós-operatório, como descrito [19]. Os pacientes foram acompanhados periodicamente e foi gravado tempo de recorrência. Se um paciente morreu durante o follow-up, o tempo de sobrevida do paciente foi censurada no momento da morte. histórico médico, exame clínico e avaliação radiológica foram usadas para determinar se a morte resultou de câncer recorrente (recidiva de pacientes) ou de qualquer outra causa. sobreviventes livres da doença foram definidos como pacientes livres de evidência clínica e radiológica de recidiva local, regional ou distante no momento do último follow-up. Loco-regionais de recaídas /morte foi observada em 32/72 (44%) pacientes monitorizados neste estudo. Os pacientes que não apresentaram recidiva estavam vivos até o final do período de acompanhamento. Entre os 33 pacientes que foram perdidos de seguimento, o número de mortes não pôde ser verificada; portanto, a sobrevivência global não poderia ser considerada como um parâmetro separado em nosso estudo. sobrevida livre única doença dos pacientes foi estudado. sobrevida livre de doença foi expressa como o número de meses a partir da data da cirurgia para a recidiva loco-regional. Os pacientes foram monitorados por um período de mediana de 24 meses e máximo de 91 meses.

Análise Estatística

Os dados imuno-histoquímica foram submetidos à análise estatística usando SPSS 17.0 software (Chicago IL). As relações entre a E-caderina, β-catenina e expressão ALCAM e os parâmetros clínico foi testado na análise univariada pelo teste do qui-quadrado, o teste do qui-quadrado de tendência, teste exato de Fisher e análise de regressão logística. Para determinar preditores independentes para tumorigênese, análise de regressão logística foi realizada de forma gradual para as variáveis ​​individuais, parâmetros clinicopatholgical e as proteínas E-caderina, β-catenina e Alcam. Diferentes combinações de variáveis ​​foram gerados para avaliar a associação entre essas combinações e prognóstico do paciente. Estudos de acompanhamento foram analisados ​​por Kaplan-Meier e teste de Riscos Proporcionais de Cox. sobrevida livre única doença foi avaliada no presente estudo, como o número de mortes devido à progressão da doença não permitiu uma análise estatística confiável. A associação entre o resultado do paciente e as variáveis ​​foi avaliada pelo teste log-rank. Dois valores de p lados foram calculados e p . 0,05 foi considerado significativo

ARN de interferência mediada ALCAM Knockdown

A cabeça humana e linha de células de carcinoma escamoso pescoço, células SCC-4 foram mantidas em DMEM contendo 10% de FBS, 100 ug /ml de estreptomicina, 100 U /ml de penicilina a 37 ° C em atmosfera humidificada de 5% de CO

2. células SCC-4 foram transitoriamente transfectadas utilizando o reagente Hiperfect (Qiagen) e um duplex blunt-ended dos oligonucleotídeos de RNA, 5′-AAG CCC GAU GGC UCC CCA GUA UU-3’and 5′-AAU ACU GGG GAG CCA UCG GGC UU -3 ‘. células SCC-4 foram tratadas com concentrações variáveis ​​de siARN (1-15 nM) e com várias concentrações de reagente Hiperfect (1-4,5 mL). ALCAM siRNA (15 nM) com 4,5 mL de reagente de Hiperfect durante 48 h verificou-se ser a melhor concentração com a máxima eficiência de transfecção (95%) e silenciamento máximo da expressão do gene ALCAM (dados não mostrados). Quarenta e oito horas após a transfecção, as células tratadas com siRNA foram utilizados em experiências subsequentes.

Transcrição Reversa-PCR Análise

O ARN total foi isolado a partir de células SCC-4 (controle e transfectantes siRNA) como descrito anteriormente [20]. A amplificação por PCR foi realizada num volume total de 20 ul, contendo 3 ul de tampão de ADNc transcrito de forma inversa, PCR 10X, dNTP 10 mM, 20 ^ M de cada iniciador e 1U de polimerase Taq (Gibco BRL, Gaithersburg, MD). Após 5 minutos de desnaturação inicial, 35 ciclos de amplificação de 1 minuto a 94 ° C, 2 minutos à temperatura de recozimento e específica 1 minuto a 72 ° C foram realizados, seguido por um alongamento de 10 minutos a 72 ° C. Para a amplificação de cDNA ALCAM iniciador directo, 5′-GTC TGG GCA ATA GTG ACT CC-3 ‘e 5′-AAC CAT TGC AAG TGG AAA CC-3 reverter’ foram utilizados. Para o E-caderina de ADNc, iniciador de sentido directo 5′-CAC CAG CAC GTA AGC CCT AA-3 ‘e o iniciador inverso 5′-GGC TGA ACC TTT GGA TTC CT-3′ foram usados. Para β catenin-cDNA, iniciador directo 5’-GAA ACG GCT TTC AGT TGA GC-3 ‘e iniciador inverso 5′-CTG GCC ATA TCC ACC AGA GT-3′ foram utilizados. β-actina foi utilizado como um controlo interno para assegurar que a quantidade igual de RNA foi usado no controlo e células transfectadas siARN. Para cDNA β-actina, iniciador directo 5’- CAG CCA TGT ACG TTG CTA TCC AG -3 foram usadas ‘e iniciador 5′- GTT TCG TGG ATG CCA CAG GAC reverter -3’. Os produtos de PCR foram separados em gel de agarose a 1,5%, corado com brometo de etídio e visualizada com AlphaEase FC software (versão 3.1.1) As intensidades das bandas de PCR foram quantificados com Chemi Imager IS-4400 (Alpha Innotech Corp., CA) como descrito anteriormente [14].

imunotransferência

ALCAM siARN transfectadas SCC-4 células para células de controlo não tratadas 48 h e foram usadas para a preparação de extractos celulares por fervura o sedimento de células em tampão de SDS-lise. Resumidamente, o extracto de célula total (100 ug de proteína /pista) foram resolvidas por SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de nitrocelulose [21]. As membranas de nitrocelulose foram bloqueadas com leite não gordo a 10% durante a noite a 4 ° C e sondadas com anti-ALCAM; anticorpos E-caderina e β-catenina (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA) durante 2 h a 37 ° C. Em seguida, as membranas foram sondadas com anticorpos secundários para estas proteínas (anti-cabra 1:5000 e diluição de anti-rato 1:2000). As manchas foram sondado com α-tubulina para normalizar para a carga de proteína igual. As manchas foram reveladas utilizando Reagente reforçada quimioluminescência (ECL) (Amersham, Buckinghamshire, Reino Unido) como descrito [21].

Microscopia Confocal Laser

SCC-4 células cultivadas em lamelas foram tratadas com ALCAM ARNsi durante 48 h e processadas para microscopia confocal a laser como descrito anteriormente [21]. As células foram lavadas em PBS de Dulbecco (DPBS), fixadas em metanol durante 5 minutos. a -20 ° C e incubou-se com anticorpo anti-ALCAM, E-caderina e anticorpos β-catenina (10 ng /ml) obtidos a partir de SantaCruz Biotechnologies Inc., Santa Cruz, CA. Depois de enxaguar em DPBS, as lamelas foram incubadas com anticorpo secundário biotinilado (anti-coelho /cabra, LSAB + Kit, DAKO Cytomations, Glostrup, Dinamarca) durante 45 min. a 37 ° C, seguida por incubação com estreptavidina conjugada com fluorocromo, isotiocianato de fluoresceína (FITC) (DAKO Cytomations, Dinamarca). Daí em diante, as lamelas foram contra-coradas com iodeto de propídio (PI) (10 mg /ml; Sigma-Aldrich, MO) durante 30 seg. As lamelas foram então lavadas e montadas em meio de montagem. As lâminas foram examinadas com Confocal Laser Scanning Microscope como descrito anteriormente [21].

Resultados

Análise imunohistoquímica da expressão Membranous E-caderina em Normal Oral tecidos, hiperplasia, displasia e CCEO

E-caderina na membrana das células epiteliais foi observada em 27/30 (90%) dos tecidos orais histologicamente normais com expressão citoplasmática ocasional (Tabela 1, Figura 1A). Uma perda significativa de E-caderina foi observada expressão membranosa em hiperplasia [19/56, 34% (Figura 1B), em comparação com os tecidos orais normais (3/30, 10%), [P = 0,015; OR = 4,6, 95% C.I. = 1,2-17,2], e, 12/20, 60% displasia (Figura 1C) [H /D: p = 0,06; OR = 2,9, 95% C.I. = 1,0-8,4]. análise de tendências Qui-quadrado mostrou perda significativa de expressão membranoso E-caderina em tecidos de diferentes estágios de desenvolvimento de câncer oral (normal, hiperplasia, displasia e câncer invasivo; p

tendência 0,001). Foi observada perda de E-caderina expressão membranosa em 61/105 (58%) epidermóide estudados (Tabela 1, Figura 1D) e foi associado com o estágio clínico tarde (p = 0,006 Cl, OR = 3,1, 95% = 1,3-7,0), aumento da carga tumoral (p = 0,03; OR = 2,4; IC95% = 1,1-5,3), e metástase nodal (p = 0,04; OR = 2,4; IC95% = 1,1-5,3)

histologicamente normal. secções de tecido que mostram a imunorreactividade membranosa para a e-caderina (a), e proteínas β-catenina (G). Hiperplásico (B), displásico (C), as secções de tecido CEB (D) representando perda de coloração membranosa para E-caderina. Hiperplásico (H), displásico (I), em secções de tecido CEB (j) que descreve perda de coloração membranosa para β-catenina. Em controlos negativos, para a E-caderina (E) e β-catenina (F), o anticorpo primário foi substituído por IgG não-imune do mesmo isotipo para assegurar a especificidade. secções de tecido do cancro da mama utilizados como controlo positivo apresentou coloração da membrana para E-caderina (K) e proteínas β-catenina (G). aumento original X 200.

Associação de Perda de Membranous E-caderina Expression com Doença Resultado

Setenta e dois pacientes com tumores poderiam ser acompanhados por um período máximo de 91 meses (mediana de 24 meses). Kaplan-Meier análise de sobrevivência e modelo de riscos proporcionais de Cox revelou que os pacientes com tumores positivos para E-caderina tinha aumentado a sobrevida livre de doença mediana (DFS) de 74 meses, em comparação com aqueles com perda de imunopositividade membranoso (mediana DFS = 18 meses) [p = 0,001; HR = 3,9; IC 95% = 1,6-9,6] (Figura 2A)

A: perda de membranoso caderina-E (E-cad

-) expressão, B:. Perda de membranoso β-catenina (β-CATM

-) expressão, C: perda de e-caderina e membranoso β-catenina (e-cad

– M

/β-gato – expressão), D: perda da membrana ALCAM citoplasmática positiva e e-caderina (e-cad

– /ALCAM C

+).

Análise imunohistoquímica da expressão β-catenina em tecidos oral normal, hiperplasia, displasia e CCEO

β -catenina foi principalmente presente na membrana das células epiteliais em 27/30 (90%) de tecidos orais histologicamente normais; ocasionalmente, também foi observada coloração citoplasmática /nuclear (Tabela 1, Figura 1G). Uma perda significativa de expressão membrana β-catenina foi observada em hiperplasia [20/56, 36%, p = 0,01; OR = 5,0, 95% C.I. = 1,3-18,6, (Figura 1H)], em comparação com os tecidos orais normais (3/30, 10%), e na displasia em comparação com hiperplasia [14/20, 70%, (Figura 1I), p = 0,008; OR = 4,2, 95% C.I. = 1,4-12,6]. Aumento significativo na acumulação citoplasma /núcleo de β-catenina foi observada em comparação com displasia como hiperplasia (p = 0,046; OR = 3,1; 95% C.I. = 1,0-9,5) (Tabela 1). análise de tendências Qui-quadrado mostrou perda significativa de expressão membranoso β-catenina e aumento da sua acumulação citoplasma /núcleo em tecidos de diferentes estágios do câncer oral (normal, hiperplasia, displasia, e cancros invasivos; p

tendência 0,001 e p

tendência = 0,003 respectivamente).

a perda da expressão membranoso β-catenina foi observada em 65 dos 105 (62%) carcinoma epidermóide estudados (Figura 1J, Tabela 1) e foi associada com o estágio clínico tardio (p = 0,001, OR = 7,4; IC95% = 3,1-18,1), o aumento da carga tumoral (p = 0,001, OR = 4,1; IC95% = 1,8-9,4) e metástase nodal (p = 0,003, OR = 3,7, 95% CI = 1,6-8,9). Em epidermóide estudados 28 de 105 (27%) casos apresentaram acúmulo citoplasmático /nuclear de β-catenina e foi associada com o estágio clínico tardio (p = 0,014, OR = 3,6; IC95% = 1,2-10,6) e carga tumoral (p = 0,025 , OR = 2,8; IC95% = 1,1-7,2).

Associação de Perda de membranous β-catenina Expression com doença Resultado

Perda de membranoso imunopositividade β-catenina foi associada à doença reduzida -sobrevida livre (mediana DFS = 15 meses) em comparação com pacientes com tumores de membrana β-catenina positivos (mediana DFS = 78 meses) [p 0,001; HR = 7,8; IC 95% = 2,7-22,3] (Figura 2B).

Associação entre a E-caderina e β-catenina nas lesões da boca e carcinoma epidermóide estudados

Foi observada associação significativa entre a perda de membranoso E-caderina e expressões β-catenina em OLS (p = 0,001, OR = 16,7, IC 95% = 5,3-52,7, Tabela 2) e carcinoma epidermóide estudados (p = 0,001, OR = 8,8; IC95% = 3,6-21,7, Tabela 2). Perda de membranoso E-caderina e β-catenina quando tomado como um fenótipo (E-cad

– /β-gato M

-) correlacionou com o estágio do tumor avançado (p = 0,004, OR = 3,2, 95% IC = 1,4-7,1), metástase nodal (p = 0,005, OR = 3,1; IC95% = 1,4-6,9) e estágio clínico tardio (p 0,001, OR = 5,5; IC95% = 2,2-13,4). análise de tendências Qui-quadrado mostrou perda significativa de membranoso E-caderina e β-catenina (E-cad

– /β-gato M

-) em diferentes estágios da carcinogênese oral (normal, hiperplasia, displasia e câncer invasivo ; p

tendência = 0,008). Além disso, a perda de E-cad

– /β-gato M

– imunopositividade foi significativamente associada com sobrevida livre de doença reduzida [mediana DFS = 14 meses, em comparação com beta-catenin tumores positivos e E-caderina de membrana com sobrevida livre de doença mediana de 71 meses. (p 0,001; HR = 4,7; IC95% = 2,1-10,1)] (Figura 2C)

Associação entre a e-caderina, β-catenina e ALCAM expressão em lesões orais

para explorar o significado de ALCAM em desenvolvimento biológico de cancro invasivo e metástases, é importante para determinar a sua correlação com perturbações na expressão de componentes aderentes de junção. As associações entre expressão de proteínas de E-caderina, β-catenina e ALCAM foram determinados (Tabela 2) quanto a expressão da proteína ALCAM também foram analisadas na mesma coorte de pacientes num estudo anterior [17]. Perda de expressão membranoso β-catenina foi encontrado para ser significativamente associada com o global (p = 0,018; OR = 3,3; IC95% = 1,2-8,8, Tabela 2) e citoplasmático (p = 0,008; OR = 3,6; IC95% = 1,4-9,3, Tabela 2) expressão ALCAM.

Entre as hiperplasias analisados ​​(n = 56) neste estudo, a perda de membranoso e-caderina foi encontrado para ser significativamente associada com perda de expressão β-catenina (p 0,001, OR = 24,0, IC 95% = 5,6-102). Perda de expressão membranoso β-catenina foi encontrado para ser significativamente associada com a expressão ALCAM global (p = 0,017; OR = 4,5, 95% C.I. = 1,2-16,0). Perda de membrana de E-caderina e β-catenina em conjunto como um fenótipo (E-cad

– /β-CATM

-) correlacionou com imunopositividade geral ALCAM na hiperplasia. Entre as displasias analisados ​​(n = 20), a perda de expressão membranoso β-catenina foi encontrado para ser significativamente associada com ALCAM imunopositividade citoplasmático (p = 0,05; OR = 9,0; IC95% = 1,0-100)

Associação entre a e-caderina, β-catenina e Expressão ALCAM em CCEO

As associações entre ALCAM, e-caderina e β-catenina expressões foram determinados em CCEO (Tabela 2). Perda de expressão membranoso E-caderina foi encontrado para ser significativamente associada com a expressão ALCAM citoplasmático (p = 0,038, OR = 2,2, 95% C.I. = 1,0-5,0). A perda da expressão membrana β-catenina significativamente correlacionada com a expressão ALCAM global (p = 0,001; OR = 3,9, IC de 95% = 1,7-9,0), e imunopositividade ALCAM citoplasmático (p = 0,002; OR = 3,7, IC de 95% = 1.6- 8.7). Perda de membrana de E-caderina e β-catenina quando tomado como um fenótipo (E-cad

– /β-gato M

-). Correlacionou com imunopositividade geral e citoplasmática ALCAM em CCEO (Tabela 2)

preditores independentes para a transição de normal para ol e Cancerous Fenótipo

para determinar os preditores independentes para a transição de normal para OL, análise de regressão logística foi realizada de forma gradual. Dessas variáveis, os parâmetros que emergiram significativa em análises uni e multivariada estão resumidos na Tabela 3. ALCAM expressão citoplasmática (p = 0,024; OR = 11,6; IC95% = 1,4-98,2) surgiu para ser o fenótipo mais significativo para a transição de mucosa oral normal para OL. Perda de expressão β-catenina membranoso emergiu como o indicador mais significativo para a transição de hiperplasia de lesões displásicas (p = 0,01, OR = 4.2, 95% C.I. = 1,3-12,6). A análise de regressão logística multivariada revelou que a perda de expressão da caderina-membranoso é o fenótipo mais significativo para a transição de OL para CEB (p = 0,02; OR = 2,0; IC95% = 1,1-3,7)

desfecho clínico dos pacientes

preditores independentes para os parâmetros clínicos, a carga tumoral, envolvimento ganglionar e estágio clínico da CEB.

para determinar os preditores independentes de parâmetros clínicos, a carga tumoral, envolvimento ganglionar e clínica fase, análise de regressão logística foi realizada de um modo passo a passo para a e-caderina, β-catenina e ALCAM individualmente, ou em combinação, em 105 epidermóide estudados (Tabela 3). perda de membrana β-catenina (p = 0,001, OR = 4,2; 95% CI = 1,8-10,2) e β-catenina nuclear acumulação citoplasmática e /ou (p = 0,027, OU = 3,1; 95% CI = 1,1-8,3) foram os mais preditores significativos para aumentar a carga tumoral. perda da membrana β-catenina (p = 0,003, OR = 3,8; IC95% = 1,6-9,3) e expressão ALCAM /β-catenina nuclear acumulação geral /citoplasmático (p = 0,025, OR = 3,4; IC95% = 1,2-9,7 ) foram os preditores mais significativos para a metástase nodal. marcadores combinados, expressão ALCAM /β-catenina nuclear /acúmulo citoplasmático (p = 0,006, OR = 9,9; IC95% = 1,9-51,5) e perda de membrana β-catenina (p 0,001, OR = 8,7; IC95% = 3,3 -22,8) foram os preditores mais significativos para a fase clínica tardia (Tabela 3).

Associação de alterações no e-caderina, β-catenina e expressão ALCAM com a evolução da doença.

associação significativa foi observada entre a doença da redução do sobrevivência e estágio do tumor [p = 0,03; Taxa de risco (HR) = 2,5; 95% C.I. = 1,1-5,6].

Por possível aditivo capacidade prognóstica análise de sobrevivência de Kaplan-Meier e modelo de riscos proporcionais de Cox foram utilizados para analisar diferentes combinações de potenciais biomarcadores para avaliar a associação de alterações em vários biomarcadores com o resultado clínico . Embora várias combinações foram encontrados para ser significativo (Tabela 3), o fenótipo mais importante que surgiu como prognosticador adverso foi a seguinte: o aumento da expressão citoplasmática ALCAM + membranosa perda de E-caderina; ALCAM C

+ /E-cad

– (p 0,001; HR = 4,8; IC95% = 2,2-9,9, Figura 2D). (Tabela 3)

Com base em nossos dados,